单克隆抗体Ab614荧光复合物及应用制造技术

本发明专利技术公开了单克隆抗体Ab614荧光复合物及其应用，其中复合物，由单克隆抗体Ab614与藻红蛋白PE之间通过偶联剂交联得到，偶联剂选自：及其衍生物。本发明专利技术方案，提供了一种新的荧光复合物，有效克服了流式细胞检测技术中的背景干扰等方面的因素，有效改善了细胞分选的精度和效率。有效改善了细胞分选的精度和效率。有效改善了细胞分选的精度和效率。

【技术实现步骤摘要】
单克隆抗体Ab614荧光复合物及应用


[0001]本专利技术是关于生物检测技术，特别是关于一种单克隆抗体Ab614荧光复合物及其应用。

技术介绍

[0002]目前，藻红蛋白与抗体的偶联物，都是通过氨基，羧基，醛基，巯基等化学基团，将抗体和藻红蛋白以共价键相结合的方式，形成特定的抗体荧光复合物。藻红蛋白分子量大于抗体的分子量，抗体的分子量是150KD，而藻红蛋白分子量是240KD。由于藻红蛋白的荧光性能大于小分子荧光化合物，所以被用于流式细胞仪中。现有的流式细胞技术中，受限于背景信号和光源等的限制，在分选效率和精度等方面受限明显，限制了工作效率和应用成本控制。
[0003]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种单克隆抗体Ab614荧光复合物及应用。
[0005]本专利技术的实施例提供了单克隆抗体Ab614荧光复合物，由单克隆抗体Ab614与藻红蛋白PE之间通过偶联剂交联得到，偶联剂选自：
[0006][0007]在本专利技术的一个或多个实施方式中，藻红蛋白PE具有(alpha
‑
beta)6gamma亚基结构，最大吸收峰：565
±
5nm，荧光发射峰：578
±
5nm。
[0008]在本专利技术的一个或多个实施方式中，单克隆抗体Ab614是针对人T细胞上的CD3分子的特异性抗CD3单克隆抗体。其中，Ab614(IgG4)的抗体序列如SEQ ID NO.1所示:EVQLLESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEW VGRIRSKINNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHDNFYGSTYSWFADWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKELVVTQEPS
LTVSPGGTVTLTCRSSTGVVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGATNYRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAIYFCVLWYSNHWVFGGGTKLTVLRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。
[0009]在本专利技术的一个或多个实施方式中，如前述的单克隆抗体Ab614荧光复合物在流式细胞检测中的应用。
[0010]与现有技术相比，根据本专利技术实施方式的单克隆抗体荧光复合物及应用，有效地提高了流式检测技术的细胞识别精度和分选效率，并且具有良好的成本控制性能和推广性能。
附图说明
[0011]图1是根据本专利技术一实施方式的人CD3 T细胞流式细胞仪检测结果；
[0012]图2是根据本专利技术一实施方式的PE
‑
Ab614抗体荧光复合物样品1(PE
‑
Ab614
‑
1)和样品2(PE
‑
Ab614
‑
2)的流式细胞仪检测结果；
[0013]图3是根据本专利技术一实施方式的归一化图谱；
[0014]图4是根据本专利技术一实施方式的抗体Ab614的HPLC图；
[0015]图5是根据本专利技术一实施方式的藻红蛋白PE的HPLC图；
[0016]图6是根据本专利技术一实施方式的样品1的HPLC图谱；
[0017]图7是根据本专利技术一实施方式的样品2的HPLC图谱。
具体实施方式
[0018]下面结合附图，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。
[0019]除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
[0020]人CD3 T细胞的检测：
[0021]1、取生长状态良好的人CD3 T细胞，计数，离心，取上清，收集细胞，用1％PBSB的缓冲液重悬，调整细胞密度到2
×
106个/mL，加入96孔U底板中，100μL/孔，置于4℃封闭30分钟；
[0022]2、用1％PBSB缓冲液洗涤细胞1次，离心，去上清；
[0023]3、每孔加入100μL的1％PBSB缓冲液，重悬细胞，分别取5μL或20μL的PE
‑
AB614加入到细胞孔中；设置对照孔，分别加入20μl的FITC
‑
CD3(BD公司，Becton,Dickinson and Company)为对照品2，APC
‑
CD3(BD公司，Becton,Dickinson and Company)为对照品3；设置空白细胞对照孔(对照品1)，细胞混匀，置于4℃孵育1小时；
[0024]4、用1％PBSB缓冲液洗涤细胞2次，离心，去上清；
[0025]5、用4％多聚甲醛(生工生物公司)重悬细胞，200μL/孔；
[0026]6、上流式细胞仪(BD公司，C6)检测。
[0027]7、流式细胞仪检测结果如下图1所示。
[0028]偶联剂J4的制备
[0029]1、对硝基苯丙氨酸甲酯盐酸盐的制备
[0030]1L干燥烧瓶中加入800mL甲醇，搅拌下用冰盐浴冷却至
‑
5℃～0℃，然后用恒压漏斗缓慢滴入120mL二氯亚砜(SOCl2)，滴完后再反应30min，然后加入42g(0.2mol)对硝基苯丙氨酸，室温下反应10h。TLC监测反应进程，待反应完全后，抽滤出白色固体，用乙醚洗三次，将滤液浓缩至混浊，再减压抽滤出白色固体，用乙醚洗三次，合并固体并烘干得产品。该反应产率为96.5％，产物的TLC：Rf＝0.65(展开剂：氯仿∶甲醇＝5∶1)。
[0031]2、对硝基苯丙氨酰胺的制备
[0032]250mL烧瓶中加入13g(50mmol)对硝基苯丙氨酸甲酯盐酸盐，加入100mL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体Ab614荧光复合物，由单克隆抗体Ab614与藻红蛋白PE之间通过偶联剂交联得到，所述偶联剂选自：2.如权利要求1所述的单克隆抗体Ab614荧光复合物，其特征在于，所述藻红蛋白PE具有(alpha
‑
beta)6gamma的亚基结构，最大吸收峰：565
±
5nm，荧光发射峰：578
±
5nm。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：李松羊，李强，
申请(专利权)人：江苏博华医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：