用于过继免疫治疗的经修饰T细胞制造技术

本发明专利技术涉及SIGLEC15表达降低的T细胞群，其中所述T细胞来源于患有癌症的对象中的前哨淋巴结。本发明专利技术还涉及用于获得这样的T细胞的方法，以及所述T细胞在治疗中的用途和包含这样的T细胞的药物组合物。样的T细胞的药物组合物。样的T细胞的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于过继免疫治疗的经修饰T细胞


[0001]本专利技术涉及治疗性治疗领域。特别地，本专利技术涉及基于向有此需要的患者施用自体细胞的癌症治疗、可用于这样的治疗的细胞以及用于制备这样的细胞的方法。

技术介绍

[0002]使用从肿瘤引流前哨淋巴结中分离的自体体外扩增淋巴细胞的过继免疫治疗在本领域是已知的(1)。还在恶性黑素瘤中研究了过继免疫治疗，包括收集和扩增自体肿瘤反应性淋巴细胞并再输注至患者(2)。
[0003]WO2018/234516教导了用于扩增抗肿瘤T细胞以及可吞噬颗粒的方法，所述颗粒具有一种或更多种与其紧密缔合的肿瘤新抗原构建体。
[0004]将自体或同种异体T细胞输注至患有癌症的患者的过继T细胞转移治疗近年来已显示出相当大的前景(3)。
[0005]Siglecs是识别唾液酸化聚糖的脊椎动物细胞表面受体。SIGLEC15是由以下组成的I型跨膜蛋白：(i)两个免疫球蛋白(Ig)样结构域，(ii)包含赖氨酸残基的跨膜结构域，以及(iii)短胞质尾。SIGLEC15在人的脾和淋巴结的巨噬细胞和/或树突细胞上表达(4)。SIGLEC15信使RNA表达在大多数正常人组织和多种免疫细胞亚群中很少，但可存在于巨噬细胞中，大多数在M2巨噬细胞中(4)。SIGLEC15不仅可调节破骨细胞分化，还可抑制T细胞应答(5)。
[0006]US2019/202912建议在癌症治疗中使用与SIGLEC15结合的抗体。
[0007]专利技术概述
[0008]本专利技术人出乎意料地发现，来源于前哨淋巴结的T细胞中的SIGLEC15的下调可减轻由癌症来源免疫抑制因子造成的免疫受损，从而降低肿瘤的侵袭和转移能力。
[0009]因此，在第一方面中，本专利技术涉及用于获得SIGLEC15表达降低的T细胞群的方法，其包括以下步骤：
[0010]S1.确定从对象中的癌性肿瘤中引流淋巴液的淋巴结；
[0011]S2.从所确定的淋巴结中提取细胞；
[0012]S3.降低所提取的细胞中SIGLEC15的表达；以及
[0013]S4.在有利于T细胞扩增的条件下扩增SIGLEC15表达降低的经提取细胞。
[0014]在第二方面中，本专利技术涉及用于获得SIGLEC15表达降低的T细胞群的方法，其包括：
[0015]S1
’
.提供从对象取出的包含T细胞的淋巴结组织，所述淋巴结组织是从被确定为从所述对象中的癌性肿瘤中引流淋巴液的淋巴结获得的；
[0016]S2.从所确定的淋巴结中提取细胞；
[0017]S3.降低所提取的细胞中SIGLEC15的表达；以及
[0018]S4.在有利于T细胞扩增的条件下扩增SIGLEC15表达降低的经提取细胞。
[0019]在一些实施方案中，如下降低SIGLEC15的表达：通过siRNA转染、shRNA转染或
CRISPR介导的基因编辑来下调编码SIGLEC15的基因的表达。
[0020]在一些实施方案中，通过以下方法来下调编码SIGLEC15的基因的表达，从而降低SIGLEC15的表达：使用具有根据SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的核苷酸序列的siRNA分子，通过siRNA转染。
[0021]在一些实施方案中，所述有利于T细胞扩增的条件包括在存在白介素
‑
2的情况下维持所述细胞。
[0022]在另一个方面中，本专利技术涉及通过根据本专利技术的方法可获得的SIGLEC15表达降低的T细胞群。
[0023]在另一个方面中，本专利技术涉及根据本专利技术的T细胞群，其用于医学。
[0024]在另一个方面中，本专利技术涉及根据本专利技术的T细胞群，其用于治疗癌症的方法。
[0025]在一些实施方案中，癌症是实体瘤。
[0026]在一些实施方案中，癌症是T细胞所来源的对象的癌性肿瘤或其转移。
[0027]在一些实施方案中，癌症选自结直肠癌、恶性黑素瘤、宫颈癌、头颈鳞状细胞癌(Head&Neck Squamous Cell Carcinoma，HNSCC)、非小细胞肺癌(Non
‑
Small Cell Lung Carcinoma，NSCLC)的组。
[0028]在另一个方面中，本专利技术涉及用于在对象中治疗癌性肿瘤的方法，其包括：
[0029]S1.确定从所述对象的癌性肿瘤中引流淋巴液的淋巴结；
[0030]S2.从所确定的淋巴结中提取细胞；
[0031]S3.降低所提取的细胞中SIGLEC15的表达；
[0032]S4.在有利于T细胞扩增的条件下扩增SIGLEC15表达降低的经提取细胞；以及
[0033]S5.施用SIGLEC15表达降低的经扩增T细胞。
[0034]在一些实施方案中，如下降低SIGLEC15的表达：通过siRNA转染、shRNA转染或CRISPR介导的基因编辑来下调编码SIGLEC15的基因的表达。
[0035]在一些实施方案中，通过以下方法来下调编码SIGLEC15的基因的表达，从而降低SIGLEC15的表达：使用具有根据SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的核苷酸序列的siRNA分子，通过siRNA转染。
[0036]在一些实施方案中，癌症是实体瘤。
[0037]在一些实施方案中，癌症是T细胞所来源的对象的癌性肿瘤或其转移。
[0038]在一些实施方案中，癌症选自结直肠癌、恶性黑素瘤、宫颈癌、头颈鳞状细胞癌(HNSCC)、非小细胞肺癌(NSCLC)的组。
[0039]在另一个方面中，本专利技术涉及根据本专利技术的T细胞群在制备用于根据本专利技术的治疗方法的药物组合物中的用途。
[0040]在另一个方面中，本专利技术涉及药物组合物，其包含根据本专利技术的T细胞群，以及任选的可药用赋形剂和/或载体。
[0041]附图简述
[0042]图1：示出了用于获得根据本专利技术的T细胞群的方法的流程图。
[0043]图2：示出了根据本专利技术的治疗方法的流程图。
[0044]图3：A：SIGLEC15分别在前哨淋巴结和非前哨淋巴结中的相对表达。B：SIGLEC15在siRNA敲低之前和之后在前哨淋巴结中的相对表达。
[0045]图4：SIGLEC15在不同细胞类型中的蛋白质表达。A：前哨淋巴结(Sentinel Node，SN)与非前哨淋巴结(Non
‑
Sentinel Node，NSN)在不同细胞类型中的比较；B：前哨淋巴结(SN)在不同细胞类型中的比较。
[0046]图5：在SIGLEC15敲低之后的T细胞功能性细胞因子释放。
[0047]专利技术详述
[0048]引流原发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于获得SIGLEC15表达降低的T细胞群的方法，其包括：S1.确定从对象中的癌性肿瘤中引流淋巴液的淋巴结；S2.从所确定的淋巴结中提取细胞；S3.降低所提取的细胞中SIGLEC15的表达；以及S4.在有利于T细胞扩增的条件下扩增SIGLEC15表达降低的经提取细胞。2.用于获得SIGLEC15表达降低的T细胞群的方法，其包括：S1.提供从对象取出的包含T细胞的淋巴结组织，所述淋巴结组织是从被确定为从所述对象中的癌性肿瘤中引流淋巴液的淋巴结获得的；S2.从所确定的淋巴结中提取细胞；S3.降低所提取的细胞中SIGLEC15的表达；以及S4.在有利于T细胞扩增的条件下扩增SIGLEC15表达降低的经提取细胞。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中如下降低SIGLEC15的表达：通过siRNA转染、shRNA转染或CRISPR介导的基因编辑来下调编码SIGLEC15的基因的表达。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中如下降低SIGLEC15的表达：使用具有根据SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的核苷酸序列的siRNA分子，通过siRNA转染来下调编码SIGLEC15的基因的表达。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述有利于T细胞扩增的条件包括在存在白介素
‑
2的情况下维持所述细胞。6.通过根据权利要求1至5中任一项所述的方法获得或可获得的SIGLEC15表达降低的T细胞群，其用于医学。7.通过根据权利要求1至5中任一项所述的方法获得或...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨远，杜航，唐景玲，胡平生，
申请(专利权)人：贵州生诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：