AFP检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及光激化学发光技术领域，特别涉及AFP检测试剂盒及其使用方法。基于感光量ps为1.34<PS<16.28的感光试剂，本发明专利技术提供了AFP检测试剂盒，检测试剂盒组分涉及发光试剂、生物素试剂、感光试剂，发光试剂为AFP抗体包被的发光微粒，生物素试剂为生物素标记的AFP抗体，链霉亲和素包被的感光微球。本发明专利技术还公开了测定人血清或者血浆样品中甲胎蛋白AFP的浓度，同时公开了使用方法，该方法的检测原理为双抗体夹心法，检测甲胎蛋白AFP的浓度，该方法的优点灵敏度高，精密性好。精密性好。精密性好。

【技术实现步骤摘要】
AFP检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及光激化学发光
，特别涉及AFP检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]AFP是单链糖蛋白，分子量大约为70,000道尔顿。1956年Bergstrand和Czar首次把AFP称为胎儿蛋白质。其临床检测意义主要在于对原发性肝癌以及新生儿畸形的诊断。AFP对原发性肝癌的诊断是一项很有价值的测定。同时，AFP增高还常见于部分恶性畸胎瘤、胃肝样腺癌、胆道系肿瘤、结肠癌、胃癌、乳腺癌及曾注射过马血清预防针的正常人。在肝癌，睾丸癌或卵巢癌患者的血清中，AFP可显著性升高。定量测定血清AFP水平，对于怀疑或已诊断的肝癌、睾丸或卵巢生殖细胞肿瘤患者的处置，是非常有价值的。同时，AFP和白蛋白共有相当的同源序列和某些生理功能。胎儿在肝脏、卵黄囊和胃肠道内合成AFP。胎儿产生的AFP分泌到胎儿血清内，在妊娠13周时达到峰值，然后在妊娠过程中含量逐渐降低。在出生后短时间内，新生儿的AFP水平达到正常成人水平。通过对妊娠15～20周妇女的血清和腹水样品的AFP检测，联合超声波扫描术和羊膜造影术，可筛查开放性NTDS(神经管缺陷)。无脑儿、脊柱裂、毛细血管扩张症、酪氨酸血症、Rh因子不合等，羊水中的AFP呈现增高；而先天愚型，羊水中的AFP则降低。此外，AFP，人促性腺绒毛膜激素(HCG)与游离雌三醇的三联检测，则被广泛的应用于与唐氏综合症的风险评估，检出率高达90％。
[0003]光激化学发光的基础原理是一种均相免疫反应。它是基于两种微粒表面包被的抗原或抗体，在液相中形成免疫复合物而将两种微粒拉近。在激光的激发下，发生微粒之间的单线态氧的转移，进而产生高能级的红光，通过单光子计数器和数学拟合将光子数换算为分析物的浓度。而当样本不含分析物时，两种微粒间无法形成免疫复合物，两种微粒的间距超出单线态氧传播范围，单线态氧在液相中迅速淬灭，检测时则无高能级红光产生。
[0004]光激化学发光是一种典型的均相免疫分析方法，它是以“双球”为基本特征。所述“双球”是指发光系统由“发光微球”和“感光微球”构成，且两种微球在液相中有很好悬浮特性。微球在液相中和抗原或抗体相遇完全符合液态动力学特征。基于两种被包被在纳米微球表面的抗原或抗体在液相中形成免疫复合物，从而将两种纳米微球拉近。在光的激发下，两种纳米微球之间发生单线态氧的转移，进而产生高能级的红光，通过光子计数器和数学拟合将光子数换算为靶分子浓度。当待测样本中不含靶分子时，两种纳米微球间就无法形成免疫复合物，此时两种纳米微球的间距超出单线态氧传播范围(200nm)，单线态氧在液相中迅速淬灭，检测时则没有高能级红光信号产生。该方法具有快速、均相(免冲洗)、高灵敏和操作简单的特点。
[0005]其中，感光试剂是商品试剂盒中不可或缺的重要组成成分之一，它的作用在于其试剂中的感光微球受外在激发光的激发后能够产生单线态氧，单线态氧把能量传递至距离感光微球200nm范围内的发光微球，最终才能产生化学发光信号，从而实现对未知物的检测。感光微球中填充的感光染料浓度的选择、感光微球在液相中产生单线态氧的效率及时间、感光试剂的生产成本等，均影响光激化学发光检测试剂盒产品最终的临床应用及化学
发光检测结果。目前，现有技术中缺乏高性能、符合临床检验需求的感光试剂。
[0006]因此，提供AFP检测试剂盒及其使用方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供的试剂盒包括AFP试剂1(AFP抗体包被的发光微粒)、AFP试剂2(生物素标记的AFP)和感光试剂，在均相条件下，采用双抗体夹心免疫光激化学发光法定量检测人血清或血浆样本中甲胎蛋白AFP的浓度。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供了感光微球在制备检测AFP的微球组合物、试剂组合、试剂盒、检测系统和/或检测装置中的应用，
[0010]检测由发光微球
‑
AFP免疫复合物
‑
感光微球形成的发光复合物所产生的化学发光信号；
[0011]所述发光微球包括载体和通过所述载体承载的发光物质，其能够与单线态氧反应产生化学发光；
[0012]所述感光微球包括载体和通过所述载体承载的感光物质，其能够在光激发下产生单线态氧；所述感光微球的感光量Ps在1.34到16.28之间；所述感光量Ps＝OD
λ1
/C2*103，其中：
[0013]所述OD
λ1
是在300nm～800nm范围的可见光区对浓度为C2的所述感光微球进行全波长扫描后所得的波长
‑
吸光度曲线的最大吸收峰所对应的吸光度值，所述λ1是所述最大吸收峰对应的波长；所述C2是感光微球在进行光激化学发光检测时的浓度，C2的单位为ug/ml。在本专利技术的一些具体实施方案中，
[0014]所述感光微球的浓度
[0015]其中，k是载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的斜率，b是所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的截距；OD
λ2
是感光微球在波长λ2下对应的吸光度值；所述载体浓度
‑
吸光度曲线为采用不同浓度的多个载体在波长λ2下获得的曲线；所述波长λ2为具有相同浓度的所述感光微球与所述载体在所述波长
‑
吸光度曲线中具有相同或相近的吸光度值对应的波长。
[0016]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述C2选自10ug/ml～200ug/ml。
[0017]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系为y＝kx+b，其中：
[0018]x为预设粒径的载体的不同浓度，y为载体在对应的所述浓度下的吸光度值，k为斜率，b为截距。
[0019]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述波长λ2选自OD
感光微球
/OD
载体
的比值在0.85至1.15以内的任一波长值，且波长λ2不等于波长λ1；
[0020]其中，OD
感光微球
和OD
载体
分别是利用相同浓度的所述感光微球和所述载体各自在300nm～800nm范围内同一波长值所对应的吸光度值。
[0021]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述波长λ2为400nm～600nm。
[0022]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述感光微球为填充有感光物质的载体，其中，
所述波长λ1是所述感光物质在300nm～800nm范围的可见光区对所述感光物质进行全波长扫描后所得的波长
‑
吸光度曲线中的最大吸收峰所对应的波长。
[0023]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述波长λ1为600nm～700nm。
[0024]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述感光微球按照所述载体与所述感光物质的质量比为10:(0.04～4)制得。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.感光微球在制备检测AFP的微球组合物、试剂组合、试剂盒、检测系统和/或检测装置中的应用，其特征在于，检测由发光微球
‑
AFP免疫复合物
‑
感光微球形成的发光复合物所产生的化学发光信号；所述发光微球包括载体和通过所述载体承载的发光物质，其能够与单线态氧反应产生化学发光；所述感光微球包括载体和通过所述载体承载的感光物质，其能够在光激发下产生单线态氧；所述感光微球的感光量Ps在1.34到16.28之间；所述感光量Ps＝OD
λ1
/C2*103，其中：所述OD
λ1
是在300nm～800nm范围的可见光区对浓度为C2的所述感光微球进行全波长扫描后所得的波长
‑
吸光度曲线的最大吸收峰所对应的吸光度值，所述λ1是所述最大吸收峰对应的波长；所述C2是感光微球在进行光激化学发光检测时的浓度，C2的单位为ug/ml。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述感光微球的浓度其中，k是载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的斜率，b是所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的截距；OD
λ2
是感光微球在波长λ2下对应的吸光度值；所述载体浓度
‑
吸光度曲线为采用不同浓度的多个载体在波长λ2下获得的曲线；所述波长λ2为具有相同浓度的所述感光微球与所述载体在所述波长
‑
吸光度曲线中具有相同或相近的吸光度值对应的波长。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述C2选自10ug/ml～200ug/ml。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系为y＝kx+b，其中：x为预设粒径的载体的不同浓度，y为载体在对应的所述浓度下的吸光度值，k为斜率，b为截距。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述波长λ2选自OD
感光微球
/OD
载体
的比值在0.85至1.15以内的任一波长值，且波长λ2不等于波长λ1；其中，OD
感光微球
和OD
载体
分别是利用相同浓度的所述感光微球和所述载体各自在300nm～800nm范围内同一波长值所对应的吸光度值。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述波长λ2为400nm～600nm。7.如权利要求1所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张黎明，李建武，康蔡俊，洪琳，黄正铭，李临，
申请(专利权)人：科美博阳诊断技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：