HIV检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及光激化学发光技术领域，特别涉及HIV检测试剂盒及其使用方法。基于感光量ps为1.34<PS<16.28的感光试剂，本发明专利技术提供了一种HIV检测试剂盒，检测试剂盒组分涉及发光试剂、生物素试剂、样本稀释液、感光试剂，发光试剂为发光微球包被的HIV I+II抗原1，生物素试剂为生物素标记I型的抗原2和II型抗原3，感光试剂位感光微球包被的链霉亲和素。本发明专利技术还公开了测定样品中HIV(I+II型)抗体的体外诊断试剂盒，同时公开了使用方法，该方法的检测原理为双抗原夹心法，检测HIV抗体，该方法的优点灵敏度高，精密性好。精密性好。精密性好。

【技术实现步骤摘要】
HIV检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及光激化学发光
，特别涉及HIV检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)是一种由HIV病毒即人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus简称HIV)侵入人体后破坏人体免疫功能，使人体发生多种不可治愈的感染和肿瘤，最后导致被感染者死亡的一种严重传染病。目前发现人类免疫缺陷病毒为HIV
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1型和HIV
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2型。HIV
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1型主要可分成为：M组(主要)、O组(异常)和N组(非M非O组)；HIV
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2型[3]具有8种不同亚型(A
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H)，其中流行性亚型是A和B型。HIV的传播途径主要包括血液和受污染的血制品、性接触和孕前、孕期和孕后的母婴传播等。HIV感染后引起人体CD4+T淋巴细胞减少，形成免疫功能缺陷，疾病后期可继发各种机会性感染、恶性肿瘤和中枢神经系统病变的综合性疾患，同时，人体的免疫系统会对HIV病毒的多种蛋白产生相应的抗体，其中跨膜蛋白(TMP)的免疫原性较强，是最先出现的抗体。
[0003]光激化学发光的基础原理是一种均相免疫反应。它是基于微粒表面包被的抗原或抗体，在液相中形成免疫复合物而将两种微粒拉近。在激光的激发下，发生微粒之间的离子氧的转移，进而产生高能级的红光，通过单光子计数器和数学拟合将光子数换算为靶分子浓度。而当样本不含靶分子时，两种微粒间无法形成免疫复合物，两种微粒的间距超出离子氧传播范围,离子氧在液相中迅速淬灭，检测时则无高能级红光产生。
[0004]其中，感光试剂是商品试剂盒中不可或缺的重要组成成分之一，它的作用在于其试剂中的感光微球受外在激发光的激发后能够产生单线态氧，单线态氧把能量传递至距离感光微球200nm范围内的发光微球，最终才能产生化学发光信号，从而实现对未知物的检测。感光微球中填充的感光染料浓度的选择、感光微球在液相中产生单线态氧的效率及时间、感光试剂的生产成本等，均影响光激化学发光检测试剂盒产品最终的临床应用及化学发光检测结果。目前，现有技术中缺乏高性能、符合临床检验需求的感光试剂。
[0005]因此，提供HIV检测试剂盒及其使用方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供的试剂盒包括发光微粒包被HIV抗原、生物素标记HIV抗原、Anti
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HIV样品稀释液和感光试剂，在均相条件下，采用双抗原夹心免疫光激化学发光法定性检测人血清中的人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供了感光微球在制备检测HIV的微球组合物、试剂组合、试剂盒、检测系统和/或检测装置中的应用，
[0009]检测由发光微球
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HIV免疫复合物
‑
感光微球形成的发光复合物所产生的化学发光信号；
[0010]所述发光微球包括载体和通过所述载体承载的发光物质，其能够与单线态氧反应产生化学发光；
[0011]所述感光微球包括载体和通过所述载体承载的感光物质，其能够在光激发下产生单线态氧；所述感光微球的感光量Ps在1.34到16.28之间；所述感光量Ps＝OD
λ1
/C2*103，其中：
[0012]所述OD
λ1
是在300nm～800nm范围的可见光区对浓度为C2的所述感光微球进行全波长扫描后所得的波长
‑
吸光度曲线的最大吸收峰所对应的吸光度值，所述λ1是所述最大吸收峰对应的波长；所述C2是感光微球在进行光激化学发光检测时的浓度，C2的单位为ug/ml。
[0013]在本专利技术的一些具体实施方案中，
[0014]所述感光微球的浓度
[0015]其中，k是载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的斜率，b是所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的截距；OD
λ2
是感光微球在波长λ2下对应的吸光度值；所述载体浓度
‑
吸光度曲线为采用不同浓度的多个载体在波长λ2下获得的曲线；所述波长λ2为具有相同浓度的所述感光微球与所述载体在所述波长
‑
吸光度曲线中具有相同或相近的吸光度值对应的波长。
[0016]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述C2选自10ug/ml～200ug/ml。
[0017]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系为y＝kx+b，其中：
[0018]x为预设粒径的载体的不同浓度，y为载体在对应的所述浓度下的吸光度值，k为斜率，b为截距。
[0019]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述波长λ2选自OD
感光微球
/OD
载体
的比值在0.85至1.15以内的任一波长值，且波长λ2不等于波长λ1；
[0020]其中，OD
感光微球
和OD
载体
分别是利用相同浓度的所述感光微球和所述载体各自在300nm～800nm范围内同一波长值所对应的吸光度值。
[0021]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述波长λ2为400nm～600nm。
[0022]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述感光微球为填充有感光物质的载体，其中，所述波长λ1是所述感光物质在300nm～800nm范围的可见光区对所述感光物质进行全波长扫描后所得的波长
‑
吸光度曲线中的最大吸收峰所对应的波长。
[0023]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述波长λ1为600nm～700nm。
[0024]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述感光微球按照所述载体与所述感光物质的质量比为10:(0.04～4)制得。
[0025]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述载体的粒径为190nm～280nm。
[0026]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述感光微球表面没有包被多糖，且所述感光微球表面连接有亲和素，所示亲和素选自卵白亲和素、卵黄亲和素、链霉亲和素、中性亲和素及类亲和素分子，优选为链霉亲和素。
[0027]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述感光微球的感光量Ps在4.07到16.28之间。
[0028]第二方面，本专利技术还提供了检测HIV的微球组合物，包括发光微球和所述感光微球。
[0029]第三方面，本专利技术还提供了检测HIV的试剂组合，包括发光试剂和感光试剂；
[0030]所述感光试剂包括缓冲溶液和保存于所述缓冲溶液中的所述感光微球；
[0031]所述发光试剂包括发光微球和能够与HIV反应的物质。
[0032]在本专利技术的一些具体实施方案中，每升体积的所述缓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.感光微球在制备检测HIV的微球组合物、试剂组合、试剂盒、检测系统和/或检测装置中的应用，其特征在于，检测由发光微球
‑
HIV免疫复合物
‑
感光微球形成的发光复合物所产生的化学发光信号；所述发光微球包括载体和通过所述载体承载的发光物质，其能够与单线态氧反应产生化学发光；所述感光微球包括载体和通过所述载体承载的感光物质，其能够在光激发下产生单线态氧；所述感光微球的感光量Ps在1.34到16.28之间；所述感光量Ps＝OD
λ1
/C2*103，其中：所述OD
λ1
是在300nm～800nm范围的可见光区对浓度为C2的所述感光微球进行全波长扫描后所得的波长
‑
吸光度曲线的最大吸收峰所对应的吸光度值，所述λ1是所述最大吸收峰对应的波长；所述C2是感光微球在进行光激化学发光检测时的浓度，C2的单位为ug/ml。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述感光微球的浓度其中，k是载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系中对应的斜率，b是所述载体浓度
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吸光度曲线的线性关系中对应的截距；OD
λ2
是感光微球在波长λ2下对应的吸光度值；所述载体浓度
‑
吸光度曲线为采用不同浓度的多个载体在波长λ2下获得的曲线；所述波长λ2为具有相同浓度的所述感光微球与所述载体在所述波长
‑
吸光度曲线中具有相同或相近的吸光度值对应的波长。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述C2选自10ug/ml～200ug/ml。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述载体浓度
‑
吸光度曲线的线性关系为y＝kx+b，其中：x为预设粒径的载体的不同浓度，y为载体在对应的所述浓度下的吸光度值，k为斜率，b为截距。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述波长λ2选自OD
感光微球
/OD
载体
的比值在0.85至1.15以内的任一波长值，且波长λ2不等于波长λ1；其中，OD
感光微球
和OD
载体
分别是利用相同浓度的所述感光微球和所述载体各自在300nm～800nm范围内同一波长值所对应的吸光度值。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述波长λ2为400nm～600nm。7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述感光微球为填充有感光物质的载体，其中，所述波长λ1是所述感光物质在300nm...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建武，康蔡俊，洪琳，黄正铭，李临，
申请(专利权)人：科美博阳诊断技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：