一种高效的玉米根尖病原菌侵染及原生质体悬液制备的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效的玉米根尖病原菌侵染及原生质体悬液制备的方法，所述原生质体悬液的制备方法，包括如下步骤：1)将待制备原生质体的植物器官在预处理液中进行质壁分离预处理，得到预处理后的植物器官，所述预处理液为包含L

【技术实现步骤摘要】
一种高效的玉米根尖病原菌侵染及原生质体悬液制备的方法


[0001]本专利技术涉及生物领域，具体的说，涉及一种原生质体悬液的制备方法，尤其是玉米根尖病原菌侵染的原生质体的制备方法。

技术介绍

[0002]细胞是构成植物机体的基本功能单元。基于细胞的增殖、分化和生长，细胞从原初细胞逐渐分化形成具有不同功能的特化细胞、组织和器官，该过程本质是具有相同遗传物质的细胞进行基因差异表达的结果(刘德培等,1994)。为了揭示细胞基因选择性表达的调控机理，现代生物技术的发展使对特定部位或特定时期细胞进行单细胞测序成为可能。然而建立不同类型细胞的基因表达谱首先要将不同类型的细胞群体分开，以收集足够数目的单一类型细胞进行转录组测序。目前，单一类型细胞分离主要有两种形式(董燕等,2015)：一种是通过显微切割分离单个细胞，提取RNA并反转录为cDNA，然后进行扩增和测序。上述方法需要较为复杂的操作技术，某些寡拷贝基因难以在后续扩增和测序中进行检测。另一种方法是分离同一类型细胞进行测序，即通过流式细胞仪或者显微操作收集一定数量的单一类型细胞，然后进行RNA提取和测序。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.原生质体悬液的制备方法，其特征在于,包括如下步骤：1)将待制备原生质体的植物器官在预处理液中进行质壁分离预处理，得到预处理后的植物器官，所述预处理液为包含L
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半胱氨酸和山梨糖醇的水溶液；2)将步骤1)中预处理后的植物器官切片，在酶解液中酶解处理，得到含有原生质体的粗提液，所述酶解液为包含纤维素酶、果胶酶和离析酶的水溶液；3)将步骤2)中含有原生质体的粗提液进一步纯化，得到原生质体混合液。2.根据权利要求1中的方法，其特征在于，所述步骤1中的预处理液中L
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半胱氨酸的的浓度为0.0003g/ml，山梨糖醇的浓度为0.03g/ml。3.根据权利要求2中的方法，其特征在于，所述步骤1中预处理条件为将1g植物器官，转移到预处理液中，用铝箔纸包严以避光，置于22℃摇床35rpm/min处理50min使根尖细胞发生质壁分离；其中植物器官与预处理液的用量比为每1g植物器官：5mL预处理液。4.根据权利要求1中的方法，其特征在于，所述酶解液中纤维素酶的的浓度为0.01g/ml、果胶酶的浓度为0.003g/ml、离析酶的浓度为0.005g/ml。5.根据权利要求4中的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹言勇，段灿星，韩胜博，李会勇，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：