一种活性多肽CATH-AW2及其编码基因与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种活性多肽CATH

【技术实现步骤摘要】
一种活性多肽CATH
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AW2及其编码基因与应用


[0001]本专利技术涉及一种活性多肽CATH
‑
AW2及其编码基因与应用，属于生物医学


技术介绍

[0002]近年来，随着传统抗生素的大规模和不恰当使用，微生物对传统抗生素产生了越来越强的耐药性。目前应对微生物耐药的唯一手段是使用新型或者替代性的抗生素药物，这就需要持续开发新型抗微生物剂。但是临床对新抗生素的需求和新药研发之间存在越来越大差距，发现新抗生素并引入市场越来越有挑战。尽可能保护既有抗生素，如研发抗菌佐剂，为减少这样的矛盾提供了新路径。抗菌佐剂是本身不具有抗菌活性，但是能提高其他抗菌药物活性的化合物，它们要么阻止耐药性的产生，要么促进宿主对感染的响应。
[0003]两栖类动物皮肤裸露，易于受到周围环境中病原菌的攻击，与此同时，两栖类动物获得性免疫系统不健全，更多的依赖先天免疫系统抵御病原菌侵袭。活性多肽作为先天免疫系统的重要分子，在两栖类动物体内种类多样，且含量丰富。到目前为止已从各种两栖类动物体内发现数百种结构和功能不同的活性多肽分子，并且其数目还在不断增加。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种从武夷湍蛙体内提取所得的具有显著的抗菌佐剂活性和极低的溶血活性的新型活性多肽CATH
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AW2，以及编码这条多肽的核酸序列。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种活性多肽CATH
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AW2，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供一种所述活性多肽CATH
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AW2的编码基因。
[0007]进一步地，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种携带所述编码基因的表达载体。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种表达所述活性多肽CATH
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AW2的重组细胞。
[0010]进一步地，所述重组细胞为微生物细胞、动物细胞或植物细胞。
[0011]本专利技术的第五个目的是提供所述活性多肽CATH
‑
AW2作为抗菌佐剂的应用。
[0012]进一步地，所述的应用是将所述活性多肽CATH
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AW2添加至含有抗菌活性物质的抗菌剂中，与抗菌活性物质联用。
[0013]进一步地，所述抗菌活性物质为抗菌肽和/或抗生素。
[0014]本专利技术的第六个目的是提供一种抗菌组合物，所述抗菌组合物中含有所述活性多肽CATH
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AW2和抗菌活性物质。
[0015]进一步地，所述抗菌活性物质为抗菌肽和/或抗生素。
[0016]进一步地，所述抗菌组合物可用于制备药物、杀菌剂、抗微生物制剂、动物饲料、化妆品和防腐保鲜剂。
[0017]本专利技术的有益效果是：
[0018]本专利技术的武夷湍蛙活性多肽CATH
‑
AW2和含有该多肽的组合物可以用作协同抗菌和抑制细菌生长的药物、杀菌剂、抗微生物制剂、动物饲料、化妆品和防腐保鲜等领域。
[0019]本专利技术的武夷湍蛙活性多肽CATH
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AW2的编码基因，可以应用于多肽重组表达、转基因动物、植物、植物部分、动物细胞或植物细胞中。
[0020]本专利技术的武夷湍蛙活性多肽CATH
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AW2可以显著提升抗生素和抗菌肽的杀菌效果，且具有较小的细胞毒性和溶血活性，因此具有广泛的应用前景。
具体实施方式
[0021]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0022]实施例1：武夷湍蛙活性多肽CATH
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AW2编码基因克隆
[0023](1)武夷湍蛙皮肤总RNA提取：
[0024]①
取200mg武夷湍蛙背部皮肤组织，放入研钵中加入液氮研磨成粉末，转移到EP管中，加入1mL总RNA提取缓冲液(Trizol，美国Life公司产品)，充分混匀，而后于4℃，12000rpm离心10min。
[0025]②
离心取上清，加入0.2mL氯仿溶液，剧烈混匀，室温放置10分钟，而后以4℃，12000rpm离心10分钟，弃除沉淀。
[0026]③
上清加入等体积的异丙醇，室温放置10分钟，以4℃，12000rpm离心10分钟，收集沉淀用75％(V/V)乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即为武夷湍蛙皮肤总RNA。
[0027](2)武夷湍蛙皮肤cDNA二链合成：采用CLONTECH公司In
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Fusion SMARTer
TM Directional cDNA Library Construction Kit合成。
[0028]1)cDNA第一链合成(mRNA反转录)：
[0029]①
RNase
‑
free的PCR管中加入1μl武夷湍蛙皮肤总RNA、1μl 3
’
端一链合成引物(3
’
In
‑
Fusion SMARTer CDS Primer)和2.5μl RNase
‑
free水使总体积达到4.5μl，混匀后短暂离心(2000rpm，30s)，离心后于72℃保温3分钟；保温后再将离心管在42℃孵育2分钟。
[0030]②
在上述离心管中加入以下试剂(均为CLONTECH公司In
‑
Fusion SMARTer
TM Directional cDNA Library Construction Kit建库试剂盒中配备)，2.0μl 5
×
第一链缓冲液、0.25μl 100mM DTT、1.0μl 10mM dNTP Mix、1.0μl SMARTer V Oligonucleotide、0.25μl RNase Inhibitor和1.0μl SMARTScribe Reverse Transcriptase反转录酶，混合离心管中试剂并短暂离心(2000rpm，30s)，在42℃保温90min，然后68℃保温10min。保温处理后将离心管置于冰上中止第一链的合成。从离心管取2μl所合成的cDNA第一链备用。
[0031]2)采用长末端聚合酶链式反应(LD
‑
PCR)方法扩增第二链(所用试剂均为CLONTECH公司In
‑
Fusion SMARTer
TM Directional cDNA Library Construction Kit建库试剂盒中配备)
[0032]①
将2μl cDNA第一链(mRNA反转录)、80μl去离子水、10μl 10
×
Advantage 2PCR缓冲液、2μ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种活性多肽CATH
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AW2，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种权利要求1所述活性多肽CATH
‑
AW2的编码基因。3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种携带权利要求2或3所述编码基因的表达载体。5.一种表达权利要求1所述活性多肽CATH
‑
AW2的重组细胞。6.权利要求1所述活性多肽CATH
‑
AW2作为抗菌佐剂的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：王义鹏，叶子凡，汪旭，李双宇，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：