用于减少抗体纯化过程中的宿主细胞蛋白质含量的方法和具有减少的宿主细胞蛋白质含量的抗体组合物技术

本公开涉及在意图用于施用于患者的抗体的制造过程中，用于减少在宿主细胞中重组产生的抗体制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法。可以执行所公开的方法，以便制备具有减少的宿主细胞蛋白质的治疗性抗体制剂。细胞蛋白质的治疗性抗体制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于减少抗体纯化过程中的宿主细胞蛋白质含量的方法和具有减少的宿主细胞蛋白质含量的抗体组合物
[0001]本专利技术涉及重组蛋白制造领域。更具体地，本专利技术提供了在意图用于施用于患者的蛋白质例如治疗性或诊断性抗体或其抗原结合片段的制造过程中，用于减少在宿主细胞中重组产生的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法。可以执行所公开的方法，以便产生具有减少的宿主细胞蛋白质含量的抗体组合物。
[0002]宿主细胞蛋白质(HCP)是宿主细胞的蛋白质，其涉及细胞维持和生长、以及蛋白质合成和加工。然而，在治疗性或诊断性蛋白质领域，HCP的存在通过引发关注例如聚集、经由催化活性和/或免疫原性的产物碎片化，对产品质量和患者安全造成威胁。因此，HCP被鉴定为蛋白质制剂的关键质量属性(CQA)。不需要的聚集物的形成和产物碎片化需要另外的纯化步骤，以减少/去除HCP，并且这些另外的纯化步骤经常导致所需蛋白质的产率降低和总体制造成本增加。
[0003]消除来自制造过程的HCP的挑战以及改进过程以减少HCP的尝试已得到公开，例如如Gilgunn等人；Goey等人，Biotechnology Advances 36(2018)1223
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1237；以及Current Opinion in Chemical Engineering 2018，22：98
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106中所述。然而，去除HCP的这些过程具有局限性。例如，在一些情况下，这些公开证实了以下中的一种或多种：HCP的不完全去除，HCP去除过程中的不一致导致聚集，所需蛋白质和HCP的共纯化，产物功能受损，患者中的免疫原性关注和/或降低的药代动力学性质例如半衰期。此外，开发用于去除HCP的过程经常需要应对增加的体积和另外的纯化步骤，经常导致制造成本的增加和产率的减少。在一些情况下，该方法的适用性限于特定分子和/或形式。像这样，仍然需要在治疗性或诊断性蛋白质的纯化过程中减少HCP的替代方法。此类替代方法优选减少HCP而不影响产物稳定性、产率或最终维持产物质量的成本，并且顺应大规模制造并确保患者安全。
[0004]相应地，本专利技术通过提供减少治疗性或诊断性抗体或其抗原结合片段的制剂中的HCP的替代方法，解决了上述问题中的一个或多个。本专利技术的方法提供了可重现的方法，其在去除HCP方面高度有效，同时保存抗体稳定性、减少聚集、维持产物产率并且具有降低免疫原性风险的潜力。此类方法可以有效地去除HCP，而无需增加抗体制剂体积。令人惊讶的是，本专利技术的方法实现的HCP计数远低于＜100ppm的行业可接受标准。令人惊讶的是，本专利技术的其它实施方案实现了＜50ppm的HCP计数，同时保存蛋白质稳定性、减少聚集并维持产物产率。更令人惊讶的是，本专利技术的其它实施方案实现了＜20ppm、＜10ppm、＜5ppm、＜1ppm或～0ppm的HCP计数，同时保存蛋白质稳定性、减少聚集并维持产物产率。此外，本专利技术的实施方案提供了顺应广泛范围的分子的HCP去除方法。本专利技术的其它实施方案使得能够消除另外的纯化步骤，导致批处理时间的减少和降低的制造成本。可以执行所公开的方法，以便产生具有减少的宿主细胞含量的抗体组合物，其中所述抗体组合物的宿主细胞含量小于＜100pprn、＜50ppm、＜10ppm、＜5ppm、＜1ppm或～0ppm。
[0005]相应地，提供了减少抗N3pGlu Aβ抗体(“抗N3pG抗体”)制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法。在一些实施方案中，抗N3pG抗体在哺乳动物宿主细胞例如中国仓鼠卵巢细胞宿主细胞中重组产生。
[0006]相应地，在特定的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pG抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗N3pGlu Aβ抗体，将洗脱物的pH升高到约pH 5.0或更高(例如，约pH 6.0或更高、或约pH 7.0或更高)，使包含抗N3pGlu Aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗N3pGlu Aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将pH升高到约pH 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mM至约45mM。优选地，包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
[0007]相应地，在特定的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在宿主细胞中重组产生的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗N3pGlu Aβ抗体，执行病毒灭活，将洗脱物的pH升高到约pH 5.0或更高(例如，约pH 6.0或更高、或约pH 7.0或更高)，使包含蛋白质的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗N3pGlu Aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将pH升高到约pH 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mM至约45mM。优选地，包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
[0008]相应地，在特定的实施方案中，提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，其包括使在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂经亲和层析柱处理，用包含弱酸和强酸的组合的缓冲液从层析柱中洗脱抗N3pGlu Aβ抗体，其中弱酸是乙酸且强酸是磷酸或乳酸，将来自从层析柱中洗脱抗N3pGlu Aβ抗体的所述步骤的包含抗N3pGlu Aβ抗体的洗脱物的pH调整到低于约pH 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约pH 4.0，持续约0分钟至约180分钟，将洗脱物的pH升高到约pH 5.0或更高(例如，约pH 6.0或更高、或约pH 7.0或更高)，使包含抗N3pGlu Aβ抗体的洗脱物经深层过滤器处理，并且获得包含抗N3pGlu Aβ抗体的过滤的蛋白质制剂。在一些实施方案中，来自将pH升高到约pH 5.0或更高的步骤的洗脱物的离子强度是约10mM至约45mM。优选地，包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量是减少的。更优选地，包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量减少到小于约100ppm、小于约50ppm、小于约20ppm、小于约10ppm、小于约5ppm、或小于约1ppm。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，本公开提供了减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，所述方法包括以下步骤：a.使蛋白质制剂经亲和层析柱处理；b.用由弱酸和强酸构成的酸的组合，从层析柱中洗脱抗N3pGlu Aβ抗体，以获得包含抗N3pGlu Aβ抗体的洗脱物；c.将洗脱物的pH升高到高于约pH 5.0；和d.使洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的蛋白质制剂。2.权利要求1的方法，其中所述层析柱包含蛋白A、蛋白G或蛋白L亲和层析柱。3.权利要求1的方法，其中所述弱酸和强酸是至多约pH 7.3的一价酸。4.权利要求1的方法，其中所述弱酸是乙酸并且所述强酸是磷酸或乳酸。5.权利要求4的方法，其中所述乙酸的浓度为约20mM，并且其中所述强酸是磷酸，且其中所述磷酸的浓度为约5mM至约10mM。6.权利要求4的方法，其中所述乙酸的浓度为约20mM，并且其中所述强酸是乳酸，且其中所述乳酸的浓度为约5mM。7.权利要求1的方法，其进一步包括执行病毒灭活的步骤。8.权利要求1的方法，其进一步包括执行病毒灭活的步骤，其包括将来自从层析柱中洗脱蛋白质的所述步骤的洗脱物的pH调整到低于约pH 4.0，并且其中将洗脱物维持在低于约pH 4.0，持续约0分钟至约180分钟。9.权利要求8的方法，其中调整洗脱物的pH的所述步骤包括将所述洗脱物的pH调整到约pH 3.3至约pH 3.7。10.权利要求9的方法，其中将所述洗脱物的pH调整到约pH 3.5。11.权利要求8至10中任一项的方法，其中调整所述洗脱物的pH包括添加HCl、磷酸或乙酸和磷酸的组合中的任一种。12.权利要求1的方法，其中升高洗脱物的pH的所述步骤包括将所述pH升高到约pH 6.5至约pH 7.5。13.权利要求12的方法，其中将洗脱物的pH升高到约pH 7.0。14.权利要求12或13中任一项的方法，其中升高洗脱物的pH的步骤包括添加Tris。15.权利要求1至14中任一项的方法，其中在将pH升高到高于约5.0的所述步骤的洗脱物具有约10mM至约45mM的离子强度。16.权利要求1至15中任一项的方法，其进一步包括使深层过滤的蛋白质制剂经受以下纯化和/或精制步骤中的一个或多个，以获得包含抗N3pGlu Aβ抗体的原料药制剂：病毒灭活、离子交换层析、病毒过滤、切向流过滤。17.权利要求1至16中任一项的方法，其中所述深层过滤器是基于纤维素/硅藻土的过滤器。18.权利要求17的方法，其中所述深层过滤器是B1HC过滤器、X0HC过滤器或Zeta Plus(ZB Media)过滤器。19.权利要求1至16中任一项的方法，其中所述深层过滤器是合成过滤器。20.权利要求19的方法，其中所述深层过滤器是C0SP过滤器、X0SP过滤器或Emphaze AEX Hybrid Purifier过滤器。
21.权利要求20的方法，其中所述深层过滤器是X0SP过滤器。22.权利要求17
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21中任一项的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约9μ至约0.1μ。23.权利要求22的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约2μ至约0.1μ。24.权利要求23的方法，其中所述深层过滤器的孔径为约0.1μ。25.权利要求1
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24中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的pH为约5.0。26.权利要求1
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24中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的pH为约6.0。27.权利要求1
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24中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的pH为约7.0。28.权利要求1
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27中任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。29.权利要求1至28中任一项的方法，其中所述蛋白质制剂包含收获的细胞培养液、捕获池或回收的蛋白质池。30.权利要求1至29中任一项的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。31.权利要求30的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体是IgG1抗体。32.权利要求1至31中任一项的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体包含重链(HC)和轻链(LC)，其中所述轻链包含轻链可变区(LCVR)并且所述重链包含重链可变区(HCVR)，其中所述LCVR包含氨基酸序列LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述HCVR包含氨基酸序列HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是KSSQSLLYSRGKTYLN(SEQ ID NO：17)，LCDR2是AVSKLDS(SEQ ID NO：18)，LCDR3是VQGTHYPFT(SEQ ID NO：19)，HCDR1是GYDFTRYYIN(SEQ ID NO：20)，HCDR2是WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO：21)，并且HCDR3是EGITVY(SEQ ID NO：22)。33.权利要求32的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体的LC包含LCVR，并且所述抗N3pGlu Aβ抗体的HC包含HCVR，其中所述LCVR是DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWLLQKPGQSPQLLIYAVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：13)，并且所述HCVR是QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFTRYYINWVRQAPGQGLEWMGWINPGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITVYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：14)。34.权利要求32或权利要求33的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体的LC是DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWLLQKPGQSPQLLIYAVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：15)，并且所述抗N3pGlu Aβ抗体的HC是QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFTRYYINWVRQAPGQGLEWMGWINPGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITVYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：16)。35.权利要求34的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体是多奈单抗。36.权利要求32至35中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于100ppm(如通过LCMS测量的)。
37.权利要求32
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36中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质S100
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A6、蛋白质S100
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A11、磷脂酶B样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40S核糖体蛋白S27a、激肽释放酶
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11、丝氨酸蛋白酶HTRA1同种型X1、补体C1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型X1、热休克同源71kDa蛋白和过氧化物还原酶
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1。38.权利要求37的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的蛋白质S100
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A6(如通过LCMS测量的)。39.权利要求37或权利要求38的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的蛋白质S100
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A11(如通过LCMS测量的)。40.权利要求37
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39中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约10ppm的磷脂酶B样2蛋白(如通过LCMS测量的)。41.权利要求37
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40中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过LCMS测量的)。42.权利要求37
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41中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的泛素40S核糖体蛋白S27a(如通过LCMS测量的)。43.权利要求37
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42中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm的激肽释放酶
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11(如通过LCMS测量的)。44.权利要求37
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43中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶HTRA1同种型X1(如通过LCMS测量的)。45.权利要求37
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44中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm补体C1r亚组分(如通过LCMS测量的)。46.权利要求37
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45中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。47.权利要求37
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46中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。48.权利要求37
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47中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm热休克同源71kDa蛋白(如通过LCMS测量的)。49.权利要求37
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48中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约5ppm过氧化物还原酶
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1(如通过LCMS测量的)。50.权利要求32至35中任一项的方法，其中所述原料药制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于100ppm(如通过LCMS测量的)。51.权利要求32
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35和50中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质S100
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A6、蛋白质S100
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A11、磷脂酶B样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40S核糖体蛋白S27a、激肽释放酶
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11、丝氨酸蛋白酶HTRA1同种型X1、补体C1r亚组分、主动脉平滑肌肌动蛋白同种型X1、热休克同源71kDa蛋白和过氧化物还原酶
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1。52.权利要求51的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的蛋白质S100
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A6(如通过LCMS测量的)。53.权利要求51或权利要求52的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的蛋白质S100
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A11(如通过LCMS测量的)。54.权利要求51
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53中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约10ppm的磷脂酶B
样2蛋白(如通过LCMS测量的)。55.权利要求51
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54中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的溶酶体保护蛋白(如通过LCMS测量的)。56.权利要求51
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55中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的泛素40S核糖体蛋白S27a(如通过LCMS测量的)。57.权利要求51
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56中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm的激肽释放酶
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11(如通过LCMS测量的)。58.权利要求51
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57中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm丝氨酸蛋白酶HTRA1同种型X1(如通过LCMS测量的)。59.权利要求51
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58中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm补体C1r亚组分(如通过LCMS测量的)。60.权利要求51
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59中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。61.权利要求51
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60中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm主动脉平滑肌肌动蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。62.权利要求51
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61中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm热休克同源71kDa蛋白(如通过LCMS测量的)。63.权利要求51
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62中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约5ppm过氧化物还原酶
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1(如通过LCMS测量的)。64.权利要求1
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31中任一项的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体包含重链(HC)和轻链(LC)，其中所述轻链包含轻链可变区(LCVR)并且所述重链包含重链可变区(HCVR)，其中所述LCVR包含氨基酸序列LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述HCVR包含氨基酸序列HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是RASQSLGNWLA(SEQ ID NO：27)，LCDR2是YQASTLES(SEQ ID NO：28)。LCDR3是QHYKGSFWT(SEQ ID NO：29)，HCDR1是AASGFTFSSYPMS(SEQ ID NO：30)，HCDR2是AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：31)，并且HCDR3是AREGGSGSYYNGFDY(SEQ ID NO：32)。65.权利要求64的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体的LC包含LCVR，并且所述抗N3pGlu Aβ抗体的HC包含HCVR，其中所述LCVR是DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO：23)，并且所述HCVR是EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYYNGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：24)。66.权利要求64或权利要求65的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体的LC是DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：25)，并且所述抗N3pGlu Aβ抗体的HC是EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYYNGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD
GVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：26)。67.权利要求64至66中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于10ppm(如通过LCMS测量的)。68.权利要求64至67中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽S
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转移酶Y1、40S核糖体蛋白S28、硫氧还蛋白同种型X1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型X1、肾小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型X2、半乳糖凝集素
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1、过氧化物还原酶
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1和角质蛋白α。69.权利要求68的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过LCMS测量的)。70.权利要求68或69的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋白(如通过LCMS测量的)。71.权利要求68
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70中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的谷胱甘肽S
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转移酶Y1(如通过LCMS测量的)。72.权利要求68
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71中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质包含小于约1ppm的谷胱甘肽S
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转移酶Y1(如通过LCMS测量的)。73.权利要求68
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72中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的40S核糖体蛋白S28(如通过LCMS测量的)。74.权利要求68
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73中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。75.权利要求68
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74中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。76.权利要求68
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75中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过LCMS测量的)。77.权利要求68
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76中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型X2(如通过LCMS测量的)。78.权利要求68
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77中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的半乳糖凝集素
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1(如通过LCMS测量的)。79.权利要求68
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78中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的过氧化物还原酶
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1(如通过LCMS测量的)。80.权利要求68
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79中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含小于约1ppm的角质蛋白α(如通过LCMS测量的)。81.权利要求64
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66中任一项的方法，其中所述原料药制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于10ppm(如通过LCMS测量的)。82.权利要求64
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66和81中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：多聚泛素、溶酶体保护蛋白、谷胱甘肽S
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转移酶Y1、40S核糖体蛋白S28、硫氧还蛋白同种型X1、基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型X1、肾
小管间质性肾炎抗原样蛋白、部分细胞质肌动蛋白2同种型X2、半乳糖凝集素
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1、过氧化物还原酶
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1和角质蛋白α。83.权利要求82的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的多聚泛素(如通过LCMS测量的)。84.权利要求82或83的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的溶酶体保护蛋白(如通过LCMS测量的)。85.权利要求82
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84中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的谷胱甘肽S
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转移酶Y1(如通过LCMS测量的)。86.权利要求82
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85中任一项的方法，其中所述原料药包含小于约1ppm的谷胱甘肽S
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转移酶Y1(如通过LCMS测量的)。87.权利要求82
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86中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的40S核糖体蛋白S28(如通过LCMS测量的)。88.权利要求82
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87中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的硫氧还蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。89.权利要求82
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88中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的基底膜特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白同种型X1(如通过LCMS测量的)。90.权利要求82
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89中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白(如通过LCMS测量的)。91.权利要求82
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90中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的部分细胞质肌动蛋白2同种型X2(如通过LCMS测量的)。92.权利要求82
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91中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的半乳糖凝集素
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1(如通过LCMS测量的)。93.权利要求82
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92中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的过氧化物还原酶
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1(如通过LCMS测量的)。94.权利要求82
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93中任一项的方法，其中所述原料药制剂包含小于约1ppm的角质蛋白α(如通过LCMS测量的)。95.一种组合物，其通过权利要求1
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94中任一项的方法生产。96.一种减少在哺乳动物宿主细胞中重组产生的包含抗N3pGlu Aβ抗体的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法，所述方法包括以下步骤：a)使蛋白质制剂经亲和层析柱处理；b)从层析柱中洗脱抗N3pGlu Aβ抗体，以获得包含抗N3pGlu Aβ抗体的洗脱物；c)必要时，将洗脱物的pH调整到pH 5.0至pH 7.5，使洗脱物经深层过滤器处理，并且获得过滤的蛋白质制剂，其中所述深层过滤器是完全合成的深层过滤器。97.权利要求96的方法，其中所述层析柱包含蛋白A、蛋白G或蛋白L亲和层析柱。98.权利要求96或97的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约9μ至约0.1μ。99.权利要求98的方法，其中所述深层过滤器的孔径为至少约2μ至约0.1μ。100.权利要求99的方法，其中所述深层过滤器的孔径为约0.1μ。101.权利要求96
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100中任一项的方法，其中所述深层过滤器是X0SP过滤器。102.权利要求96
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101中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的pH为约5.0。
103.权利要求96
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101中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的pH为约6.0。104.权利要求96
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101中任一项的方法，其中所述深层过滤器上的洗脱物的pH为约7.0。105.权利要求96
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104中任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。106.权利要求96
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105中任一项的方法，其中所述蛋白质制剂包含收获的细胞培养液、捕获池或回收的蛋白质池。107.权利要求96至106中任一项的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体或抗体片段。108.权利要求107的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体是IgG1抗体。109.权利要求96至108中任一项的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体包含重链(HC)和轻链(LC)，其中所述轻链包含轻链可变区(LCVR)并且所述重链包含重链可变区(HCVR)，其中所述LCVR包含氨基酸序列LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述HCVR包含氨基酸序列HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是KSSQSLLYSRGKTYLN(SEQ ID NO：17)，LCDR2是AVSKLDS(SEQ ID NO：18)，LCDR3是VQGTHYPFT(SEQ ID NO：19)，HCDR1是GYDFTRYYIN(SEQ ID NO：20)，HCDR2是WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO：21)，并且HCDR3是EGITVY(SEQ ID NO：22)。110.权利要求109的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体的LC包含LCVR，并且所述抗N3pGlu Aβ抗体的HC包含HCVR，其中所述LCVR是DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWLLQKPGQSPQLLIYAVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：13)，并且所述HCVR是QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFTRYYINWVRQAPGQGLEWMGWINPGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITVYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：14)。111.权利要求109或权利要求110的方法，其中所述抗N3pGluAβ抗体的LC是DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWLLQKPGQSPQLLIYAVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHYPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：15)，并且所述抗N3pGlu Aβ抗体的HC是QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFTRYYINWVRQAPGQGLEWMGWINPGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITVYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：16)。112.权利要求111的方法，其中所述抗N3pGlu Aβ抗体是多奈单抗。113.权利要求109至112中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量小于100ppm(如通过LCMS测量的)。114.权利要求109
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113中任一项的方法，其中所述过滤的蛋白质制剂包含以下宿主细胞蛋白质中的一种、组合或全部：蛋白质S100
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A6、蛋白质S100
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A11、磷脂酶B样2蛋白、溶酶体保护蛋白、泛素40S核糖体蛋白S27a、激肽释放酶
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【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：