一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用，属于生物制备技术领域，包括将软枣猕猴桃果实的汁液进行3500～4500g离心5～15min取上清液a、上清液a6500～7500g离心15～25min取上清液b、上清液b9500～10500g离心25～35min取上清液c、上清液c119000～121000g离心65～75min取沉淀1，将沉淀1用无菌PBS缓冲液吹打重悬得到重悬液1，重悬液1119000～121000g离心65～75min得到沉淀2，PBS缓冲液重悬沉淀2，即得。该方法操作简单、快速，制备得到的AAELNs具有显著的抗氧化活性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物制备
，尤其涉及一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]类外泌体样纳米颗粒(Exosome
‑
like Nanoparticles，ELNs)是细胞所分泌的纳米级小泡，双层磷脂包围的囊泡状结构，携带独特的生物活性物质(如脂质、蛋白质、miRNAs和次级代谢物等)。植物ELNs中蛋白含量丰富，多数为膜蛋白，可维持ELNs结构的稳定以及作为生物活性成分发挥作用。植物ELNs通常为可食用植物分泌的，具有安全可靠、副作用小的优点，还可作为药物载体。
[0003]目前，大量药食同源的植物被广泛用于各种疾病的治疗，而从这些植物中分离出的多糖、多酚等物质被视为治疗疾病的主要功能成分。近年来研究表明，植物中除了上述化学成分外，自身能够分泌ELNs。其中，软枣猕猴桃(Actinidia arguta)，别名软枣子、奇异莓等，是猕猴桃科的一种多年生落叶藤本植物，其果实较小，皮薄无毛。果实中含有叶黄素、黄酮、多酚、天然肌醇和矿物质(P、Ca、Fe、Zn等)等，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降低胆固醇、调节记忆力、抗糖尿病、抗过敏和抗疲劳等功能。因此，软枣猕猴桃是一种价值高、用途广、具有广阔发展前景的果实，但关于软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒(Actinidia arguta exosome
‑
like nanoparticles，AAELNs)的制备和功能作用研究暂无报道。/>
技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用，该方法制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒结构完整、稳定性好，还具有显著的抗氧化活性。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0007]将软枣猕猴桃果实的汁液进行3500～4500g离心5～15min取上清液a、上清液a 6500～7500g离心15～25min取上清液b、上清液b 9500～10500g离心25～35min取上清液c、上清液c 119000～121000g离心65～75min取沉淀1，将沉淀1用无菌PBS缓冲液吹打重悬得到重悬液1，重悬液1119000～121000g离心65～75min得到沉淀2，PBS缓冲液重悬沉淀2，即得软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。
[0008]优选的，所述离心的温度为2～6℃。
[0009]优选的，所述软枣猕猴桃果实的汁液的制备包括将软枣猕猴桃果实研磨得到。
[0010]本专利技术还提供了上述制备方法制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。
[0011]优选的，所述软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的平均粒径为157.8nm，Zeta电位为
‑
23.07mV。
[0012]本专利技术还提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒在制备抗氧化产品中的应
用。
[0013]优选的，所述软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒具有清除ABTS
+
·
和/或DPPH
·
的活性。
[0014]本专利技术还提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒在制备抗氧化损伤产品中的应用。
[0015]优选的，所述氧化损伤为H2O2所致的氧化损伤。
[0016]优选的，所述产品提高GSH
‑
Px和T
‑
SOD的活力，降低MDA的含量。
[0017]相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0018]本专利技术提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用，本专利技术采用超高速梯度离心的方法制备软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒，该方法操作简单、快速，制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒结构完整性以及稳定性好，具有显著的抗氧化活性和抗氧化损伤活性，且该产品来源于可食用的软枣猕猴桃，安全性高，为抗氧化产品的筛选提供了一种更加安全可靠的新选择。
附图说明
[0019]图1为AAELNs的形貌表征，A为AAELNs超高速离心后沉淀在离心管底部的图片；B：透射电子显微镜观察AALENs图片；
[0020]图2为AAELNs的粒径和Zeta电位表征，A为粒径分布；B为Zeta电位；
[0021]图3为AAELNs的RNAs和蛋白质表征结果，A：琼脂糖凝胶电泳图；B：SDS
‑
PAGE结果图；
[0022]图4为不同储存时间和温度下AAELNs的粒径变化结果，A为不同的储存温度AAELNs的粒径随时间的变化结果；B为
‑
80℃条件下，不同的储存时间AAELNs的粒径变化结果；
[0023]图5为AAELNs在不同pH(1.2、6.8和7.8)溶液中对其粒径的影响；
[0024]图6为AAELNs的抗氧化性结果，A为AAELNs对DPPH
·
清除率；B为AAELNs对ABTS
+
·
清除率；
[0025]图7为RAW264.7细胞对AAELNs的吸收的结果(标尺＝100μm)；
[0026]图8为AAELNs对RAW264.7细胞活力的影响；
[0027]图9为H2O2对RAW264.7细胞活力的影响；
[0028]图10为AAELNs对RAW264.7细胞GSH
‑
Px、T
‑
SOD的活力和MDA的含量的影响，A为GSH
‑
Px的活力；B为T
‑
SOD的活力；C为MDA的含量。
具体实施方式
[0029]本专利技术提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0030]将软枣猕猴桃果实的汁液进行3500～4500g离心5～15min取上清液a、上清液a 6500～7500g离心15～25min取上清液b、上清液b 9500～10500g离心25～35min取上清液c、上清液c 119000～121000g离心65～75min取沉淀1，将沉淀1用无菌PBS缓冲液吹打重悬得到重悬液1，重悬液1119000～121000g离心65～75min得到沉淀2，PBS缓冲液重悬沉淀2，即得软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。
[0031]在本专利技术中，所述软枣猕猴桃果实的汁液的制备优选的包括将软枣猕猴桃果实研
磨得到，本专利技术采用研磨工艺保证了制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的结构完整性。本专利技术采用超高速梯度离心方法能够除去植物汁液中的果肉组织、杂细胞、细胞片段、细胞器等物质，从而制备纯化软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。作为一优选的实施方式，依次进行3700～4200g离心7～13min取上清液a、上清液a 6600～7300g离心17～23min取上清液b、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将软枣猕猴桃果实的汁液进行3500～4500g离心5～15min取上清液a、上清液a6500～7500g离心15～25min取上清液b、上清液b9500～10500g离心25～35min取上清液c、上清液c119000～121000g离心65～75min取沉淀1，将沉淀1用无菌PBS缓冲液吹打重悬得到重悬液1，重悬液1119000～121000g离心65～75min得到沉淀2，PBS缓冲液重悬沉淀2，即得软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述离心的温度为2～6℃。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述软枣猕猴桃果实的汁液的制备包括将软枣猕猴桃果实研磨得到。4.一种权利要求1～3任意一项所述制备方法制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红艳，夏广军，
申请(专利权)人：延边大学，
类型：发明
国别省市：