一种简便的IgG抗A（B）抗体效价的微柱检测方法技术

本发明专利技术提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，包括如下步骤：步骤一，向微量柱中加入血型抗体对应的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中该微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过进而分离游离红细胞和凝集红细胞；步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入微量柱中，离心；步骤三，根据反应产物的1个孔中的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗

【技术实现步骤摘要】
一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法。

技术介绍

[0002]ABO胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn，简称HDFN)主要是指母
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胎ABO血型不合所致的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。由于A或B型母亲的天然抗B或抗A抗体绝大多数属于IgM抗体，不能通过胎盘进入胎儿体内，而O型母亲的天然抗A和抗B抗体主要属于IgG抗体，能够通过胎盘进入胎儿体内。因此，ABO血型不合溶血病主要见于O型母亲、A或B型胎儿。
[0003]通常是母体的IgG抗A或抗B抗体经过胎盘进入胎儿血循环，从而破坏胎儿红细胞导致宫内胎儿贫血(死胎)或新生儿黄疸(核黄疸)等。HDFN可发生在第一胎，分娩次数越多，发病率越高，且一次比一次严重。为了预防HDFN，有必要进行母亲的ABO血型抗体效价监测。
[0004]ABO血型抗体效价是指ABO血型抗体在一定介质条件下与相应红细胞抗原结合，出现不同程度的红细胞凝集，根据凝集强度间接反映出血型抗体结合抗原的能力。然而，由于血型抗体活性较高的情况下，均与相应红细胞发生较强反应性凝集，从而无法区分受检者标本ABO血型抗体结合抗原的能力差异。因此，传统方法是采用巯基试剂处理待检血清(或血浆)中的IgM性质的抗
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A或(和)抗
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B抗体后，必须将血清(或血浆)连续倍比稀释，观察稀释后血清(或血浆)中的IgG性质的抗
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A或(和)抗
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B抗体与相应血型抗原红细胞的凝集反应强度，具体地，(1)需排列并标记10支试管，将经巯基试剂处理后含有IgG性质的抗
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A或抗
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B抗体待检血清(或血浆)分别应用0.9％氯化钠溶液按照1:1比例连续倍比稀释至1：512，(2)逐一在各试管中加入血型抗体对应2
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5％A试剂红细胞或B试剂红细胞1滴后混匀，将混匀后各试管于37℃水浴箱中孵育30分钟后，将试管内红细胞洗涤3次，加入1滴抗人球蛋白试剂离心，立即判读实验结果。通常确定凝集强度为1+时稀释度的倒数，即可判读为该标本的抗体效价值。适用于观察不同受检者血标本之间ABO血型抗体活性的差异比较，也适用于同一受检者不同时期ABO血型抗体活性的变化监测。
[0005]然而上述传统方法存在如下缺点：
[0006](1)实验过程中需要消耗大量的试管、移液吸管、移液器头和0.9％生理盐水等，操作繁琐；
[0007](2)实验过程中反复移液和稀释极易出现加样误差，导致实验结果精准度不高；尤其是不同检测人员的实验结果可比性较差；
[0008](3)实验操作过程相当繁琐且耗时特别长(一个血标本检测时间不少于60分钟)等。
[0009]因此，目前需要一种较为简便的测定IgG抗A(B)抗体效价的方法。

技术实现思路

[0010]为了改变传统ABO血型抗体效价的繁琐实验检测过程，本专利技术提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法。
[0011]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0012]本专利技术提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，包括如下步骤：
[0013]步骤一，向微量柱中加入相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中该微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过进而分离游离红细胞和凝集红细胞；
[0014]步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入上述微量柱中，然后离心；
[0015]步骤三，根据反应产物的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗
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A或抗
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B抗体效价值。
[0016]进一步地，步骤一中相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞的浓度为2～5％。
[0017]进一步地，上述填充物内含有抗人球蛋白试剂。
[0018]进一步地，步骤二中灭活采用的试剂为巯基试剂，处理的参数为：37℃，15～30分钟。
[0019]进一步地，上述巯基试剂为2
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Me(二疏基乙醇)。
[0020]进一步地，巯基试剂与待测样本的体积比为1：1。
[0021]进一步地，上述待测样本为血清或血浆。
[0022]进一步地，步骤二中，待测样本被0.9％氯化钠溶液稀释至终浓度为1:256。
[0023]进一步地，步骤三的判读标准如下：
[0024][0025]本专利技术的第二方面是提供基于上述微柱检测方法的产品。
[0026]进一步地，上述产品包括微量柱或微柱凝胶卡、上述微柱检测方法中所采用的试剂和一产品说明书；该产品说明书指示了上述微柱检测方法的步骤。
[0027]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0028](1)实验过程中无需反复移液和稀释过程，减少加样误差，显著提高了实验结果精准度；不同检测人员的实验结果可比性强。
[0029](2)实验结果判读简单直观。
[0030](3)实验过程中节省了大量的试管、移液吸管、移液器头、微柱卡和0.9％生理盐水等，显著降低实验成本。
附图说明
[0031]图1显示了本专利技术一实施例中已知效价为1:32的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
[0032]图2显示了本专利技术一实施例中已知效价为1:64的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
[0033]图3显示了本专利技术一实施例中已知效价为1:128的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
[0034]图4显示了本专利技术一实施例中已知效价为1:256的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果；
[0035]图5显示了本专利技术一实施例中已知效价为1:512的样本在不同稀释比例下的抗人球蛋白检测卡的结果。
具体实施方式
[0036]本专利技术针对现有检测ABO血型抗体效价技术存在操作繁琐、耗时的缺陷，创造性地提供了一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，其包括如下步骤：
[0037]步骤一，向微量柱中加入相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中该微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过；
[0038]步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入上述微量柱中；
[0039]步骤三，根据反应产物的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗
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A或抗
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B抗体效价值。
[0040]在本专利技术中，上述微量柱的设计类似微柱凝胶卡中的微柱凝胶管，其底部设置有具有分子筛功能的凝胶填充物，通过调节填充物间隙或筛孔大小，确保只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种简便的IgG抗A(B)抗体效价的微柱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，向微量柱中加入血型抗体对应的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞，其中所述微量柱中设置有具有分子筛功能的填充物，其只允许游离红细胞通过进而分离游离红细胞和凝集红细胞；步骤二，将灭活的待测样本用氯化钠溶液稀释至特定终浓度，加入所述微量柱中，离心；步骤三，根据反应产物的凝集强度的强弱，直接判读IgG抗
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A或抗
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B抗体效价值。2.根据权利要求1所述的微柱检测方法，其特征在于，所述相应血型抗体的A型试剂红细胞或B型试剂红细胞的浓度为2～5％。3.根据权利要求1所述的微柱检测方法，其特征在于，步骤二中灭活采用的试剂为巯基试剂，处理的参数为：37℃，15～30分钟。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志强，李丽玮，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院，
类型：发明
国别省市：