一种凝血酶液体冷冻制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种凝血酶液体冷冻制剂及其制备方法和应用，包括在含pH缓冲体系的水溶液中混合均匀的凝血酶0.1

【技术实现步骤摘要】
一种凝血酶液体冷冻制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种凝血酶液体冷冻制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]在交通事故和临床手术操作的突发性意外中，常容易引起大量出血，未能及时止血是伤亡的主要原因。因此，有效地控制出血状况是急救护理的首要环节，有一个广谱的止血材料来封闭出血点能大大降低患者死亡的机率。凝血酶是重要的凝血因子，属于胰凝乳蛋白酶家族，由凝血酶原酶复合物对无活性前体凝血酶原水解、切割而生成。凝血酶止血材料的止血原理是模拟人体内凝血的最后一步反应，但它并不依赖于机体自身的凝血成分，因此它对具有凝血功能障碍或正在服用抗凝药物的患者仍有理想止血效果。凝血酶有较强的专一性，其作用原理是能够直接作用于血中的纤维蛋白原，水解血纤维蛋白原的4个精氨酸
‑
甘氨酸(Arg
‑
Gly)肽键，促进其转化为不溶性纤维蛋白，同时促使血小板聚集，加速血液凝固，从而达到迅速止血的目的。
[0003]现今临床使用的凝血酶均来源于人或哺乳动物，须从人或动物的血浆中分离提取，而血浆原材料缺乏一直是困扰此类产品大规模应用的障碍。相较于人血浆的获取，猪血浆来源广泛。因此，近年来猪源凝血酶制剂临床应用广泛，市场销量连年增加。猪源纤维蛋白制剂的主要组分有猪源纤维蛋白原和凝血酶；其中临床应用中的主要问题是猪源凝血酶制剂是冻干粉制剂，临床使用时需要配制溶解后使用，这对于临床应用带来了不便，同时也限制了猪源凝血酶制剂的使用场景。另外，蛋白质冻干制剂可能存在配制使用，复原程序的错误可能性。生产过程中，蛋白冻干工艺过程耗时长，成本高。因此，猪源凝血酶液体冷冻制剂是临床上和大生产迫切需要的，一种稳定的高效的，便于临床给药，可拓展应用至紧急出血等多种临床场景的改良型制剂。
[0004]因为蛋白质稳定性与蛋白溶液环境、环境组成等密切相关。因此，为了增加蛋白质的稳定性，减少蛋白聚集体产生，有必要专利技术一种在冷冻下长期稳定性高的猪源凝血酶液体制剂，增加临床给药便利性。

技术实现思路

[0005]为了提高凝血酶制剂稳定性及使用便捷性的技术问题，而提供一种凝血酶液体冷冻制剂及其制备方法和应用。本专利技术的凝血酶液体冷冻制剂在
‑
20℃的条件下具有长期稳定性。
[0006]为了达到以上目的，本专利技术通过以下技术方案实现：
[0007]一种凝血酶液体冷冻制剂，包括在含pH缓冲体系的水溶液中混合均匀的凝血酶0.1
‑
1mg/mL、表面活性剂0.1
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10mg/mL、渗透压调节剂2.5
‑
15mg/mL和稳定剂7
‑
170mg/mL；
[0008]所述稳定剂为蔗糖、右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙中任意三种或三种以上的组合物。
[0009]进一步地，所述稳定剂为蔗糖、右旋糖酐、氯化钙的组合物，或者蔗糖、甘氨酸、氯
化钙的组合物，或者右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙的组合物，或者蔗糖、右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙的组合物；
[0010]所述蔗糖在所述制剂中的浓度为0
‑
100mg/mL，所述右旋糖酐在所述制剂中的浓度为0mg
‑
50mg/mL；所述甘氨酸在所述制剂中的浓度为0
‑
10mg/mL；所述氯化钙在所述制剂中的浓度为2
‑
6mg/mL。
[0011]进一步地，所述凝血酶为猪源凝血酶，所述凝血酶在所述制剂中的浓度为0.6mg/mL。
[0012]进一步地，所述pH缓冲体系为含组氨酸的缓冲体系、醋酸缓冲体系、氨丁三醇缓冲体系中的一种；所述含pH缓冲体系的水溶液的pH值为6
‑
8。
[0013]优选地，所述pH缓冲体系为组氨酸
‑
盐酸缓冲体系，所述含pH缓冲体系的水溶液中组氨酸的浓度为10mmol/L，所述含pH缓冲体系的水溶液的pH值为6
‑
7。
[0014]进一步地，所述表面活性剂为聚山梨酯80，所述表面活性剂在所述制剂中的浓度为0.5
‑
1mg/mL。
[0015]进一步地，所述渗透压调节剂为氯化钠，所述渗透压调节剂在所述制剂中的浓度为2.5
‑
7mg/mL。
[0016]本专利技术提供上述凝血酶液体冷冻制剂的制备方法，将凝血酶与含有pH缓冲体系的水溶液均匀混合，然后与表面活性剂、稳定剂、渗透压调节剂混合均匀，调节pH值为6
‑
8，在零下温度下储存即得到凝血酶液体冷冻制剂。
[0017]本专利技术最后一方面提供上述凝血酶液体冷冻制剂在止血材料中的应用。
[0018]有益技术效果：
[0019]蛋白质溶液经过深度冷冻，在长期贮存过程中，可能会导致蛋白质构象不稳定和聚集现象，导致在使用时可能活性丧失。因此在冷冻过程中，需要通过选择最佳的溶液pH缓冲体系、加入合适的稳定剂或保护剂以实现蛋白质液体冷冻制剂的稳定贮存和生物学活性。本专利技术的凝血酶液体冷冻制剂在冷冻过程中，组氨酸
‑
盐酸缓冲体系的pH不易发生变化，并配合表面活性剂和特定稳定剂组合，使凝血酶蛋白与特定的表面活性剂、稳定剂之间竞争冰
‑
液体界面，从而起到抑制蛋白质变性，使得该冷冻制剂能够在
‑
20℃下保持至少两年，特定稳定剂组合包括蔗糖、右旋糖酐、氯化钙的组合物，或者蔗糖、甘氨酸、氯化钙的组合物，或者右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙的组合物，或者蔗糖、右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙的组合物，均对蛋白活性具有较好的稳定作用；大大缩短临床上使用的制备时间，拓展了适用场景，增加了临床给药便利性。
附图说明
[0020]图1为实施例6的猪源凝血酶液体制剂在
‑
20℃下不同保存时间下得到的非还原蛋白电泳图。
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术的实施例和附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本专利技术及其应用或使
用的任何限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的数值不限制本专利技术的范围。对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法可能不作详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法应当被视为说明书的一部分。在这里示出和讨论的所有示例中，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制。因此，示例性实施例的其它示例可以具有不同的值。
[0023]实施例1
[0024]一种凝血酶液体冷冻制剂，包括在含pH缓冲体系的水溶液中混合均匀的猪源凝血酶0.6mg/mL、表面活性剂聚山梨酯80 0.5mg/mL、渗透压调节剂氯化钠5.8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种凝血酶液体冷冻制剂，其特征在于，包括在含pH缓冲体系的水溶液中混合均匀的凝血酶0.1
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1mg/mL、表面活性剂0.1
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10mg/mL、渗透压调节剂2.5
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15mg/mL和稳定剂7
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170mg/mL；所述稳定剂为蔗糖、右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙中任意三种或三种以上的组合物。2.根据权利要求1所述一种凝血酶液体冷冻制剂，其特征在于，的所述稳定剂为蔗糖、右旋糖酐、氯化钙的组合物，或者蔗糖、甘氨酸、氯化钙的组合物，或者右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙的组合物，或者蔗糖、右旋糖酐、甘氨酸、氯化钙的组合物；所述蔗糖在所述制剂中的浓度为0
‑
100mg/mL，所述右旋糖酐在所述制剂中的浓度为0mg
‑
50mg/mL；所述甘氨酸在所述制剂中的浓度为0
‑
10mg/mL；所述氯化钙在所述制剂中的浓度为2
‑
6mg/mL。3.根据权利要求1所述一种凝血酶液体冷冻制剂，其特征在于，所述凝血酶为猪源凝血酶，所述凝血酶在所述制剂中的浓度为0.6mg/mL。4.根据权利要求1所述一种凝血酶液体冷冻制剂，其特征在于，所述pH缓冲体系为含...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊婷婷，刘璐，张军东，
申请(专利权)人：上海昊海生物科技股份有限公司上海建华精细生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：