【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】载体化抗体和其用途
[0001]相关申请
[0002]本申请要求于2020年9月9日提交的美国临时专利申请序列号63/075,898以及于2021年4月26日提交的美国临时专利申请序列号63/179,990的优先权，所述美国临时专利申请的全部公开内容通过引用特此并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，所述序列表已以ASCII格式以电子方式提交并以全文引用的方式特此并入(所述ASCII副本创建于2021年9月8日，命名为“404217
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技术介绍
[0005]治疗性抗体代表一类有效的药物，它们对感兴趣的靶标具有高度特异性。然而，许多抗体需要较大的个体剂量和定期施用才能达到预期的治疗效果。对于在患者的血清中发现的高浓度抗体靶标尤其如此。例如，抗补体成分5(C5)抗体用于治疗C5介导的疾病，如阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、视神经脊髓炎谱系障碍(NMOSD)和非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)，由于血清中的C5丰度高，故需要多次大剂量的抗体。
[0006]病毒传递机制为传统抗体治疗提供了一种有吸引力的替代方法，特别是对于在患者的血清中发现的高浓度抗体靶标。具体来说，单次施用具有抗体重链和轻链表达盒的病毒载体有可能在受试者的血清中产生持续治疗水平的抗体，从而无需持续施用高剂量的抗体。
[0007]因此，本领域需要改进的病毒载体以在受试者中有效并持续地表...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组腺相关病毒(rAAV)基因组，所述rAAV基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：第一肝特异性转录调控元件，第一编码序列，所述第一编码序列编码可操作地连接到第一信号序列的包括抗体重链的第一多肽，以及第一聚腺苷酸化序列；和(b)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：第二肝特异性转录调控元件，第二编码序列，所述第二编码序列编码可操作地连接到第二信号序列的包括抗体轻链的第二多肽，以及第二聚腺苷酸化序列，其中所述第一编码序列和所述第二编码序列的表达产生包括所述抗体重链和所述抗体轻链的抗体。2.根据权利要求1所述的rAAV基因组，其中所述第一转录调控元件和/或所述第二转录调控元件包括选自由以下组成的组的启动子元件：人白蛋白启动子、人运甲状腺素蛋白(TTR)启动子、人甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子、人ApoH启动子、人SERPINA1(hAAT)启动子和其肝特异性调控模块，例如人ApoE/C
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I肝控制区(HCR)1或2。3.根据权利要求1或2所述的rAAV基因组，其中所述第一转录调控元件和/或所述第二转录调控元件包括包含与选自由SEQ ID NO:25、27、66、68、69、116和117组成的组的序列至少90％相同的核酸序列的启动子元件。4.根据权利要求1至3中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括与SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列。6.根据权利要求1至5中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列组成。7.根据权利要求1至3中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括与SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。8.根据权利要求1至4中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列。9.根据权利要求1至5中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列组成。10.根据权利要求1至9中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒和/或所述第二表达盒还包括内含子元件，所述内含子元件相对于所述第一编码序列和/或所述第二编码序列位于5'并且相对于所述转录调控元件位于3'。11.根据权利要求10所述的rAAV基因组，其中所述内含子元件是外源性内含子元件，任选地其中所述外源性内含子元件是SV40内含子元件或小鼠微小病毒(MVM)内含子元件。12.根据权利要求11所述的rAAV基因组，其中所述SV40内含子元件包括与SEQ ID NO:29中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。
13.根据权利要求11或12所述的rAAV基因组，其中所述SV40内含子元件包括SEQ ID NO:29中所示的核苷酸序列。14.根据权利要求11至13中任一项所述的rAAV基因组，其中所述SV40内含子元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:29中所示的核苷酸序列组成。15.根据权利要求11至14中任一项所述的rAAV基因组，其中所述MVM内含子元件包括与SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。16.根据权利要求11至14中任一项所述的rAAV基因组，其中所述MVM内含子元件包括SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列。17.根据权利要求11至16中任一项所述的rAAV基因组，其中所述MVM内含子元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列组成。18.根据权利要求1至17中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一转录调控元件和所述第二转录调控元件相同。19.根据权利要求1至18中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一转录调控元件包括HCR 1元件、hAAT启动子和SV40内含子元件，并且所述第二转录调控元件包括SERPINA1肝特异性调控模块、TTR启动子和MVM内含子元件。20.根据权利要求1至19中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一转录调控元件包括SEQ ID NO:50的核酸序列并且所述第二转录调控元件包括SEQ ID NO:43的核酸序列。21.根据权利要求1至20中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒和/或所述第二表达盒还包括相对于所述第一编码序列和/或所述第二编码序列在3'的聚腺苷酸化序列。22.根据权利要求21所述的rAAV基因组，其中所述聚腺苷酸化序列是外源性聚腺苷酸化序列，任选地其中所述外源性聚腺苷酸化序列是SV40聚腺苷酸化序列或牛生长激素(BGH)聚腺苷酸化序列。23.根据权利要求22所述的rAAV基因组，其中所述SV40聚腺苷酸化序列包括与SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。24.根据权利要求22或23所述的rAAV基因组，其中所述SV40聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列。25.根据权利要求22至24中任一项所述的rAAV基因组，其中所述SV40聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列组成。26.根据权利要求22至25中任一项所述的rAAV基因组，其中所述BGH聚腺苷酸化序列包括与SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。27.根据权利要求22至26中任一项所述的rAAV基因组，其中所述BGH聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列。28.根据权利要求22至27中任一项所述的rAAV基因组，其中所述BGH聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列组成。29.根据权利要求21至28中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒和所述第二表达盒包括相同的聚腺苷酸化序列。30.根据权利要求21至29中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒包括所述SV40聚腺苷酸化序列。
31.根据权利要求21至30中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第二表达盒包括所述BGH聚腺苷酸化序列。32.根据权利要求21至31中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:31的核酸序列并且所述第二聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:33的核酸序列。33.根据权利要求1至32中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒和所述第二表达盒在所述rAAV基因组中处于相同的取向。34.根据权利要求1至32中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒和所述第二表达盒在所述rAAV基因组中呈相反的取向。35.根据前述权利要求中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一表达盒和所述第二表达盒呈相反的取向，所述第一聚腺苷酸化序列和所述第二聚腺苷酸化序列在所述rAAV基因组中位于远端。36.根据权利要求35所述的rAAV基因组，其中所述rAAV基因组还包括插入所述第一转录调控元件与所述第二转录调控元件之间的填充序列。37.根据权利要求36所述的rAAV基因组，其中所述填充序列包括β珠蛋白聚腺苷酸化序列。38.根据权利要求37所述的rAAV基因组，其中所述β珠蛋白聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:51的核酸序列。39.根据权利要求35所述的rAAV基因组，其中所述rAAV基因组从5'到3'包括：(a)包括SEQ ID NO:33的核酸序列的所述第一聚腺苷酸化序列；(b)所述第一编码序列；(c)包括SEQ ID NO:27的核酸序列的所述第一肝特异性转录调控元件；(d)包括SEQ ID NO:51的核酸序列的填充序列；(e)包括SEQ ID NO:67的核酸序列的所述第二肝特异性转录调控元件；(f)所述第二编码序列；以及(g)包括SEQ ID NO:31的核酸序列的所述第二转录聚腺苷酸化序列。40.根据权利要求35所述的rAAV基因组，其中所述rAAV基因组从5'到3'包括：所述第一表达盒的反向补体；填充序列；和所述第二表达盒。41.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第一编码序列，与SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列；(b)所述填充序列包括与SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第二编码序列，与SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。
42.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第一编码序列，与SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列；(b)所述填充序列包括与SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第二编码序列，与SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。43.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:25中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，与SEQ ID NO:26中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第一编码序列，所述第一聚腺苷酸化序列；(b)所述填充序列包括与SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:119中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，与SEQ ID NO:45中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第二编码序列，与SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。44.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:119中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，与SEQ ID NO:45中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第一编码序列，与SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列；(b)所述填充序列包括与SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：与SEQ ID NO:25中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，与SEQ ID NO:26中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列，所述第二编码序列，所述第一聚腺苷酸化序列。45.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：
SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列，所述第一编码序列，SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列；(b)所述填充序列包括SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列，所述第二编码序列，SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列。46.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列，所述第一编码序列，SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列；(b)所述填充序列包括SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列，所述第二编码序列，SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列。47.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:25中所示的核苷酸序列，SEQ ID NO:26中所示的核苷酸序列，所述第一编码序列，所述第一聚腺苷酸化序列；(b)所述填充序列包括SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:119中所示的核苷酸序列，SEQ ID NO:45中所示的核苷酸序列，所述第二编码序列，SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列。48.根据权利要求40所述的rAAV基因组，其中：(a)所述第一表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:119中所示的核苷酸序列，SEQ ID NO:45中所示的核苷酸序列，所述第一编码序列，SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列；(b)所述填充序列包括SEQ ID NO:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)所述第二表达盒从5'到3'包括：SEQ ID NO:25中所示的核苷酸序列，
SEQ ID NO:26中所示的核苷酸序列，所述第二编码序列，所述第一聚腺苷酸化序列。49.一种rAAV基因组，所述rAAV基因组包括双顺反子表达盒，所述双顺反子表达盒从5'到3'包括：(a)肝特异性转录调控元件；第一编码序列，所述第一编码序列编码可操作地连接到第一信号序列的包括抗体重链的第一多肽；核糖体跳跃序列，所述核糖体跳跃序列编码核糖体跳跃肽；第二编码序列，所述第二编码序列编码可操作地连接到第二信号序列的包括抗体轻链的第二多肽；以及聚腺苷酸化序列；或(b)肝特异性转录调控元件；第二编码序列，所述第二编码序列编码可操作地连接到第二信号序列的包括抗体轻链的第二多肽；核糖体跳跃序列，所述核糖体跳跃序列编码核糖体跳跃肽；第一编码序列，所述第一编码序列编码可操作地连接到第一信号序列的包括抗体重链的第一多肽；以及聚腺苷酸化序列，其中所述双顺反子表达盒的表达产生包括所述抗体重链和所述抗体轻链的抗体。50.根据权利要求49所述的rAAV基因组，其中转录调控元件包括选自由以下组成的组的启动子元件：人白蛋白启动子、人运甲状腺素蛋白(TTR)启动子、人甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子、人ApoH启动子、人SERPINA1(hAAT)启动子和其肝特异性调控模块，例如人ApoE/C
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I肝控制区(HCR)1或2。51.根据权利要求49或50所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括启动子元件，所述启动子元件包括与选自由SEQ ID NO:25、27、66、68、69、116和117组成的组的序列至少90％相同的核酸序列。52.根据权利要求49至51中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括与SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。53.根据权利要求49至52中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列。54.根据权利要求49至53中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:27中所示的核苷酸序列组成。55.根据权利要求49或50所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括与SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。56.根据权利要求55所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列。57.根据权利要求55所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:67中所示的核苷酸序列组成。58.根据权利要求49至57中任一项所述的rAAV基因组，其中所述双顺反子表达盒还包括内含子元件，所述内含子元件相对于所述第一编码序列和/或所述第二编码序列位于5'并且相对于所述转录调控元件位于3'。59.根据权利要求58所述的rAAV基因组，其中所述内含子元件是外源性内含子元件，任选地其中所述外源性内含子元件是SV40内含子元件或小鼠微小病毒(MVM)内含子元件。60.根据权利要求59所述的rAAV基因组，其中所述SV40内含子元件包括与SEQ ID NO:
29中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。61.根据权利要求59或60所述的rAAV基因组，其中所述SV40内含子元件包括SEQ ID NO:29中所示的核苷酸序列。62.根据权利要求59至61中任一项所述的rAAV基因组，其中所述SV40内含子元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:29中所示的核苷酸序列组成。63.根据权利要求59所述的rAAV基因组，其中所述MVM内含子元件包括与SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。64.根据权利要求59所述的rAAV基因组，其中所述MVM内含子元件包括SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列。65.根据权利要求59所述的rAAV基因组，其中所述MVM内含子元件的核苷酸序列由SEQ ID NO:30中所示的核苷酸序列组成。66.根据权利要求49至65中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括：(a)HCR 1元件、hAAT启动子和SV40内含子元件；或(b)SERPINA1肝特异性调控模块、TTR启动子和MVM内含子元件。67.根据权利要求49至66中任一项所述的rAAV基因组，其中所述转录调控元件包括SEQ ID NO:50的核酸序列或SEQ ID NO:43的核酸序列。68.根据权利要求49至67中任一项所述的rAAV基因组，其中所述聚腺苷酸化序列是外源性聚腺苷酸化序列，任选地其中所述外源性聚腺苷酸化序列是SV40聚腺苷酸化序列或牛生长激素(BGH)聚腺苷酸化序列。69.根据权利要求68所述的rAAV基因组，其中所述SV40聚腺苷酸化序列包括与SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。70.根据权利要求68或69所述的rAAV基因组，其中所述SV40聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列。71.根据权利要求68至70中任一项所述的rAAV基因组，其中所述SV40聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由SEQ ID NO:31中所示的核苷酸序列组成。72.根据权利要求68至71中任一项所述的rAAV基因组，其中所述BGH聚腺苷酸化序列包括与SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。73.根据权利要求68至72中任一项所述的rAAV基因组，其中所述BGH聚腺苷酸化序列包括SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列。74.根据权利要求68至73中任一项所述的rAAV基因组，其中所述BGH聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由SEQ ID NO:33中所示的核苷酸序列组成。75.根据权利要求1至74中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一信号序列和/或所述第二信号序列是天然存在的信号序列。76.根据权利要求1至74中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一信号序列和/或所述第二信号序列是抗体信号序列，任选地人IgG2或IgK信号序列。77.根据权利要求1至74中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一信号序列和/或所述第二信号序列是非天然存在的信号序列。78.根据权利要求1至74中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一信号序列和/或所述第二信号序列包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列。
79.根据权利要求1至74中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一信号序列和/或所述第二信号序列包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列。80.根据权利要求1至79中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一信号序列包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列，并且所述第二信号序列包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列。81.根据权利要求1至80中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一编码序列和/或所述第二编码序列包括SEQ ID NO:23、96、102或108中所示的核酸序列中的任一者。82.根据权利要求1至80中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一编码序列和/或所述第二编码序列包括SEQ ID NO:24、99、105、111或130中所示的核酸序列中的任一者。83.根据权利要求1至82中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一编码序列包括SEQ ID NO:23、96、102或108中所示的核酸序列中的任一者并且所述第二编码序列包括SEQ ID NO:24、99、105、111或130中所示的核酸序列中的任一者。84.根据权利要求1至83中任一项所述的rAAV基因组，其中所述抗体特异性结合于补体C5。85.根据权利要求1至84中任一项所述的rAAV基因组，其中所述抗体重链包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列。86.根据权利要求1至84中任一项所述的rAAV基因组，其中所述抗体重链包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列。87.根据权利要求1至84中任一项所述的rAAV基因组，其中所述抗体轻链包括SEQ ID NO:77的氨基酸序列。88.根据权利要求1至84中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一编码序列和/或所述第二编码序列已被优化以在人细胞中表达。89.根据权利要求1至84中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一编码序列包括SEQ ID NO:52、113、114或115中所示的核酸序列中的任一者。90.根据权利要求1至84中任一项所述的rAAV基因组，其中所述第一编码序列包括SEQ ID NO:83、9...
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