一种纳米抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种纳米抗体及其制备方法和应用。所述方法包括：将CDR区的核酸序列与纳米抗体骨架的核酸序列连接并插入表达载体中，得到重组表达载体，将所述重组表达载体导入宿主细胞，进行细胞培养，收集培养后细胞并进行蛋白纯化处理，得到纳米抗体。本发明专利技术建立的纳米抗体的快速制备方法可以保证抗体的稳定性和特异性，解决传统抗体结构的不稳定性、聚集性和效价不高等问题，且无需多轮淘选，工艺简单、成本低，能够一次性大批量制备结构稳定且具有特异性的纳米抗体，为疾病诊断方法及抗体药物的开发提供了新思路和新方法。药物的开发提供了新思路和新方法。药物的开发提供了新思路和新方法。

【技术实现步骤摘要】
一种纳米抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种纳米抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]现有技术中主要通过基因工程技术将小鼠抗体的高变区嫁接到人类抗体的恒定结构域上制备抗体药物(参见：Jones,P.T.,et al.,Replacing the complementarity
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determining regions in a human antibody with those from a mouse.Nature,1986.321(6069):p.522
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525.)，此类人源化单克隆抗体在人体内半衰期长且免疫原性的低，但是传统单克隆抗体的体积较大(参见：Sarma,V.R.,et al.,The three
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dimensional structure at 6A resolution ofa human gamma Gl immunoglobulin molecule.J Biol Chem,1971.246(11):p.3753
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速制备纳米抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：将CDR区的核酸序列与纳米抗体骨架的核酸序列连接并插入表达载体中，得到重组表达载体，将所述重组表达载体导入宿主细胞，进行细胞培养，收集培养后细胞并进行蛋白纯化处理，得到纳米抗体。2.根据权利要求1所述的快速制备纳米抗体的方法，其特征在于，所述CDR区包括CDR1、CDR2和CDR3；优选地，所述CDR1的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的序列；优选地，所述CDR2的氨基酸序列包括SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7所示的序列；优选地，所述CDR3的氨基酸序列包括SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示的序列；优选地，所述纳米抗体骨架的氨基酸序列包括SEQ ID NO.12所示的序列。3.根据权利要求1所述的快速制备纳米抗体的方法，其特征在于，所述表达载体包括质粒载体或病毒载体；优选地，所述质粒载体包括pET30a、pET31a、pET32a或pET41a；优选地，所述宿主细胞包括大肠杆菌BL21、大肠杆菌DH5α或大肠杆菌Rosetta。4.根据权利要求1所述的快速制备纳米抗体的方法，其特征在于，所述导入的方法包括热激法、电转化法或基因枪法中的任意一种；优选地，所述细胞培养的温度为20～30℃，所述细胞培养的时间为6～20h；优选地，所述细胞培养在摇床中进行，所述摇床的转速为140～300rpm；优选地，所述细胞培养的培养基包括LB培养基；优选地，所述导入后还包括筛选的步骤；优选地，所述筛选的步骤包括：将导入所述重组表达载体的宿主细胞在含有抗生素的培养基中培养，得到表达纳米抗体的细胞。5.根据权利要求1
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4任一项所述的快速制备纳米抗体的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪伟，陈爽，陈平，祝茜茜，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：