一种DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体提供了一种DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用。本发明专利技术提供的DNA聚合酶突变体包括4种单点突变体、6种双突变体、4种三突变体和1种四突变体，与野生型DNA聚合酶BstX相比，突变体在77℃下半衰期更长；四突变体效果更好，其半衰期大约是野生型DNA聚合酶的3倍。通过本发明专利技术所提供的构建方法得到的DNA聚合酶突变体热稳定性更好，在较高温度下合成DNA时，表现出较高的热稳定性，具有较大的应用潜力。具有较大的应用潜力。具有较大的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]BstDNA聚合酶，在Lamp中具有高特异性、高灵敏性、简便、快速和低成本等特点，而成为一种使用广泛的商用DNA多重置换扩增酶，市面上大多数产品最适反应温度是60℃，在70℃时反应活性会受一定影响，80℃时基本不反应，故需要对蛋白进行定向改造以获得热稳定性较高的BstDNA聚合酶。
[0003]蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过化学、物理和分子生物学的手段进行基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质以满足人类对生产和生活的需求。理性设计是蛋白质工程改造中最常用的方法，利用计算机辅助分子模型结合定点突变，以实现蛋白质功能优化，如提高催化活性、热稳定性、耐酸碱性等。为了有效优化蛋白质的热稳定性，Markus Wyss等人于2001年提出Consensus Concept理论。和常规蛋白质理性设计方法基于蛋白质精确结构
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA聚合酶突变体，其特征在于：所述DNA聚合酶突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列上进行突变，所述突变位点选自M34L、E169K、N463P、C556K中一种或一种以上组合。2.如权利要求1所述的DNA聚合酶突变体，其特征在于：所述突变位点为M34L、E169K、N463P、C556K、M34L/E169K、M34L/N463P、M34L/C556K、E169K/N463P、E169K/C556K、N463P/C556K、M34L/E169K/N463P、M34L/E169K/C556K、E169K/N463P/C556K、M34L/N463P/C556K或M34L/E169K/N463P/C556。3.如权利要求1所述的DNA聚合酶突变体，其特征在于：M34L对应的单点突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3；E169K对应的单点突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.4；N463P对应的单点突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.5；C556K对应的单点突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.6；M34L/E169K对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.7；M34L/N463P对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.8；M34L/C556K对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.9；E169K/N463P对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.17；E169K/C556K对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.11；N463P/C556K对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.12；M34L/E169K/N463P对应的组合突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.13；M34L/E169K/C556K对应的...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊艳，秦朕龙，田军龙，
申请(专利权)人：苏州津易臻生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：