一种慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种慢性原发性疼痛(CPP)小鼠模型的构建方法及应用，涉及实验动物模型技术领域。本发明专利技术慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法包括以下步骤：(1)通过测定小鼠机械痛阈基线水平筛选纳入模型构建的小鼠；(2)采用低频经皮电刺激(LF

【技术实现步骤摘要】
一种慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于实验动物模型
，具体涉及一种慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]慢性原发性疼痛(Chronic primary pain,CPP)是慢性疼痛中第一大类，是指一个或多个解剖区域、持续或反复发作超过3个月的疼痛，伴有严重情感障碍(焦虑、愤怒/沮丧或抑郁)和/或功能障碍(干扰日常生活和社交交往等受到影响)，且其他诊断无法解释。慢性原发性疼痛是一种疾病，诊断代码为MG 30.0，主要包括慢性弥漫性疼痛、复杂性区域疼痛综合征、慢性原发性头痛或口面部疼痛(如慢性偏头痛、三叉神经自主性疼痛、慢性灼口综合征)、慢性原发性内脏痛(如肠易激综合征)、慢性原发性肌肉骨骼疼痛等。由于慢性原发性疼痛病因不明，机制不清且无特效治疗，已成为临床上治疗的难点。然而，现存的多种慢性疼痛模型均存在炎症、组织损伤等明确诱因，不适合用于慢性原发性疼痛相关的研究。因此，迫切需要建立一种符合慢性原发性疼痛特征的动物模型，以便对其进行深入的机制研究，并为相应的临床治疗提供理论支持和靶点。
[0003]降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide,CGRP)是由37个氨基酸组成的多功能神经肽，广泛分布于外周和中枢神经系统伤害性通路中，与其受体信号通路参与疼痛的调控。研究发现在原发性三叉神经痛患者脑脊液中CGRP表达升高，且参与介导三叉神经系统伤害性神经元的敏化。此外在慢性偏头痛患者外周血中CGRP表达较阵发性偏头痛明显升高，阻断CGRP受体与抑制CGRP表达均能缓解疼痛。其他慢性原发性疼痛疾病诸如肠易激综合征和纤维肌痛综合症的患者及其模型动物中亦存在CGRP的异常高表达。基于CGRP高表达在慢性原发性疼痛病理机制中的关键作用，成功构建的慢性原发性疼痛动物模型应特征性地重现CGRP在疼痛传导通路的高表达。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法及应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：
[0006](1)通过测定小鼠机械痛阈基线筛选正常痛阈小鼠进行模型构建；
[0007](2)采用低频经皮电刺激(LF
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PENS)步骤(1)筛选得到的小鼠，经痛行为验证获得慢性原发性疼痛小鼠模型。
[0008]作为本专利技术所述慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法的优选实施方式，所述步骤(1)中小鼠机械痛阈基线小于0.6克或在正态分布中位于(μ
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2σ,μ+2σ)外的动物剔除。
[0009]作为本专利技术所述慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法的优选实施方式，所述步骤(2)中的低频电刺激参数为：频率2
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5赫兹，波宽0.5毫秒，直流电压8
‑
10伏，总脉冲数100
‑
140个。优选地，所述提供低频电刺激的电极为铂丝或银/氯化银电极。
[0010]作为本专利技术所述慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法的优选实施方式，所述步骤(2)中的低频电刺激的电极定位点为小鼠左侧腘窝，位于坐骨神经走行处表面皮肤。
[0011]作为本专利技术所述慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法的优选实施方式，所述步骤(1)中的小鼠为成年C57BL/6小鼠(雌雄均可)。
[0012]作为本专利技术所述慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(2)中的验证包括：在低频电经皮刺激1小时起测量小鼠机械痛阈、6小时起测量温度痛阈、1
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2周起测量焦虑样行为、2
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3周起测量小鼠抑郁样和记忆等行为。
[0013]作为本专利技术所述慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法的优选实施方式，所述机械痛阈采用von Frey实验测定；所述热痛阈采用Hargreaves实验和Tail flick实验；冷痛阈采用丙酮实验测定；所述焦虑样行为采用旷场实验、高架十字迷宫实验测定；所述抑郁样行为采用糖水偏好实验、强迫游泳、悬尾实验测定；所述认知记忆行为采用新物体识别实验测定。
[0014]所述von Frey实验具体为：使用von Frey纤维丝(0.04
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1.4克)垂直作用于小鼠足底皮肤表面，并且在长达5秒/五个重复刺激中至少有一个诱发阳性反应(缩足/舔足)，两次测量间隔不少于1分钟，结合up
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down法确定50％缩足阈值作为其机械痛阈值。所述Hargreaves实验具体为：使用足底测试仪激光发出部位对准小鼠足底中心处皮肤，启动后开始计时，当小鼠因温度升高而出现阳性缩足/舔足反应后自动停止照射，统计热刺激后撤足的潜伏期时间。需重复测量3次，两次测量间隔至少3分钟，取其平均值作为其热撤足潜伏期。所述Tail flick实验具体为：使用圆筒固定器限制小鼠活动，鼠尾自然垂下，末端1/3缓慢伸入50℃恒温水浴锅中，记录甩尾反应的出现时间，要求重复测量3次，两次间隔至少3分钟，取其平均值作为其热撤足潜伏期。所述丙酮实验具体为：使用钝头注射器吸取50微升丙酮喷射于小鼠足底中心，记录其阳性反应的潜伏期时间和剧烈程度(缩足1分，抖足2分，舔足2分，持续行为1分，可累计)，要求重复测量3次，两次间隔至少1分钟，取其平均值作为冷撤足潜伏期和行为学评分。
[0015]所述糖水偏好实验具体为：小鼠禁水1天后独立饲养，笼内附有两个分别容纳40毫升蒸馏水和2％蔗糖溶液的饮水器，24小时后取出饮水器分别称量并计算偏好度(饮糖水量/总饮水量)，偏好度下降程度反应抑郁样行为情况；所述强迫游泳(FST)具体为：使用均匀透明、内径30厘米的塑料筒为游泳箱，保持水位超过小鼠体长和水温舒适，记录小鼠5分钟内游泳时间和不活动时间，取不活动时间反应抑郁样状态；所述悬尾实验(TST)具体为：通过悬空固定鼠尾末端使其身体自然下垂且无法抓尾逃生，记录小鼠5分钟内挣扎时间和不活动时间，取其不活动时间反应抑郁样状态。
[0016]所述旷场实验(OFT)具体为：使用40立方厘米开口亚克力箱为旷场箱，以中心30平方厘米区域为中心区，500lux光线下记录小鼠10分钟内探索和逃避中心区的时间反应焦虑样状态。所述高架十字迷宫实验具体为：2个开放臂和2个封闭臂(30
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5平方厘米)垂直组成迷宫，离地面约1.2米，记录小鼠6分钟内进入开放臂、封闭臂次数，取其躲入封闭臂的次数占比来反应焦虑状态。
[0017]新物体识别实验(NOR)具体为：使用两套物体A和B作为认知对象。记录旷场箱内小鼠5分钟内与两个A物体的交互时间(包括嗅、推、攀爬行为，单次时间＜1秒计1秒)。保留小
鼠偏好的A物体后更换另一个A物体为B物体，再次记录小鼠5分钟内与A、B物体的交互时间，计B物体交互时间与总交互时间的比值为偏好程度，即NOR指数，用于反映工作记忆的水平。
[0018]所述的慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法在探究本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种慢性原发性疼痛小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过测定小鼠机械痛阈基线筛选正常痛阈小鼠进行模型构建；(2)采用低频经皮电刺激步骤(1)筛选的小鼠，经痛行为验证获得慢性原发性疼痛小鼠模型。2.根据权利要求1所述的慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中将小鼠机械痛阈基线水平小于0.6克或在正态分布中位于(μ
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2σ,μ+2σ)外的动物剔除，其余纳入模型构建。3.根据权利要求1所述的慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中的低频电参数为：频率2
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5赫兹，波宽0.5毫秒，直流电压8
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10伏，总脉冲数100
‑
140个。4.根据权利要求1所述的慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中的低频电刺激的电极定位点为小鼠左侧腘窝，位于坐骨神经走行处表面皮肤。5.根据权利要求1所述的慢性原发性疼痛小鼠模型构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的小鼠为成年C57BL/6小鼠。...

【专利技术属性】
技术研发人员：周利君，冯霞，谈智，刘安然，林震嘉，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：