鉴定冠状病毒的交叉反应性抗体的方法技术

本发明专利技术用于鉴定冠状病毒的交叉反应性抗体的方法。此种抗体结合至少一常见人类冠状病毒的的S2胞外域的至少一部分，所述常见人类冠状病毒是选自HCoV

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】鉴定冠状病毒的交叉反应性抗体的方法


[0001]本专利技术涉及用于鱼类的早期性别决定的方法，特别是平头鲻鱼(flathead grey mullet)以及生产此种鱼的偏好性别的单性群体的方法。

技术介绍

[0002]冠状病毒是包膜RNA病毒，可感染哺乳动物及鸟类。α冠状病毒及β冠状病毒感染哺乳动物(例如，牛冠状病毒(bovine coronavirus，BCoV)；犬冠状病毒(canine coronavirus，CCoV)，猫冠状病毒(feline coronavirus，FCoV)及人类冠状病毒(human coronavirus，HCoV)，而γ冠状病毒及δ冠状病毒通常感染鸟类。大多数的冠状病毒仅感染一种宿主物种。然而，跨物种传播亦可能发生，且是人类疾病(即，人畜共患病)出现的重要原因。
[0003]冠状病毒编码许多病毒蛋白，包括刺突蛋白、膜蛋白、包膜蛋白及核衣壳蛋白。刺突蛋白(S蛋白)是一大的第I型跨膜、第I类融合蛋白。S蛋白的胞外域包含一个S1结构域及一个S2结构域。N端的S1结构域包括受体结合结构域(receptor binding domain，RBD)，且负责受体结合。S1结构域，尤其是S1 RBD，已成为对抗特定的冠状病毒所开发的许多抗体及疫苗的目标位点。C端的S2胞外域负责融合，且包括一个UH(upstream helix)结构域(上游螺旋)、一个融合肽、两个七肽重复(heptad repeat)序列(HR1及HR2)、一个中央螺旋及一个β发夹。此等区域及此种区域的示例性序列是本领域已知的，且先前已经报道冠状病毒的序列比对(参见，例如，沃斯等人，Nature 2016 531:114
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117，特别是延伸的数据图9)。
[0004]已知七种冠状病毒会感染人类。被四种人类冠状病毒感染，即，HCoVs
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229E、OC43、NL63及HKU1感染，通常会导致轻度至重度的上呼吸道及下呼吸道疾病。此等病毒约占常见感冒的15％。被三种人类冠状病毒，即，中东呼吸综合征相关冠状病毒(Middle East respiratory syndrome
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related coronavirus，MERS
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CoV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS
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CoV)及严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS
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CoV
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2)；感染会导致严重的症状以及死亡。人类很可能从单峰骆驼感染MERS
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CoV；从蝙蝠感染SARS
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CoV；蝙蝠亦可能为SARS
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CoV
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2的储存宿主。
[0005]病毒受体结合及病毒融合对于病毒进入一宿主细胞是至关重要的。冠状病毒的刺突蛋白与不同的靶标结合，以介导传染性。SARS
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CoV
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2、SARS
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CoV
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1及NL63结合至ACE2、OC43及HKU1结合至9
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O
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乙酰化唾液酸、MERS
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CoV结合至DPP4及唾液酸，以及229E结合至APN。在此等病毒之间的另一区别因子为是否存在人类弗林蛋白酶(furin)切割位点的病毒的刺突蛋白S。其存在于SARS
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CoV
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2、OC43、HKU1及MERS
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CoV的S蛋白中，但不存在于NL43、229E及SARS
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CoV的S蛋白中。
[0006]SARS
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CoV
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2亦称为COVID
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19病毒(即，导致2019冠状病毒疾病的新型冠状病毒)。Covid
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19大流行导致一场巨大的健康危机，为此迫切需要新的解决方案来预防、减轻或治愈此感染。本公开的一目的是提供一种用于增加对抗SARS
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CoV
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2以及其他的致病性冠状病
毒的免疫力的方法及组合物。
[0007]在荷兰等国家，严重的COVID
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19导致住院高峰的主要风险群体在介于70与80岁之间，而COVID
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19死亡率高峰在介于80与90岁之间。此群体有越来越多的合并症，其中大多数是非传染性的。因此，COVID
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19是一种衰老的急症，如肺炎球菌性肺炎、严重流感、带状疱疹及百日咳(圣坦斯马斯逸斯D等人，COVID
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19是一种紧急的衰老的急症，MedRxiv 2020)。同一群体的免疫力下降，且针对此年龄群体的疫苗反应性不佳。这仍然是老年人疫苗效力的主要障碍。

技术实现思路

[0008]虽然不希望受理论的束缚，但本公开提出“常见”HCoV(例如，HCoVs
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229E、OC43、NL63及HKU1)的感染，特别是同时感染或连续感染，会诱导对抗诸如致病性HCoV的异源病毒株的交叉反应性B细胞。本文中所公开的方法将此等交叉反应性B细胞与体内模型结合起来，以鉴定提供体内泛冠状交叉保护的抗体。此种方法不同于传统的研究，所述传统的研究根据例如体外中和活性研究或从恢复期的COVID
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19患者中选择候选抗体。
[0009]从本文中所述的方法所鉴定出的抗体对于保护发生严重及可能危及生命的感染风险的受试者特别有用，包括严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)。此种抗体亦可用作预防冠状病毒的跨物种传播的第一道防线。
[0010]本专利技术提供以下较佳的实施例。然而，本专利技术不限于此等实施例。
[0011]在一方面，提供一种鉴定冠状病毒的交叉反应性抗体的方法，所述方法包括步骤：
[0012](a)提供来自一或多位人类受试者的血浆样本，优选地至少45岁或以上，所述样本在一时间点(X)独立地被收集，
[0013](b)可选地且优选地，鉴定具有血浆样本的受试者，所述血浆样本具有结合至少两种，优选地至少四种人类冠状病毒(HCoV)的免疫球蛋白，其中所述HCoV是选自HCoV
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NL63、HCoV
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OC43、HCoV
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229E及HCoV
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HKU1；
[0014](c)提供来自所述经鉴定的受试者的PBMC样本，其中所述PBMC样本在时间点(X)或更晚被收集，且所述PBMC样本包括选自记忆B细胞、浆细胞及浆母细胞的B细胞；
[0015](d)筛选由(c)的B细胞所编码的抗体或其抗原结合片段，以结合来自至少两种，优选地至少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于鉴定冠状病毒的交叉反应性抗体的方法，其特征在于：所述方法包括步骤：(a)提供来自一或多位人类受试者的血浆样本，优选地至少45岁或以上，所述样本在一时间点(X)独立地被收集，(b)鉴定具有血浆样本的受试者，所述血浆样本具有结合至少两种，优选地至少四种人类冠状病毒(HCoV)的免疫球蛋白，其中所述HCoV是选自HCoV
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NL63、HCoV
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OC43、HCoV
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229E及HCoV
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HKU1；(c)提供来自所述经鉴定的受试者的PBMC样本，其中所述PBMC样本在时间点(X)或更晚被收集，且所述PBMC样本包括选自记忆B细胞、浆细胞及浆母细胞的B细胞；(d)筛选由(c)的B细胞所编码的抗体或其抗原结合片段，以结合来自至少两种，优选地至少四种不同的冠状病毒的S(刺突)蛋白的S2胞外域的至少一部分；(e)选择抗体或其抗原结合片段，其结合至少一常见人类冠状病毒的S蛋白的S2胞外域的至少一部分，所述常见人类冠状病毒是选自HCoV
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NL63、HCoV
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OC43、HCoV
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229E及HCoV
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HKU1，以及结合至少一高致病性人类冠状病毒的S蛋白的S2胞外域的至少一部分，所述高致病性人类冠状病毒是选自SARS
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CoV
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1、MERS
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CoV及SARS
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CoV
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2；优选地，其中所述经选择的抗体或其抗原结合片段亦结合一动物冠状病毒的S蛋白的S2胞外域的至少一部分；(f)从(e)中选择抗体或其抗原结合片段，其抑制至少一常见人类冠状病毒的病毒融合、感染及/或复制，所述常见人类冠状病毒是选自HCoV
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NL63、HCoV
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OC43、HCoV
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229E及HCoV
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HKU1，以及其抑制至少一高致病性人类冠状病毒的病毒融合、感染及/或复制，所述高致病性人类冠状病毒是选自SARS
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CoV
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1、MERS
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CoV及SARS
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CoV
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2；(g)确定来自(f)的经选择的抗体或其抗原结合片段在选自SARS
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CoV
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1、MERS
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CoV及SARS
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CoV
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2的HCoV感染的体内模型中预防或降低感染的能力；以及(h)选择在选自SARS
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CoV
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1、MERS
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CoV及SARS
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CoV
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2的HCoV感染的体内模型中预防或降低感染的抗体或其抗原结合片段。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法进一步包括步骤：提供来自多个受试者的额外的血浆样本，其中所述样本在一时间点(Y)被收集，其中时间点(Y)比时间点(X)早或晚至少3个月。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：选择来自一受试者的血浆样本，相较于在较早或较晚的时间点所收集的受试者的血浆样本，其具有增加的免疫球蛋白，所述免疫球蛋白结合至少两种HCoV。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于：所述血浆样本具有独立地结合至少两种HCoV的IgG、IgM及/或IgA免疫球蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述免疫球蛋白结合HCoV刺突蛋白的S2结构域。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(d)包括筛选抗体或其抗原结合片段，以结合来自至少两种、...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾普，
申请(专利权)人：莱顿实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：