一种血液肿瘤靶向外泌体递送载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种血液肿瘤靶向外泌体递送载体及其应用，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术公开的外泌体递送载体其膜上表达有CD123抗体和CLL

【技术实现步骤摘要】
一种血液肿瘤靶向外泌体递送载体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及一种血液肿瘤靶向外泌体递送载体及其应用。

技术介绍

[0002]急性髓细胞白血病( AML )是髓系血细胞来源的肿瘤，其特征是异常细胞在骨髓和血液中迅速积累增长，严重干扰正常的血细胞生产。AML进展迅速，如果不及时治疗，患者通常在数周或数月内死亡。目前60岁以下患者五年生存率约为35 %，60岁以上患者五年生存率约为10 %。AML的一线治疗主要是化疗，分为诱导和巩固两个阶段。诱导治疗的目标是将白血病肿瘤细胞的数量减少到检测不到的水平来达到完全缓解，巩固治疗的目标是消除任何残留的无法检测的病灶从而实现治愈。随着生命科学与医学技术发展，靶向突变基因的靶向治疗、靶向细胞凋亡通路的治疗和靶向细胞表明抗原的免疫治疗为患者提供了更为精准的AML治疗方案。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种血液肿瘤靶向外泌体递送载体及其应用，以实现对急性髓细胞白血病的靶向治疗。
[0004]在恶性血液肿瘤治疗中，CD123(Interleukin 3 receptor subunit alpha)和CLL
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1(C
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type lectin
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like molecule 1)是临床试验阶段或上市药物治疗AML的重要靶点。Elzonris是一种白介素
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3(IL
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3)与白喉毒素(DT)偶联形成的融合蛋白。该药物是CD123靶向的细胞毒素，用于治疗成人和2岁及以上儿童患者的母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤。塔妥珠单抗(Talacotuzumab)是靶向CD123的单克隆抗体，2021年的临床试验数据表明该单抗并未改善老年AML患者的疗效。通过CLL
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1单抗对AML进行治疗目前有一项临床I期的研究正在进行。IMGN632是一种CD123抗体偶联药物，目前临床前和临床I期的试验数据表明该药物对复发的AML 患者有一定的疗效。伏妥珠单抗(Flotetuzumab)是同时靶向CD3和CD123的单克隆抗体，该抗体目前在I/II期的临床试验数据表明在CD123阳性的复发AML的患者中，获得了30%的完全缓解率，展示了良好的治疗前景。针对CD123和CLL
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1的CAR
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T细胞也有多项临床试验在I和II期临床阶段，针对复发难治的AML患者，展现了一定的客观缓解，但该方法在CAR
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T细胞进入患者体内后会产生严重的副作用，包括细胞因子释放综合征和神经毒性。由于CAR有部分非人源的单克隆抗体制备，因此还会引起免疫反应。此外，CAR
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T细胞的脱靶效应会导致CAR
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T细胞攻击人体内非肿瘤来源的健康细胞，不良反应的严重程度可以从B细胞再生障碍性贫血到导致死亡的极端毒性。
[0005]外泌体又称为小细胞外囊泡，是一种直径30
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150nm的微囊泡，具有典型的磷脂双分子层膜结构以及低免疫原性。在自然的生理状态下，发挥着细胞间核酸、蛋白、脂类等信号分子的运输和通讯作用。由于外泌体能够携带具有抗肿瘤作用的生物分子，且外泌体自身的低免疫原性能够大大降低现有细胞及免疫治疗方案可能引发的严重副作用，并且通过
对外泌体生产的细胞进行基因工程改造，赋予其优异的靶向性等特点。外泌体目前被认为是一种新兴的天然药物递送系统，有望成为新一代的肿瘤治疗技术。目前在外泌体作为药物递送系统的研究中，通过基因工程改造，赋予外泌体膜上同时表达抗CD3和抗EGFR，能够发挥类似双抗体的免疫治疗效果。或者赋予外泌体膜上表达肿瘤细胞靶向肽，能够实现特定肿瘤细胞的靶向性。
[0006]但目前仍然没有靶向急性髓系血液肿瘤细胞的基因工程化外泌体。通过可外泌体实现急性髓系血液肿瘤细胞靶向，进而实现血液肿瘤细胞靶向药物递送，同时外泌体治疗又能降低当前细胞免疫治疗或者抗体相关治疗产生的副作用与免疫排斥反应。
[0007]一方面，本专利技术提供一种外泌体递送载体，其包括外泌体，所述外泌体的膜上表达有第一靶向抗体和第二靶向抗体，所述第一靶向抗体特异性结合CD123抗原，所述第二靶向抗体特异性结合CLL
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1抗原。
[0008]目前还没有靶向急性髓系血液肿瘤细胞的外泌体，现有的基因工程外泌体针对肿瘤细胞仅能实现单一类抗原靶向，或者同时靶向免疫细胞和单一类抗原阳性的肿瘤细胞。由于急性髓系血液肿瘤细胞的来源复杂性，需要复合型靶向的外泌体才能更加高效地实现抗肿瘤药物的递送。而非外泌体递送的抗肿瘤生物治疗中，抗体或抗体偶联毒素药物和CAR
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T细胞免疫治疗造成的副作用以及免疫反应造成的不安全性可以通过外泌体药物递送系统实现极大改善。
[0009]本专利技术首次提供了双重靶向的急性髓系血液肿瘤细胞的基因工程化外泌体，该外泌体同时负载特异性结合CD123和CLL
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1的抗体，能够靶向急性髓系血液肿瘤细胞，有利于实现抗急性髓系血液肿瘤药物的高效递送，其该外泌体递送载体在动物模型中未引起免疫毒性事件，具有良好的安全性，本专利技术为靶向精准治疗急性髓细胞白血病提供了更多选择的递送材料。
[0010]可选地，在一些实施方案中，所述第一靶向抗体和所述第二靶向抗体均为scFv(single chain variable fragment，单链抗体)。
[0011]需要说明的是，在其他的实施方案中，第一靶向抗体和第二靶向抗体的结构形式包括但不限于scFv，只要是能够与抗原靶点特异性结合的抗体结合片段均可，例如Fab、F(ab')2、Fc融合蛋白、二硫键稳定性抗体(disulfide
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stabilized Fv fragment，dsFv)、双链特异性抗体diabody或三链特异性抗体triabody等。
[0012]可选地，在一些实施方案中，所述第一靶向抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013]可选地，在一些实施方案中，所述第二靶向抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0014]使用上述SEQ ID NO.1所示的CD123单链抗体和SEQ ID NO.2所示的CLL
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1单链抗体，相较于选用其他序列的CD123抗体和CLL
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1抗体，具有更高的递送和抗肿瘤效果。
[0015]需要说明的是，在其他的实施例方式中，将SEQ ID NO.3所示和SEQ ID NO.4所示两个抗体序列的重链可变区和轻链可变区交换位置，以形成的新的单链抗体也属于本专利技术的保护范围。
[0016]可选地，在一些实施方案中，在所述外泌体上，所述第一靶向抗体和所述第二靶向抗体与所述外泌体的膜蛋白的胞外段融合以融合蛋白形式存在于所述外泌体的膜上。
EGFP and exosome sonication)和装载后(after EGFP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体递送载体，其特征在于，其包括外泌体，所述外泌体的膜上表达有第一靶向抗体和第二靶向抗体，所述第一靶向抗体特异性结合CD123抗原，所述第二靶向抗体特异性结合CLL
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1抗原；所述第一靶向抗体和所述第二靶向抗体均为scFv；所述第一靶向抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述第二靶向抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；在所述外泌体上，所述第一靶向抗体和所述第二靶向抗体与所述外泌体的膜蛋白的胞外段融合以融合蛋白形式存在于所述外泌体的膜上；所述膜蛋白为CD47；所述融合蛋白从N端到C端依次包括：信号肽、所述第一靶向抗体、所述第二靶向抗体和所述膜蛋白；所述融合蛋白的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王富博，王家亮，邓伟，胡方志，黄梦飞，宋莉苹，
申请(专利权)人：上海晟燃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：