【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于鉴定纳米抗体和纳米抗体亲和力的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年5月1日提交的美国临时申请第63/018,559号的权益，所述申请明确以引用方式整体并入本文中。
技术介绍
[0003]纳米抗体(Nb)是源自骆驼科动物仅重链抗体(HcAb)的V
H
H域的天然抗原结合片段。它们的特征是体积小并且结构坚固、溶解性和稳定性优异、易于生物工程和制造、对人体的免疫原性低以及组织渗透速度快。由于这些原因，Nb已成为尖端生物医学、诊断和治疗应用的有前景的药剂(Muyldermans，2013；Beghein，2017；Rasmussen，2011：Jovcevska，I.和Muyldermans，S，2020)。
[0004]基于展示的技术已被开发用于发现Nb(Lauwereys，1998；Pardon，2014；McMahon，2018；Egloff，2019)。这些方法通常会产生少量靶标合成Nb，它们以中等亲和力结合特定靶标，并且不直接分析自然循环的抗原特异性HcAb/Nb...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种鉴定一组互补决定区(CDR)3、2和/或1纳米抗体氨基酸序列(CDR3、CDR2和/或CDR1序列)的方法，其中与对照相比，减少数目的所述CDR3、CDR2和/或CDR1序列为假阳性，所述方法包括：a.从用抗原免疫的骆驼科动物获得血液样品；b.使用所述血液样品获得纳米抗体cDNA文库；c.鉴定所述文库中每个cDNA的序列；d.从用所述抗原免疫的所述骆驼科动物的相同或第二血液样品中分离纳米抗体；e.用胰蛋白酶或糜蛋白酶消化所述纳米抗体以产生一组消化产物；f.对所述消化产物进行质谱分析以获得质谱数据；g.选择步骤c.中鉴定的与所述质谱数据相关的序列；h.鉴定来自步骤g.的所述序列中的CDR3、CDR2和/或CDR1区的序列；以及i.从步骤h.的所述CDR3、CDR2和/或CDR1区序列中选择那些具有等于或大于所需片段化覆盖百分比的序列；其中当在步骤e.中使用糜蛋白酶时，所述片段化覆盖百分比由式f(x，糜蛋白酶)＝0.0023x2‑
0.0497x+0.7723，x[5，30]确定，或当在步骤e.中使用胰蛋白酶时，所述片段化覆盖百分比由式f(x，胰蛋白酶)＝0.00006x2‑
0.00444x+0.9194，x[5，30]确定，且其中x分别是所述CDR3、CDR2或CDR1区序列的长度；以及j.其中步骤i.的所选序列包含假阳性CDR3、CDR2和/或CDR1序列的数目减少的组。2.如权利要求1所述的方法，其中所述所需片段化覆盖百分比为约30。3.如权利要求1所述的方法，其中所述所需片段化覆盖百分比为约50且在步骤e中使用胰蛋白酶。4.如权利要求1所述的方法，其中所述所需片段化覆盖百分比为约40且在步骤e中使用糜蛋白酶。5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中步骤d.包括从所述血液样品中获得血浆并使用一种或多种亲和分离方法分离纳米抗体。6.如权利要求5所述的方法，其中步骤d.的所述一种或多种亲和分离方法包括蛋白G琼脂糖亲和色谱法和蛋白A琼脂糖亲和色谱法中的一种或多种。7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中步骤d.还包括功能选择步骤，所述步骤包括使用抗原特异性亲和色谱法选择抗原特异性纳米抗体并在不同的严格程度下洗脱所述抗原特异性纳米抗体，从而产生不同的纳米抗体级分，并单独地对每个级分执行步骤e.至i.，以及分别基于所述纳米抗体级分中的每一者中所述CDR3、CDR2和/或CDR1区序列的相对丰度估计所述抗原的每个不同步骤i.CDR3、CDR2和/或CDR1区序列的亲和力。8.如权利要求7所述的方法，其中所述抗原特异性亲和色谱法是与所述抗原结合的树脂。9.如权利要求7所述的方法，其中所述抗原特异性亲和色谱法是与麦芽糖结合蛋白和所述抗原偶联的树脂。10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，所述方法还包括产生具有在步骤i中鉴定的序列的CDR3、CDR2和/或CDR1肽。11.如权利要求1至9中任一项所述的方法，所述方法还包括产生包含具有在步骤i中鉴定的序列的CDR3、CDR2和/或CDR1区的纳米抗体。
12.一种纳米抗体，所述纳米抗体包含选自SEQ ID NO：1
‑
2536和...
【专利技术属性】
技术研发人员：时毅，向宇菲，桑喆，
申请(专利权)人：匹兹堡大学联邦高等教育系统，
类型：发明
国别省市：
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