可视化检测大豆疫霉菌的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及农业与植物检疫检测技术领域，尤其涉及一种可视化检测大豆疫霉菌的方法及试剂盒，方法包括步骤：S1、管盖和管底分别放置RPA体系和CRISPR/Cas12a体系，对待测样品进行RPA扩增；S2、将CRISPR/Cas12a体系转入到反应管中孵育；在crRNA的介导下，切割两端修饰有FAM和BHQ1的报告序列，分别形成FAM

【技术实现步骤摘要】
可视化检测大豆疫霉菌的方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及农业与植物检疫检测
，尤其涉及一种可视化检测大豆疫霉菌的方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]大豆是我国重要的粮食和油料作物，在我国东北、黄淮海等地区有广泛种植区域。随着中国经济发展，人民生活水平逐渐提高，对植物蛋白、豆油等需求越来越高；畜牧企业高速发展，大豆豆粕成为猪牛羊等牲畜的主要饲料；此外，我国大豆蛋白产业不断发展，我国大豆蛋白产品已占据国际大豆蛋白市场份额的50 %，中国成为了世界最大的大豆蛋白出口国。我国对大豆的需求总量逐年攀升，消费量常年超过1亿吨，仅2021年我国大豆消费量就达到了10872万吨。虽然，我国是全球第四大大豆主产国，但我国大豆自给率仍不足15 %，是世界上最大的大豆进口国。中国从1996年开始，由大豆净出口国转为大豆净进口国，此后进口量逐年增加。据中国海关总署统计数据，2021年我国大豆进口量达9652万吨，占全国总需求的85.5 %，是进口依赖度最高的粮食作物。我国主要大豆进口国有巴西、美国、阿根廷等大豆主产国，每年进口量都在1亿吨左右，占全球大豆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可视化检测大豆疫霉菌的方法，其特征在于，所述可视化检测大豆疫霉菌的方法包括步骤：S1、将RPA体系混匀置入反应管的管底，并加入待测样品基因组，将CRISPR/Cas12a体系混匀置入所述反应管的管盖，将所述管底置于保温装置中，对所述反应管中的待测样品的基因组中的目的片段进行RPA扩增；所述目的片段包括如SEQ ID No.4所示的核酸序列对应的DNA序列；S2、完成所述RPA扩增后，所述反应管中含有RPA扩增产物，将所述管盖中的所述CRISPR/Cas12a体系转入到所述反应管中，孵育；在crRNA的介导下，所述CRISPR/Cas12a体系蛋白特异性识别特异的扩增片段，激活核酸酶活性，切割两端修饰有FAM和BHQ1的报告序列，分别形成FAM
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ssDNA与BHQ1
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ssDNA；S3、对S2中的反应体系溶液进行荧光强度的可视化检测；当所述反应体系溶液发出荧光，所述待测样品含有大豆疫霉菌；当所述反应体系溶液未发出荧光，所述待测样品不含有大豆疫霉菌。2.如权利要求1所述的可视化检测大豆疫霉菌的方法，其特征在于，所述RPA扩增使用的引物序列包括RPA
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F和RPA
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R；所述RPA
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F包括如SEQ ID No.1所示的核酸序列对应的DNA序列；所述RPA
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R包括如SEQ ID No.2所示的核酸序列对应的DNA序列。3.如权利要求1所述的可视化检测大豆疫霉菌的方法，其特征在于，所述RPA扩增的温度为38℃，所述RPA扩增的时间为15 min。4.如权利要求1所述的可视化检测大豆疫霉菌的方法，其特征在于，所述CRISPR/Cas12a体系包括针对所述目的片段的特异性crRNA、Cas12a蛋白和ssDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈庆河，李智婷，冯婉珍，董嘉丽，陆圣诞，
申请(专利权)人：海南大学三亚研究院，
类型：发明
国别省市：