一种鼠李糖脂发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种鼠李糖脂发酵方法。采用的方法步骤为：1）将铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）DGRL

【技术实现步骤摘要】
一种鼠李糖脂发酵方法


[0001]本专利技术涉及一种鼠李糖脂发酵方法。

技术介绍

[0002]鼠李糖脂是一种生物表面活性剂，绿色环保。鼠李糖脂最早被报道于1949年，经过多年研究，现在已经可以进行工业化生产。
[0003]鼠李糖脂的工业化生产多采用铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌等利用动植物油脂、葡萄糖等为碳源进行发酵生产。研究人员发现，鼠李糖脂的产生菌对发酵条件和碳源种类的适应面较窄。目前公认的是这类菌种利用植物油脂的产率远远高于其他碳源的产率。综合考虑产脂效率和产率，在植物油脂系列中，又以最高等级的食用油是最佳选择。这种油脂往往成本较高，且易受气候条件、商业活动等影响而波动较大。另外，植物油脂类碳源发酵出来的发酵液，需要非常复杂的工艺才可以提纯出鼠李糖脂，而且中间过程损失率非常大，综合收率只有50
‑
60％，这也是鼠李糖脂价格居高不下的主要原因。
[0004]鼠李糖脂生产菌种在利用植物油脂时，通常是将其中的油脂水解成丙三醇及脂肪酸再进行利用。但目前没有对丙三醇及脂肪酸在发酵过程中的最佳比例及是否可以人为改变、添加，以及对后续提纯工艺是否有积极影响进行深入研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术为解决现有植物油脂类碳源发酵出来的发酵液，需要非常复杂的工艺才可以提纯出鼠李糖脂，而且中间过程损失率大的问题，提供一种鼠李糖脂发酵方法。
[0006]与现有技术相比，本专利技术采用的技术方案为：一种鼠李糖脂发酵方法，步骤为：
[0007]1)将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DGRL
‑
100活化后接种于种子培养基中培养，得到种子液；
[0008]2)将步骤1)得到的种子液接种至发酵培养基中发酵即可；
[0009]其特征在于：所述的步骤2)中的发酵培养基中还加入了多元丙醇和油酸，多元丙醇及油酸的质量分数比为1：1～20。
[0010]进一步，步骤1)的种子培养基的配方为：多元丙醇10
‑
25g/L，尿素1
‑
5g/L，磷酸二氢钾1
‑
5g/L，磷酸氢二钾1
‑
5g/L，氯化钾1
‑
5g/L，氯化钠1
‑
5g/L，酵母膏1
‑
5g/L，硫酸镁1
‑
5g/L，其余为水。
[0011]进一步，步骤1)的种子培养基的培养条件为：温度35
±
1℃，通气比为0.4
‑
0.8vvm，培养时长12h
‑
36h。
[0012]进一步，步骤2)的发酵培养基的配方为：尿素1
‑
5g/L，磷酸二氢钾1
‑
5g/L，磷酸氢二钾1
‑
5g/L，氯化钾1
‑
5g/L，氯化钠1
‑
5g/L，酵母膏1
‑
5g/L，硫酸镁1
‑
5g/L，其余为水。
[0013]进一步，步骤2)的发酵条件为：发酵温度35
±
1℃；发酵初始pH为6.5
‑
8.0，48h后控制pH在6.5
‑
6.8；发酵罐通气比为0.4
‑
0.8vvm，发酵时长48h
‑
240h。
[0014]进一步，步骤1)和2)中的多元丙醇为1,2
‑
丙二醇、1，3丙二醇和丙三醇中的一种或
多种。
[0015]进一步，步骤2)中油酸为以(Z)
‑9‑
十八(碳)烯酸为主要成分的产品，包括但不限于棕榈油酸、菜籽油酸、大豆油酸、椰子油酸的一种或多种。
[0016]进一步，步骤2)中多元丙醇和油酸的总质量分数为整个发酵液的5％
‑
20％。
[0017]进一步，步骤2)中多元丙醇和油酸的加入方式为一次性加入或分批加入或流加。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：
[0019]1、本专利技术采用多元丙醇与油酸代替传统的油脂作为碳源，通过调节多元丙醇与油酸的比例及添加量，改善鼠李糖脂发酵液中残存的羟基脂肪酸的问题，生产的鼠李糖脂发酵液羟基脂肪酸残存明显减少，大大减少了后续提取工艺的难度，提高了综合收率。
[0020]2、本专利技术所获得的发酵液中残存的羟基脂肪酸明显少于传统方法，大大减少后续提取工艺的难度，提高综合收率。
[0021]3、本方法发酵鼠李糖脂的产量优于仅仅依靠多元丙醇或油酸的鼠李糖脂发酵工艺。
附图说明
[0022]图1为鼠李糖脂提纯品、实施例1发酵液、对比例1发酵液的薄层色谱图；
[0023]图2为实施例2中1号罐发酵液、实施例2中2号罐发酵液、实施例3发酵液的薄层色谱图。
具体实施方式
[0024]下面结合具体的实施方式来对本专利技术的技术方案做进一步的限定：
[0025]本专利技术铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DGRL
‑
100，于2022年06月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：M 2022935。
[0026]实施例一：
[0027]一种鼠李糖脂发酵方法，步骤为：
[0028]1)将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DGRL
‑
100活化后接种于种子培养基中培养，得到种子液；
[0029]种子培养基的配方为：1,2
‑
丙二醇10g/L，尿素5g/L，磷酸二氢钾3.4g/L，磷酸氢二钾4.4g/L，氯化钾1.1g/L，氯化钠1.1g/L，酵母膏2g/L，硫酸镁1g/L，其余为水。
[0030]培养条件为：温度35
±
1℃，pH为6.5
‑
8.0，通气比为0.4vvm，培养时长12h。
[0031]2)将步骤1)得到的种子液接种至加入多元丙醇和油酸的发酵培养基中发酵即可；
[0032]发酵培养基的配方为：1,2
‑
丙二醇25g/L，菜籽油酸25g/L，尿素5g/L，磷酸二氢钾3.4g/L，磷酸氢二钾4.4g/L，氯化钾1.1g/L，氯化钠1.1g/L，酵母膏2g/L，硫酸镁1g/L，其余为水。
[0033]发酵条件为：发酵温度35
±
1℃；发酵初始pH为6.5
‑
8.0，48h后控制在6.5
‑
6.8；发酵罐通气比为0.8vvm，发酵时长60h。
[0034]实施例二：
[0035]一种鼠李糖脂发酵方法，步骤为：
[0036]1)将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DGRL
‑
100活化后接种于含有多元丙醇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠李糖脂发酵方法，步骤为：1)将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DGRL
‑
100活化后接种于种子培养基中培养，得到种子液；2)将步骤1)得到的种子液接种至发酵培养基中发酵即可；其特征在于：所述的步骤2)中的发酵培养基中还加入了多元丙醇和油酸，多元丙醇及油酸的质量分数比为1：1～20。2.根据权利要求1所述的一种鼠李糖脂发酵方法，其特征在于：所述步骤1)的种子培养基的配方为：多元丙醇10
‑
25g/L，尿素1
‑
5g/L，磷酸二氢钾1
‑
5g/L，磷酸氢二钾1
‑
5g/L，氯化钾1
‑
5g/L，氯化钠1
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5g/L，酵母膏1
‑
5g/L，硫酸镁1
‑
5g/L，其余为水。3.根据权利要求1或2所述的一种鼠李糖脂发酵方法，其特征在于：所述步骤1)的种子培养基的培养条件为：温度35
±
1℃，通气比为0.4
‑
0.8vvm，培养时长12h
‑
36h。4.根据权利要求3所述的一种鼠李糖脂发酵方法，其特征在于：所述步骤2)的发酵培养基的配方为：尿素1
‑
5g/L，磷酸二氢钾1
‑
5g/L，磷酸氢...

【专利技术属性】
技术研发人员：嵇含笑，徐广启，魏凯，魏浩然，于洋，
申请(专利权)人：陕西德冠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：