胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物悬浮液、碱性磷酸酶标记的GFAP检测抗体溶液、重组GFAP抗原系列校准品、全血样本稀释液、化学发光液、清洗液，灵敏度高、特异性强、可直接用于全血检测。用于全血检测。用于全血检测。

【技术实现步骤摘要】
胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒。

技术介绍

[0002]外源性脑损伤(TBI)是由外力引起脑部创伤，会破坏大脑正常功能，导致人的认知能力或脑部机能受损，是神经外科中最常见的疾病；其后遗症多为头疼(47.9％)与记忆异常(42％)，对患者健康有永久性的影响。目前诊断TBI多使用格拉斯哥昏迷表对神经行为进行评估，结合影像学进行检查；CT扫描是进行临床医生评估的唯一客观简单，且可靠的选择。目前约90％轻度TBI的CT扫描结果呈阴性，只有1％的人需要进行神经外科干预，鉴于CT扫描阳性百分比非常低，且不必要的影像学检测可能会增加辐射诱发癌变的风险；故寻找开发脑损伤标志物具有巨大的临床意义与战略意义。在TBI中，GFAP在1h小时内会进入血液，导致血清中GFAP显著升高。
[0003]胶质纤维酸性蛋白(GFAP，以下简称GFAP)是III类中间丝状体，是一种酸性蛋白，由432个氨基酸组成，相对分子质量为50～52KD，等电位点在5.7
‑
5.8。GFAP存在于中枢神经系统的星形胶质细胞(AS)、周围神经系统中,是AS重要的骨架蛋白；作为星形胶质细胞内的主要骨架蛋白，具有维护星形胶质细胞形态稳定、参与血脑屏障形成、调节突触功能等多种生物学功能；在神经生理活动、神经组织再生及免疫、多种神经疾病的发病中发挥重要作用。
[0004]目前用于GFAP检测的主要方法是酶联免疫吸附分析法(ELISA)，放射免疫测定法(RIA),高效液相色谱法，色相色谱法等。但是这些方法都存在一定的缺陷；RIA法污染大，ELISA反应时间长，自动化较低，灵敏度低，操作繁琐，无法准确测试全血；高效液相与气相色谱法无法广泛用于临床；且部分患者由于头部受伤，对诊断结果的即时性有较高的要求；因此需要一种污染小，操作方便，出结果快，特异性好，灵敏度高，可直接对全血进行检测的检测方法用于胶质纤维酸性蛋白的定量检测。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请提供一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，灵敏度高、特异性强、可直接用于全血检测。
[0006]为达到上述技术目的，本申请采用以下技术方案：
[0007]本申请提供一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物悬浮液、碱性磷酸酶标记的GFAP检测抗体溶液、重组GFAP抗原系列校准品、全血样本稀释液、化学发光液、清洗液。
[0008]优选的，链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物的制备方法如下：将链霉素亲和素包被的磁微粒与生物素化GFAP捕获抗体混匀包被后，进行磁清洗，而后重悬于磁微粒包被缓冲液中，即得链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体
复合物。
[0009]优选的，链霉素亲和素包被的磁微粒与生物素化GFAP捕获抗体的质量比为1:10
‑
40。
[0010]优选的，链霉素亲和素包被的磁微粒的浓度为1
‑
10μg/ml。
[0011]优选的，全血样本稀释液包括如下组分：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、半胱氨酸、甘油、PC
‑
300、BSA、Triton X
‑
100、EDTA
·
2Na
·
2H2O。
[0012]优选的，碱性磷酸酶标记的GFAP检测抗体溶液的制备方法为：将N
‑
琥珀酰亚胺
‑4‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)
‑
环乙烷
‑1‑
羧酸盐活化的GFAP捕获抗体与Traunt
’
s试剂活化的碱性磷酸酶混合，而后进行柱纯化，再分散于酶标缓冲液中。
[0013]优选的，酶标缓冲液包括如下组分：MES、NaCl、MgCl2、PVP、ZnCl2、BSA、Tween
‑
20、PC
‑
300。
[0014]优选的，GFAP检测抗体与GFAP捕获抗体为不同的鼠源单克隆抗体。
[0015]优选的，重组GFAP抗原系列校准品的制备方法为，将重组GFAP抗原溶于校准品缓冲液中，重组GFAP抗原系列校准品的浓度为30pg/ml、900pg/ml。
[0016]优选的，清洗液的组分包括Tris，Tween
‑
20、防腐剂，清洗液的pH值为8
‑
9。
[0017]本申请的有益效果如下：本方案将双抗夹心法与磁微粒化学发光技术相结合，制备可测全血样本中GFAP含量的试剂盒，可达到快速检测，使用条件多样的有点；具有灵敏度高、准确度好、稳定性佳且可实现自动化操作；检测快速，试剂量程宽，线性范围广。
附图说明
[0018]图1为实施例1试剂盒GFAP的标准曲线。
具体实施方式
[0019]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0020]本申请提供一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物悬浮液、碱性磷酸酶标记的GFAP检测抗体溶液、重组GFAP抗原系列校准品、全血样本稀释液、化学发光液、清洗液。
[0021]本方案的原理为：采用双抗体夹心法与磁微粒化学发光技术相结合，通过对试剂工艺开发，可定量检测血清样本与全血样本中的GFAP；将链霉素亲和素包被的磁微粒与生物素化的GFAP抗体通过亲和素与生物素进行包被，形成磁珠
‑
抗体复合物，并按照一定浓度形成工作液；加入GFAP检测样本或重组GFAP抗原系列校准品，通过抗原抗体反应，形成磁微粒
‑
亲和素
‑
生物素
‑
GFAP捕获抗体
‑
GFAP的复合物，再加入碱性磷酸酶标记的GFAP检测抗体，通过抗原抗体反应，GFAP检测抗体与GFAP的另一结合位点特异性结合，形成磁微粒
‑
亲和素
‑
生物素
‑
GFAP捕获抗体
‑
GFAP
‑
GFAP检测抗体
‑
碱性磷酸酶的复合结构，通过磁分离清洗过程，将复合物吸附在加样结构中，加入化学发光液，由仪器检测溶液的发光值(RLU)，根据标准曲线定量计算出测试样品中GFAP的浓度。
[0022]在测定全血样本过程中，本申请的链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕
获抗体复合物所形成的磁珠
‑
抗体复合物与其他组分形成反应体系相较于在检测过程中同步加入的链霉素亲和素包被的磁微粒、生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，包括链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物悬浮液、碱性磷酸酶标记的GFAP检测抗体溶液、重组GFAP抗原系列校准品、全血样本稀释液、化学发光液、清洗液。2.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物的制备方法如下：将链霉素亲和素包被的磁微粒与生物素化GFAP捕获抗体混匀包被后，进行磁清洗，而后重悬于磁微粒包被缓冲液中，即得所述链霉素亲和素包被的磁微粒/生物素化GFAP捕获抗体复合物。3.根据权利要求2所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉素亲和素包被的磁微粒与所述生物素化GFAP捕获抗体的质量比为1:10
‑
40。4.根据权利要求3述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉素亲和素包被的磁微粒的浓度为1
‑
10μg/ml。5.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述全血样本稀释液包括如下组分：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、半胱氨酸、甘油、PC
‑
300、BSA、Triton X
‑
100、EDTA
·
2Na
·
2H2O。6.根据权利要求1所述的胶质纤维酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：张维，王颖，梁叶霄，晏盼盼，
申请(专利权)人：武汉明德生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：