一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法技术

本发明专利技术公开一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，包括：S1、提供动物源皮组织，并将源皮组织表面清理干净，浸泡，清洗，获得真皮组织；S2、将真皮组织依次放入PMSF溶液和EDTA溶液中搅拌，搅拌后取出真皮组织清洗，然后重复上述搅拌、清洗的过程若干次，冻干，获得脱细胞真皮基质；S3、将脱细胞真皮基质研磨，得到脱细胞真皮基质粉末；S4、取脱细胞真皮基质放入乙酸溶液中搅拌至完全溶解，获得脱细胞真皮基质溶液；S5、将脱细胞真皮基质粉末加入脱细胞真皮基质溶液中搅拌均匀，倒入模具，冻干，得到预成型的脱细胞真皮基质复合支架；S6、将预成型的脱细胞真皮基质复合支架浸泡于交联剂中交联，交联后冲洗，冻干，获得脱细胞真皮基质复合支架。支架。支架。

【技术实现步骤摘要】
一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物组织工程支架材料
，具体涉及一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法。

技术介绍

[0002]脱细胞真皮基质为经过脱细胞处理的细胞外基质，其内部含有糖胺聚糖、胶原蛋白、蛋白聚糖、细胞生长因子等生物成分，具有优异的生物相容性，被广泛应用于组织工程领域。通常制备的脱细胞真皮基质为二维结构片状形式，需要经过处理才能形成三维支架结构。中国专利CN114377207A公开了一种猪脱细胞真皮基质支架的制备方法，对脱细胞真皮基质进行醋酸凝胶化、化学交联、冻干等多环节处理，但该方法制备的三维支架为片状结构，支架微观结构致密，孔隙分布不均匀，不利于细胞生长增殖。
[0003]传统的脱细胞真皮基质支架的制备方法是：将脱细胞真皮基质进行蛋白酶溶解或者酸溶解后冻干成型。酶解
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冻干法使用了蛋白酶，会破坏部分真皮基质自身生长因子和有益蛋白，降低了脱细胞真皮基质的生物学性能。酸溶
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冻干法使用酸溶解脱细胞真皮基质，这种方法虽实现了脱细胞真皮基质的三维立体结构，但制备的支架结构致密，孔隙率低，导致细胞在其内部生长困难，同时力学强度较低，无法满足组织填充材料的力学性能要求。因此，亟需开发一种新的脱细胞真皮基质支架的方法，在尽量不破坏脱细胞真皮基质自身生物活性的条件下，增强支架的力学性能，改善支架的孔隙结构，以满足更广泛的组织填充需求。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于：针对现有技术制备的脱细胞真皮基质支架存在力学强度低以及孔隙率低的问题，而研发了一种新的脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，本专利技术的方法在不额外添加外加剂的前提下，制备了力学强度高且结构多孔的脱细胞真皮基质复合支架，解决了现有脱细胞真皮基质支架力学强度低和孔隙率低的问题。
[0005]本专利技术是通过如下技术方案实现的：
[0006]一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：
[0007]S1、真皮组织的制备：提供动物源皮组织，并将所述的源皮组织表面清理干净，然后浸泡，清洗，获得真皮组织；
[0008]S2、真皮基质的脱细胞处理：将所述的真皮组织依次放入PMSF(苯甲磺酰氟)溶液和EDTA(乙二胺四乙酸)溶液中搅拌，搅拌后取出所述真皮组织清洗，然后重复上述搅拌、清洗的过程若干次，冻干，获得脱细胞真皮基质；
[0009]S3、脱细胞真皮基质粉末的制备：将所述的脱细胞真皮基质研磨，得到脱细胞真皮基质粉末；
[0010]S4、脱细胞真皮基质溶液的制备：取所述的脱细胞真皮基质放入乙酸溶液中搅拌
至完全溶解，获得脱细胞真皮基质溶液；
[0011]S5、脱细胞真皮基质复合支架的预成型：将所述的脱细胞真皮基质粉末加入所述脱细胞真皮基质溶液中搅拌均匀，倒入模具，冻干，得到预成型的脱细胞真皮基质复合支架；
[0012]S6、化学交联：将上述预成型的脱细胞真皮基质复合支架浸泡于交联剂中交联，交联后冲洗，冻干，获得脱细胞真皮基质复合支架。
[0013]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：S1、真皮组织的制备：提供动物源皮组织，然后用去离子水对源皮组织进行清洗，去除表面杂质，剔除表面动物毛发，清除表面脂肪，然后用生理盐水浸泡10～24小时，除去表皮，用去离子水冲洗，获得真皮组织。
[0014]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：步骤S1中所述的动物源皮组织选自猪或牛的皮肤组织。优选猪的皮肤组织。
[0015]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：S2、真皮基质的脱细胞处理：将所述的真皮组织依次放入1.0～5.0mg/ml的PMSF溶液和0.5～2.5mg/ml的EDTA溶液中以200～500rpm的速率搅拌5～10分钟，搅拌后取出所述真皮组织用去离子水冲洗，然后重复上述搅拌、清洗的过程2～5次，然后放入冻干机中冷冻干燥，获得脱细胞真皮基质。
[0016]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：步骤S2中所述的PMSF溶液以去离子水为溶剂；所述的EDTA溶液以PBS缓冲液为溶剂。
[0017]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：S3、脱细胞真皮基质粉末的制备：将所述的脱细胞真皮基质置于研磨机中研磨3～5分钟，重复研磨3～6次，得到脱细胞真皮基质粉末。
[0018]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：S4、脱细胞真皮基质溶液的制备：取所述的脱细胞真皮基质放入乙酸溶液中以200～500rpm的速率搅拌至完全溶解，获得浓度为0.1
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1.0g/ml的脱细胞真皮基质溶液。
[0019]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：S5、脱细胞真皮基质复合支架的预成型：将所述的脱细胞真皮基质粉末加入所述脱细胞真皮基质溶液中搅拌均匀，倒入模具，然后置于冻干机中冷冻干燥，得到预成型的脱细胞真皮基质复合支架；其中：所述的脱细胞真皮基质粉末与所述脱细胞真皮基质溶液的质量体积比为0.1
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1.0g/ml。
[0020]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：S6、化学交联：将上述预成型的脱细胞真皮基质复合支架浸泡于浓度0.05
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0.25mg/ml的交联剂中交联1
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3小时，交联后用去离子水冲洗，然后在
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30℃～
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15℃下冷冻干燥10
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24小时，获得脱细胞真皮基质复合支架。
[0021]进一步的，一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法：步骤S6中所述交联剂选自醛类溶液、京尼平溶液或碳化二亚胺溶液中的一种。
[0022]本专利技术的有益效果：
[0023](1)在本专利技术提供的脱细胞真皮基质复合支架的制备方法中选用的脱细胞真皮基质为基底材料，脱细胞真皮基质无免疫原性，具有良好的生物相容性。
[0024](2)在本专利技术的脱细胞真皮基质复合支架的制备方法中采用了PMSF溶液和EDTA溶液对真皮基质进行脱细胞，其脱细胞效果彻底。
[0025](3)本专利技术提供的脱细胞真皮基质复合支架的制备方法采用了酸溶法替代酶解法制备脱细胞真皮基质溶液，降低了对脱细胞真皮基质内部的胶原蛋白、透明质酸、生长因子等细胞外基质成分的破坏，并使用研磨法制备的脱细胞真皮基质粉末，保留了脱细胞真皮基质微观三维结构。
[0026](4)通过本专利技术方法制备的脱细胞真皮基质复合支架其力学强度高于酶解溶液制备的单一支架，且具有弹性，更加便于植入操作。
[0027](5)采用本专利技术方法制备的脱细胞真皮基质复合支架具有多孔三维结构，内部孔隙连通，有利于细胞在支架内部生长。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：S1、真皮组织的制备：提供动物源皮组织，并将所述的源皮组织表面清理干净，然后浸泡，清洗，获得真皮组织；S2、真皮基质的脱细胞处理：将所述的真皮组织依次放入PMSF溶液和EDTA溶液中搅拌，搅拌后取出所述真皮组织清洗，然后重复上述搅拌、清洗的过程若干次，冻干，获得脱细胞真皮基质；S3、脱细胞真皮基质粉末的制备：将所述的脱细胞真皮基质研磨，得到脱细胞真皮基质粉末；S4、脱细胞真皮基质溶液的制备：取所述的脱细胞真皮基质放入乙酸溶液中搅拌至完全溶解，获得脱细胞真皮基质溶液；S5、脱细胞真皮基质复合支架的预成型：将所述的脱细胞真皮基质粉末加入所述脱细胞真皮基质溶液中搅拌均匀，倒入模具，冻干，得到预成型的脱细胞真皮基质复合支架；S6、化学交联：将上述预成型的脱细胞真皮基质复合支架浸泡于交联剂中交联，交联后冲洗，冻干，获得脱细胞真皮基质复合支架。2.根据权利要求1所述的一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，其特征在于，S1、真皮组织的制备：提供动物源皮组织，然后用去离子水对源皮组织进行清洗，去除表面杂质，剔除表面动物毛发，清除表面脂肪，然后用生理盐水浸泡10～24小时，除去表皮，用去离子水冲洗，获得真皮组织。3.根据权利要求1或2所述的一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述的动物源皮组织选自猪或牛的皮肤组织。4.根据权利要求1所述的一种脱细胞真皮基质复合支架的制备方法，其特征在于，S2、真皮基质的脱细胞处理：将所述的真皮组织依次放入1.0～5.0mg/ml的PMSF溶液和0.5～2.5mg/ml的EDTA溶液中以200～500rpm的速率搅拌5～10分钟，搅拌后取出所述真皮组织用去离子水冲洗，然后重复上述搅拌、清洗的过程2～5次，然后放入冻干机中...

【专利技术属性】
技术研发人员：李航，陈维明，
申请(专利权)人：诺一迈尔苏州医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：