一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法技术

本发明专利技术提供一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法，该方法以瑞鲍迪甙A或瑞鲍迪甙J为底物，使所述底物在糖基供体存在下，在UDP

【技术实现步骤摘要】
一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法
[0001]本申请是CN201680089986.1的分案申请。


[0002]本专利技术涉及一种瑞鲍迪甙N的制备方法，特别涉及一种瑞鲍迪甙N的生物制备方法。

技术介绍

[0003]甜味剂是一类广泛应用于饮料及糖果等食品生产的食品添加剂，其既可以在食品的生产过程中添加，也可以在家庭烘焙时经过适当稀释作为蔗糖的替代品使用。甜味剂包括天然甜味剂和人工甜味剂，前者包括蔗糖、高果糖玉米糖浆、蜜糖等，后者包括阿斯巴甜、糖精等。甜菊糖是一类从植物甜菊中提取出来的天然甜味剂，目前已被广泛用在食品及饮料中。甜菊的提取物中具有包含瑞鲍迪甙在内的多种甜菊糖，天然提取的甜菊糖不同的批次成分差异较大，需要后续的提纯。
[0004]瑞鲍迪甙N在甜菊叶中甜菊糖的比例不超过1.5％，用传统提取的方法得到高纯度的瑞鲍迪甙N极其困难，限制了对瑞鲍迪甙N的深入研究，也阻碍了其商业化的应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法，该方法可以较低的成本、较短的周期生产出高纯度的瑞鲍迪甙N产品。
[0006]为解决以上技术问题，本专利技术采取如下技术方案：
[0007]一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法，以瑞鲍迪甙A为底物，在糖基供体存在下，在含有UDP
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糖基转移酶的重组细胞和/或其制备的UDP
‑
糖基转移酶的催化下，反应生成瑞鲍迪甙N。
[0008]一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法，以瑞鲍迪甙J为底物，在糖基供体存在下，在含有UDP
‑
糖基转移酶的重组细胞和/或其制备的UDP
‑
糖基转移酶的催化下，反应生成瑞鲍迪甙N。
[0009]优选地，所述糖基供体包括葡萄糖基供体、鼠李糖基供体中一种或二种，所述葡萄糖基供体为UDP
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葡萄糖或由蔗糖、蔗糖合成酶及UDP组成的UDP
‑
葡萄糖再生体系(2007，FEBS Letters，581，2562
‑
2566)，所述鼠李糖基供体为UDP
‑
鼠李糖。其中，优选由蔗糖、蔗糖合成酶和UDP组成的UDP
‑
葡萄糖再生体系，UDP葡萄糖价格较高，采用由UDP
‑
葡萄糖再生体系可以大幅度降低成本。
[0010]优选地，所述UDP
‑
糖基转移酶(即尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶，简称UGT，是已知的)包括来自甜菊(Stevia rebaudiana)的UGT
‑
A、来自水稻(Oryza sativa)的UGT
‑
B中的一种或二种。
[0011]优选地，所述UDP
‑
糖基转移酶包括来自甜菊的UGT
‑
A和来自水稻的UGT
‑
B；所述UDP
‑
糖基转移酶分两步加入到反应体系中，第一步先加入UGT
‑
B，第二步再加入UGT
‑
A。所述
UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少60％的一致性；和/或，所述UGT
‑
B的氨基酸序列与序列表中所示的序列4具有至少60％的一致性。
[0012]更优选地，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少70％的一致性；和/或，所述UGT
‑
B的氨基酸序列与序列表中所示的序列4具有至少70％的一致性。
[0013]进一步地，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少80％的一致性；和/或，所述UGT
‑
B的氨基酸序列与序列表中所示的序列4具有至少80％的一致性。
[0014]更进一步地，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少90％的一致性；和/或，所述UGT
‑
B的氨基酸序列与序列表中所示的序列4具有至少90％的一致性。
[0015]在某些具体实例中，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2完全一致；和/或，所述UGT
‑
B的氨基酸序列与序列表中所示的序列4完全一致。
[0016]优选地，所述UDP
‑
糖基转移酶为来自甜菊的UGT
‑
A，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少60％的一致性。
[0017]更优选地，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少70％的一致性。
[0018]进一步地，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少80％的一致性。
[0019]更进一步地，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2具有至少90％的一致性。
[0020]在某些具体实例中，所述UGT
‑
A的氨基酸序列与序列表中所示的序列2完全一致。
[0021]根据本专利技术，可以使所述反应在温度4
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50℃以及pH 5.0
‑
9.0的水相体系中进行。优选地，反应在35
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45℃温度以及pH7.5
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8.5的水相体系中进行。
[0022]更优选地，反应在磷酸缓冲溶液中进行。
[0023]更优选地，反应体系含有UDP
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糖基转移酶的重组细胞和细胞通透剂。进一步地，所述细胞通透剂为甲苯，甲苯在反应体系中的体积比浓度为1
‑
3％。
[0024]更优选地，将反应所用全部原料加入到反应釜中，混合均匀后置于设定温度下，搅拌反应。反应完毕后，通过提纯处理即可获得达到使用要求的瑞鲍迪甙N产品。一个具体的提纯方法是经包括树脂分离在内的后处理，按照该提纯方法，可获得纯度高达95％的瑞鲍迪甙N产品。
[0025]优选地，所述重组细胞为微生物细胞。更优选地，所述微生物为大肠埃希氏杆菌、酿酒酵母或毕赤酵母。
[0026]根据本专利技术的一个具体方面：第一步反应底物为瑞鲍迪甙A，UDP
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糖基转移酶为来自水稻的UGT
‑
B，来自水稻的UGT
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B的氨基酸序列与序列4具有至少80％的一致性。第二步反应底物为含第一步反应产物瑞鲍迪甙J的反应液，UDP
‑
糖基转移酶为来自甜菊的UGT
‑
A，来自甜菊的UGT
‑
A的氨基酸序列与序列2具有至少80％的一致性。
[0027]根据本专利技术的又一具体方面：底物为瑞鲍迪甙J，UDP
‑
糖基转移酶为来自甜菊的UGT
‑
A，该来自甜菊的UGT
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法，其特征在于：以瑞鲍迪甙A为底物，在糖基供体存在下，在含有UDP
‑
糖基转移酶的重组细胞和/或其制备的UDP
‑
糖基转移酶的催化下，反应生成瑞鲍迪甙N。2.一种酶法制备瑞鲍迪甙N的方法，其特征在于：以瑞鲍迪甙J为底物，在糖基供体存在下，在含有UDP
‑
糖基转移酶的重组细胞和/或其制备的UDP
‑
糖基转移酶的催化下，反应生成瑞鲍迪甙N。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述糖基供体包括葡萄糖基供体、鼠李糖基供体中一种或二种，所述葡萄糖基供体为UDP
‑
葡萄糖或由蔗糖、蔗糖合成酶及UDP组成的UDP
‑
葡萄糖再生体系，所述鼠李糖基供体为UDP
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鼠李糖。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述UDP
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糖基转移酶包括来自甜菊的UGT
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A、来自水稻的UGT
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B中的一种或二种。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述UDP
‑
糖基转移酶包括来自甜菊的UGT
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A和来自水稻的UGT
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B；所述UDP
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糖基转移酶分两步加入到反应体系中，第一步先加入UGT
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶军华，李国庆，王文霞，郑雷雷，朱春磊，梁晓亮，陈车翘，
申请(专利权)人：百事可乐公司，
类型：发明
国别省市：