毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的用途。药理试验表明，毛花苷C能够有效抑制猪流行性腹泻病毒在细胞和仔猪体内的增殖，可作为药效成分配以辅助剂制成制剂用于防治猪流行性腹泻病毒感染导致的疾病。病。病。

【技术实现步骤摘要】
毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及毛花苷C在抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用。

技术介绍

[0002]猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在分类上属于冠状病毒科，冠状病毒属，是一种包膜的单链RNA病毒，全长约28kb。已知的PEDV有两种基因类型，基因组I(GI)和基因组II(GII)。PEDV最早于1978年在比利时被分离。此后在全世界不断有报道存在，尤其在养殖业较为发达的亚洲国家造成的危害较大。2010年10月，中国南方爆发了由PEDV高毒力变异株引起的严重猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)疫情，随后蔓延到其他省份，死亡率为70％～100％。此后，在其他国家也发现了高毒力的PEDV毒株，包括美国、加拿大、墨西哥、奥地利、比利时、法国、德国和意大利。PEDV主要感染猪小肠绒毛上皮细胞，引起绒毛肠道细胞的紧密连接的破坏及粘蛋白数量减少，同时丢失许多肠道细胞和显著减少各种消化酶，从而导致肠道吸收和消化不良。
[0003]目前对PED防控措施主要是采取生物安全防控结合疫苗进行，临床上所用的PED疫苗主要包括弱毒疫苗和灭活疫苗。由于PEDV基因型种类繁多，易发生基因变异，使得毒株毒力增强，现有疫苗难以持续发挥保护作用。抗病毒药物治疗被认为是治疗PEDV的一种有效方法，可以弥补疫苗效果不佳而造成的损失。到目前为止，仍然缺乏获批的特异性药物对PED进行有效地防控，因此亟需不断探索和开发抗PEDV药物。
[0004]毛花苷C(Lanatoside C,LC)是从毛花洋地黄(Digitalis lanata Ehrh.)中提取的一种速效强心苷，系去乙酰毛花苷丙和地高辛的前体。临床上用于治疗急性心力衰竭、慢性心力衰竭性加重、快速室率的心房颤动、心房扑动和阵发性室上性心动过速。此外，据报道毛花苷C具有抗登革热病毒、抗肿瘤和抗菌等药理作用。有关毛花苷C抗PEDV感染作用的研究及其在防治PEDV感染上的应用未见报道，也未见相关的专利公开。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用。
[0006]本申请中药物还含有药学上可接受的辅料；所述药物的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。
[0007]本申请中毛花苷C对猪流行性腹泻病毒具有抗病毒活性。
[0008]本申请中毛花苷C能够降低猪流行性腹泻病毒中N蛋白的表达量，且用于降低猪流行性腹泻病毒中N蛋白表达量的毛花苷C的浓度为0.125
‑
0.5μM。
[0009]本申请中毛花苷C能够抑制猪流行性腹泻病毒中RNA的转录。
[0010]本申请中抑制猪流行性腹泻病毒中RNA转录的毛花苷C的浓度为0.125
‑
0.5μM。
[0011]本申请中毛花苷C能够抑制猪流行性腹泻病毒中子代病毒的复制。
[0012]本申请中抑制猪流行性腹泻病毒中子代病毒复制的毛花苷C的浓度0.125
‑
0.5μM。
[0013]本申请中毛花苷C在仔猪体内对猪流行性腹泻病毒的复制具有抑制作用。
[0014]本申请中猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染会引起猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)疾病，本申请中毛花苷C应用于制备抗猪流行性腹泻病毒感染的药物，但不限于，使用本专利技术的化合物的有效量用于预防或治疗猪流行性腹泻病毒引发的疾病，减轻猪流行性腹泻病毒引发的疾病症状或者延缓猪流行性腹泻病毒引发的疾病的发展的药品的用途。
[0015]本申请中所述药物还含有药学上可接受的辅料。所述辅料可以是载体、赋形剂、稀释剂、媒介物等。
[0016]本申请具有如下有益效果：本申请发现了毛花苷C在抑制猪流行性腹泻病毒中的新用途。在Vero细胞上，毛花苷C对PEDV毒株的半数有效浓度(EC
50
)值为0.11μM。同时，毛花苷C能够有效地降低PEDV在Vero细胞中的病毒滴度，在最高给药剂量0.5μM下，给药48小时后病毒抑制率达到99％。此外，新生仔猪口服1mg/kg剂量的毛花苷C可显著抑制仔猪体内PEDV的复制。上述结果表明本专利技术的毛花苷C对猪流行性腹泻病毒具有显著抑制作用，有着临床治疗或预防PEDV感染的应用价值。
附图说明
[0017]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]附图中：
[0020]图1是实施例1中评估毛花苷C对Vero细胞的细胞毒性作用(CC
50
)及其在细胞上抗PEDV病毒活性(EC
50
)的统计图；
[0021]图2是实施例2中免疫荧光法分析不同浓度的毛花苷C在细胞中对PEDV病毒N蛋白表达量的降低作用的免疫荧光图；
[0022]图3是实施例3中Western Blot分析不同浓度的毛花苷C在细胞中对PEDV病毒N蛋白表达量的降低作用的Western Blot蛋白印迹图；
[0023]图4是实施例4中qRT
‑
PCR分析不同浓度的毛花苷C在细胞中对PEDV病毒RNA增殖的抑制作用所对应的mRNA相对表达量的数据统计图；
[0024]图5是实施例5中终点稀释法分析不同浓度的毛花苷C在细胞中对PEDV子代病毒的抑制作用所对应的病毒滴度统计图。
[0025]图6是实施例6中qRT
‑
PCR分析毛花苷C在仔猪体内对PEDV复制的抑制作用所对应的病毒mRNA统计图。
具体实施方式
[0026]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的保护范
围。若未特别指明，本发实施例中所用的实验材料、试剂、仪器等均可市售获得；若未具体指明，本专利技术实施例中所有的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0027]实施例1：评估毛花苷C对Vero细胞的细胞毒性作用(CC
50
)及其在细胞上抗PEDV病毒活性(EC
50
)。
[0028]将密度为1.5
×
105个/mL的Vero细胞接种在96孔板中，每孔100μL，待其长满至单层后，PBS清洗两遍，用含有2％ FBS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用。2.根据权利要求1所述的毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用，其特征在于，所述毛花苷C对猪流行性腹泻病毒具有抗病毒活性。3.根据权利要求1所述的毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用，其特征在于，所述毛花苷C能够抑制猪流行性腹泻病毒中子代病毒的复制。4.根据权利要求3所述的毛花苷C在制备抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用，其特征在于，浓度为0.125

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建新，何应敏，苏国明，林琪胜，曾振灵，黄显会，宋高鹏，龙飞翔，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：