一种抗氧化活性肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗氧化活性肽，选自以下序列中的一种或多种：FYSLHTF，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；SSGHTLPAGV，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；TFQGPPHG，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；VLFSNY，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术提供的活性肽具有抗氧化活性，可作为功能活性因子用于开发具有抗氧化作用的食品、保健品、药品。本发明专利技术的活性肽可以为单一活性成分或是作为活性成分之一与其他活性成分协同作用。性成分协同作用。性成分协同作用。

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化活性肽及其应用
[0001]本申请为申请号2021108169215、申请日2021年7月20日、专利技术名称“一种抗氧化活性肽及其应用”的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种抗氧化活性肽及其应用。

技术介绍

[0003]生物活性肽是一些具有特殊生理调节功能的低分子聚合物，一般由2
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20个氨基酸组成，由二十种天然氨基酸以不同组成和排列方式构成。活性肽是药品或功能食品的重要有效成分，与蛋白质相比，活性肽具有分子量小、稳定性高和利于吸收等优点。
[0004]生物分子的氧化是生物体内普遍存在的反应，这会导致大量自由基释放。过量的自由基会导致许多疾病的发生。这些自由基具有很强的活性，这会破坏体内电子的平衡。天然肽可以作为营养补充剂和氧化应激处理中的天然抗氧化剂。
[0005]山核桃(Carya cathayensis Sarg.)，又称“小胡桃”、“核桃揪”，在浙江昌化等地又称为“山蟹”，属于胡桃科(Juglandaceae)山核桃(Carya)属。山核桃属主要分布在北美东部及亚洲东南部，约有18个种，3个亚种，在国内包含5个种：云南山核桃、湖南山核桃、大别山山核桃、浙江山核桃和贵州山核桃。山核桃属植物是我国重要的优质干果和木本油料作物，其中浙江山核桃栽培历史最悠久，产量最高，经济效益最佳。山核桃榨油后的饼粕一般作为废弃物或饲料，造成资源浪费，而山核桃饼粕中含有丰富的活性成分。山核桃饼粕蛋白中含有丰富的精氨酸、谷氨酸和天冬氨酸，对人体的健康有益。水解后的山核桃多肽具有抗氧化、降血糖、免疫调节等生物活性。
[0006]因此，通过对山核桃多肽的筛选、研究，能更有效地利用山核桃蛋白资源，提高山核桃的附加值，具有较大的经济和社会意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种抗氧化活性肽及其应用，以解决现有技术的不足。
[0008]本专利技术采用以下技术方案：
[0009]本专利技术第一方面提供了一种抗氧化活性肽，选自以下序列中的一种或多种：
[0010]FYSLHTF，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0011]SSGHTLPAGV，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0012]TFQGPPHG，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
[0013]VLFSNY，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0014]本专利技术第二方面提供了上述抗氧化多肽在制备具有抗氧化作用的食品、保健品或药品中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术提供的活性肽具有一定的清除DPPH和ABTS自由基的能力，能够对过氧化氢
损伤的Caco
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2细胞起到保护作用。本专利技术提供的活性肽具有抗氧化活性，可作为功能活性因子用于开发具有抗氧化作用的食品、保健品、药品。本专利技术的活性肽可以为单一活性成分或是作为活性成分之一与其他活性成分协同作用。
[0017]本专利技术通过对山核桃多肽的筛选、研究，能更有效地利用山核桃蛋白资源，提高山核桃的附加值，具有较大的经济和社会意义。
附图说明
[0018]图1是山核桃饼粕蛋白酶解物Sephedex G
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25凝胶过滤色谱图。
[0019]图2是FYSLHTF活性肽的HPLC图。
[0020]图3是SSGHTLPAGV活性肽的HPLC图。
[0021]图4是TFQGPPHG活性肽的HPLC图。
[0022]图5是VLFSNY活性肽的HPLC图。
[0023]图6是VYGYADK活性肽的HPLC图。
[0024]图7是YTPEYQTK活性肽的HPLC图。
[0025]图8是FYSLHTF活性肽的质谱图。
[0026]图9是SSGHTLPAGV活性肽的质谱图。
[0027]图10是TFQGPPHG活性肽的质谱图。
[0028]图11是VLFSNY活性肽的质谱图。
[0029]图12是VYGYADK活性肽的质谱图。
[0030]图13是YTPEYQTK活性肽的质谱图。
[0031]图14是6条活性肽的DPPH和ABTS自由基清除率图。
[0032]图15是2条活性肽对受过氧化氢损伤的Caco
‑
2细胞的保护作用图。
具体实施方式
[0033]下面结合实施例和附图对本专利技术做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本专利技术，但并不用来限定本专利技术的实施范围。
[0034]实施例1：抗氧化活性肽的筛选
[0035]首先将山核桃去壳后通过液压榨油机冷榨脱脂，条件为室温，50Mpa，40min。之后将得到的山核桃饼粕粉碎，用石油醚以1:5(g/mL)的料液比于室温下提取1h后进行抽滤，共提取两次后收集滤渣，50℃下干燥至含水量低于4wt％后粉碎过60目筛，于4℃下冷藏备用。
[0036]采用碱提酸沉法提取蛋白：用蒸馏水将上述得到的山核桃脱脂粉按照1：17(g/mL)的料液比制成蛋白质溶液，用1.0mol/L NaOH溶液调节pH至10.0，于50℃水浴3h后，7000r/min 4℃离心20min，取上清液，用1.0mol/L HCl溶液调节pH至4.0，静置2h后，7000r/min 4℃离心20min，取沉淀，蒸馏水洗至中性后
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80℃冷冻干燥24h后得山核桃蛋白，于
‑
20℃保存备用。
[0037]按照2％w/v的底物浓度称取一定量的山核桃蛋白加蒸馏水制成蛋白质溶液，于90℃水浴锅中变性10min后冷却至室温，用1.0mol/L NaOH溶液调节至pH7.7，加入3900U/g(以山核桃蛋白的质量为基准)的复合蛋白酶(所用复合蛋白酶为上海源叶生物科技有限公司所售的复合蛋白酶，货号为S10155，主要包括枯草芽孢杆菌产生的内切蛋白酶)，于55℃条
件下酶解2h。酶解结束后于95℃水浴锅中灭酶10min后冷却至室温，7000r/min 4℃离心20min，取上清液，过0.22μm滤膜，再利用3kDa MWCO超滤膜进行超滤。将滤过液收集，
‑
80℃冷冻干燥24h，
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20℃保存备用。
[0038]用超纯水以0.6mL/min的流速平衡Sephadex G
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25柱(1.6cm
×
80cm)。将上述
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20℃保存的样品取出，溶解于超纯水中，浓度为5mg/mL，再使用0.22μm滤膜过滤得到分子量＜3kDa的多肽样品溶液。然后，将2mL样品溶液加载到平衡良好的Sephadex G
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25柱上，用超纯水洗脱，流速为0.6mL/min，使用自动馏分收集器5分钟收集一管，于280nm波长检测洗脱液吸光值，绘制洗脱曲线，如图1所示，共分离得到F1和F2组分，通过DPPH和ABTS自由基清除法评价本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗氧化活性肽，其特征在于，选自以下序列中的一种或多种：FYSLHTF，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；SSGHTLPAGV，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；TFQGPP...

【专利技术属性】
技术研发人员：何志平，吴峰华，吴绍珍，刘兴泉，胡浩，张娇娇，汪卿卿，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：