一种贝莱斯芽孢杆菌LG001及其应用制造技术

一种贝莱斯芽孢杆菌LG001，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），于2021年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23366，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述的贝莱斯芽孢杆菌LG001在防治植物病原真菌药物中的应用。本发明专利技术贝莱斯芽孢杆菌LG001能产生多种抑菌物质，对多种植物病原真菌的生长均具有明显的抑制作用，抑菌效果好，是一种安全、高效、广谱防治植物真菌病害的新型生防微生物。提供的生防菌剂，防治效果良好，且不会造成环境污染，能够代替农药对黄瓜灰霉病等进行防治，有显著的社会和经济效益。有显著的社会和经济效益。有显著的社会和经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种贝莱斯芽孢杆菌LG001及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别是对多种植物病原菌具有显著拮抗作用的一种贝莱斯芽孢杆菌LG001及其应用。

技术介绍

[0002]灰葡萄孢菌(Botryiscinerea)属于半知菌亚门灰葡萄孢属，是引起黄瓜灰霉病的病原菌。灰葡萄孢菌侵染生长期的黄瓜植株，造成其产量和品质严重下降，造成较重的经济损失。
[0003]目前，灰葡萄孢菌的防治主要以化学防治为主，如苯并咪唑类、苯氨基嘧啶类、二甲基酰亚胺类、琥珀酸脱氢酶抑制剂类等杀菌剂。然而，化学药剂的频繁使用造成了大量耐药性灰霉病菌的出现。为保证防效，往往通过加大用药剂量和施用频率防治病害，从而导致农药残留超标。此外，农药残留对土壤、水体的污染也在逐渐加剧破坏农业的生态平衡。
[0004]相比于化学防治，生物防治具有低污染、无毒残留、专一性好的优势。贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)作为近年来生防细菌的研究热点，国内外有关其的报道越来越多，除了拮抗病原菌、促进动植物生长、抑菌物质及其基因簇鉴定、拮抗作用机制等方面的基础研究，贝莱斯芽孢杆菌在农业生产中的应用也越来越多。目前已有多篇专利报道贝莱斯芽孢杆菌在防治植物病害中的应用。因此，该菌在生物防治和农业生产方面具有很好的应用前景，那么能否提供一株贝莱斯芽孢杆菌，对多种植物病原菌都具有显著拮抗作用，但至今未见公开报道。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种贝莱斯芽孢杆菌LG001及其应用，可有效解决现有生防细菌种类较少，选择受限，抗菌谱窄和防效欠佳的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决的技术方案是，一种贝莱斯芽孢杆菌LG001，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，于2021年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23366，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0007]所述的贝莱斯芽孢杆菌LG001在防治植物病原真菌药物中的应用。
[0008]一种生防菌剂，该生防菌剂的有效成分为贝莱斯芽孢杆菌LG001，生防菌剂为贝莱斯芽孢杆菌LG001的培养菌悬液、发酵液或发酵产生的代谢产物及挥发性物质。
[0009]所述生防菌剂在防治黄瓜灰霉病药物中的应用。
[0010]本专利技术贝莱斯芽孢杆菌LG001能产生多种抑菌物质，对多种植物病原真菌的生长均具有明显的抑制作用，抑菌普广，抑菌效果好，具有较好的生物防治作用。是一种安全、高效、广谱防治植物真菌病害的新型生防微生物。提供的生防菌剂，具有制备简单，成本低，易于工业化生产，防治效果良好，且不会造成环境污染，能够代替农药对黄瓜灰霉病等进行防
治，保障食品安全有重要意义，有显著的社会和经济效益。
附图说明
[0011]图1是本专利技术贝莱斯芽孢杆菌LG001在NA培养基上的菌落形态图；其中，A为菌落形态，B为显微镜下菌体形态。
[0012]图2是本专利技术贝莱斯芽孢杆菌LG001的16SrDNA序列进化系统发育树。
[0013]图3是本专利技术贝莱斯芽孢杆菌LG001发酵液对不同植物病原真菌的抑制作用图。
[0014]图4是本专利技术不同菌种对灰葡萄孢菌的抑制作用对比图，其中，a:CK(NB液体培养基)；b:贝莱斯芽孢杆菌LG001；c:贝莱斯芽孢杆菌LG001发酵液(0.2um滤膜过滤)；d:50％可湿性粉剂多菌灵(d4:10ug/mL)。
具体实施方式
[0015]以下结合附图和具体情况对本专利技术的具体实施方式作详细说明。
[0016]本专利技术菌株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)LG001，是以驻马店正阳县长期种植黄瓜的根际土壤中分离得到的。分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，于2021年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.23366，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0017]该菌株在防治植物病原真菌药物中的应用，所述植物病原真菌为黄瓜灰霉病菌、瓜果绵腐病菌、花生白绢病菌、猕猴桃黑斑病菌、西瓜枯萎病菌、玉米茎基腐病菌、马铃薯晚疫病菌、禾谷镰刀菌中的一种或多种。
[0018]本专利技术还提供一种生防菌剂，有效成分为贝莱斯芽孢杆菌LG001，生防菌剂为贝莱斯芽孢杆菌LG001的发酵液，其采用以下步骤制得：将活化好的贝莱斯芽孢杆菌LG001接种至无菌的LB液体培养基，180r/min，30℃培养48h，即得发酵液，也就是生防菌剂。
[0019]该生防菌剂在防治黄瓜灰霉病药物中的应用。
[0020]本专利技术贝莱斯芽孢杆菌LG001能产生多种抑菌物质，对多种植物病原真菌都具有明显的抑制作用，抑菌普广，抑菌效果好，具有较好的生物防治作用，且该菌株发酵得到的生防菌剂，具有制备简单，成本低，易于工业化生产，防治效果良好，且不会造成环境污染，并经实验取得了非常好的有益技术效果，有关资料如下：
[0021]一、菌株的筛选与鉴定
[0022](1)、取驻马店正阳县长期种植黄瓜的根际土壤样品2.00g，加入有玻璃珠的无菌锥形瓶中，再加入20mL无菌生理盐水，放入摇床内30℃，180r/min振荡20min，静置5min。取上清液采用十倍稀释法依次稀释到10
‑2、10
‑3、10
‑4和10
‑5浓度，每个浓度分别吸取100μL涂布于LB培养基上，涂布均匀，每个浓度重复三次，平板倒放，置于30℃培养箱培养，根据细菌菌落的形态、颜色的不同挑选出不同细菌。
[0023](2)、采用平板对峙法筛选拮抗细菌。挑取直径5mm带有菌丝的不同植物病原真菌的固体培养基，接种至PDA平板中央，并使用无菌接种环蘸取细菌菌落接种至两侧，置于28℃培养箱培养4d，观察抑菌直径，每组三次重复。对平板上筛选到的具有抑菌活性的细菌转移至NA培养基，进行纯化、培养，即得到纯化的抑菌作用最强的活性菌株，即贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)LG001。
[0024]二、菌株的形态鉴定
[0025]菌株LG001接种于NA平板培养基上，30℃条件下培养16h，观察菌落形态，呈圆形，乳白色，表面光滑，边缘不整齐，质地粘稠，有褶皱(如图1A)。菌株LG001的菌体在显微镜下呈短杆状(如图1B)，革兰氏染色为阳性。
[0026]使用VITEK芽孢菌鉴定卡对菌株LG001的生理生化特性进行鉴定，结果如表1所示。
[0027]表1LG001用于鉴定的生化反应
[0028][0029]三、菌株的分子生物学鉴定
[0030]生理生化的鉴定参考东秀珠等(2001)的方法。采用菌落PCR的方法对菌株LG001进行16SrDNA的扩增。使用引物为通用引物27F(5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种贝莱斯芽孢杆菌LG001，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），于2021年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23366，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌LG001在防治植物病原真菌药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的植物病原真菌为黄瓜灰霉病菌、瓜果绵腐病菌、花生白绢病菌、猕猴桃黑斑病菌、西瓜枯萎病菌、玉米茎基...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷高，杨文玲，权淑静，王佰涛，刘德海，刁文涛，李珊珊，李亮亮，胡虹，巩涛，李磊，甄静，马焕，王继雯，冯菲，解复红，张志龙，陈国参，
申请(专利权)人：河南省科学院，
类型：发明
国别省市：