同时测定人血中11种苯甲酸酯类物质和含氯抗菌剂含量的试剂盒、方法及组合物用途技术

本发明专利技术提供了同时同时测定人血中11种苯甲酸酯类物质和含氯抗菌剂含量的试剂盒、方法及组合物用途；采用乙腈和硫酸锌(含抗氧化剂VC)溶液进行蛋白沉淀，再使用含甲酸的乙酸乙酯进行液液萃取的方式进行前处理，收集洗脱液，吹干复溶后即可进行液相色谱串联质谱检测，并通过trap柱降低定量下限。本发明专利技术提供的方法实现了两种难检测的水溶性苯甲酸的检测，对检测指标化合物提取效率高，回收率高，检测的定量下限低，操作便利，效果更好，成本更低。成本更低。成本更低。

【技术实现步骤摘要】
同时测定人血中11种苯甲酸酯类物质和含氯抗菌剂含量的试剂盒、方法及组合物用途


[0001]本专利技术属于化学分析
，涉及同时测定人血中11种苯甲酸酯类物质和含氯抗菌剂含量的试剂盒、方法及组合物用途。

技术介绍

[0002]对羟基苯甲酸酯类化合物属于防腐剂，三氯生和三氯卡班属于抗菌剂，多用于各种食品、药品以及化妆品中，因而在日常环境中普遍存在，极易通过皮肤接触和日常饮食进入人体，对羟基苯甲酸酯类化合物在体内的主要代谢物为对羟基苯甲酸，而对羟基苯甲酸会进一步经过氧化代谢再次引入一个羟基成为双羟基苯甲酸，该类化合物属于内分泌干扰物质，具有雌激素活性，对生殖功能具有一定的影响，因而近年来研究尿液和血液中该类化合物的浓度与各类激素异常之间的相关性成为热点。
[0003]目前该类物质常用固相萃取或多次液液萃取的方法进行检测，如文献Qiong Luo , Hongna Zhang, Zongwei Cai, et al. Simultaneous determination of triclosan, triclocarban, triclocarban metabolites and byproducts in urine and serum by ultra
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high
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performance liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry [J]. Rapid Commun Mass Spectrom, 2021,35(14):136390中，取样量为500 μL，采用Waters Oasis HLB板进行SPE固相萃取，该方法取样量大，需要使用SPE板，成本高且前处理比较复杂。又如专利CN113671093A，该专利中的样本类型为尿液，尿液中羟基苯甲酸酯类化合物会与葡萄糖醛酸结合，通过酶解后使用液液萃取的方法，共需进行三次萃取，尿液中羟基苯甲酸酯类化合物的含量与血清中相比较高，因而尿液样本的检测难度较血清样本的检测难度低，但是专利中提供的对羟基苯甲酸（4
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HB）的回收率仅60%左右。
[0004]此外，该类化合物作为防腐剂和抗菌剂日常运用广泛，因而在检测过程中塑料管、溶剂和仪器管路中常有本底，根据文献中报道的三氯生（TCS）的定量下限为0.9 ng/mL，对痕量检测造成了很大干扰。
[0005]因此，目前亟需一种对苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂进行检测的新技术，能提高该类化合物从样本中提取的效率，检测指标的回收率，以及降低定量下限以增加灵敏度。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术的目的在于提供同时测定人血中11种苯甲酸酯类物质和含氯抗菌剂含量的试剂盒、方法及组合物用途；通过液相色谱串联质谱同时测定人血中11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂。
[0007]所述的11种苯甲酸酯类物质和含氯抗菌剂是指11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂；所述11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂为：对羟基苯甲酸丁酯（BuP），对羟基苯甲酸甲酯（MeP），对羟基苯甲酸乙酯（EtP），3,4
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二羟基苯甲酸乙酯（OH
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EtP），3,4
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二羟基苯甲
酸（3,4
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DHB），对羟基苯甲酸苯甲酯（BzP），对羟基苯甲酸庚酯（HeP），对羟基苯甲酸（4
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HB）和3,4
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二羟基苯甲酸甲酯（OH
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MeP），三氯卡班（TCC），三氯生（TCS）。
[0008]首先， 本专利技术创造主要使用了ZnSO4溶液和乙腈共沉淀血清中的蛋白，液液萃取使用的试剂是乙酸乙酯（含1%甲酸（FA）），提高了3，4
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二羟基苯甲酸（3，4
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DHB）和对羟基苯甲酸（4
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HB）的提取回收率。这11种检测指标中两种苯甲酸的水溶性较好，剩余的9种化合物脂溶性较好，性质差异较大，因而在多数文献中提取这几种化合物的方法多采用SPE，液液萃取无法保证水溶性好的两种苯甲酸的提取回收率。
[0009]而本专利技术通过前处理的改进保证了每种化合物的提取回收率，尤其是保证了两种水溶性好的苯甲酸的提取回收率。先进行蛋白沉淀再液液萃取，在萃取溶剂乙酸乙酯中加入1%的甲酸，使两种水溶性苯甲酸在溶液中呈现分子状态，提高萃取效率，而加入的甲酸会使乙腈沉淀蛋白不完全，导致提取效率降低，所以在蛋白沉淀一步我们使用ZnSO4溶液和乙腈进行共沉淀，可使蛋白沉淀后提高提取效率，从而提高回收率。与文献中的SPE前处理相比，本前处理方法提取效率更高，效果更好，成本更低。
[0010]其次，本专利技术在流动相混合器和六通阀之间连接了Trap柱，避免了流动相和仪器前端管路中本底峰对三氯生（TCS）的干扰，使本底干扰出峰时间后延，与样品中该化合物出峰错开，显著降低本底峰面积35倍，进而可以降低三氯生（TCS）的定量下限。
[0011]一方面，本专利技术提供了一种液相色谱串联质谱同时测定人血中11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂含量的试剂盒，所述试剂盒含有内标工作液、硫酸锌溶液和萃取剂；所述内标工作液包括乙腈，所述萃取剂包括乙酸乙酯。
[0012]所述11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂为：对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，3,4
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二羟基苯甲酸乙酯，3,4
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二羟基苯甲酸，对羟基苯甲酸苯甲酯，对羟基苯甲酸庚酯，对羟基苯甲酸，3,4
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二羟基苯甲酸甲酯，三氯卡班，三氯生。
[0013]进一步地，所述硫酸锌溶液浓度为30~89mg/ml，所述内标工作液和硫酸锌溶液的体积比为9:1
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1:1。
[0014]进一步的，所述萃取剂中还含有甲酸。
[0015]在一些方式中，萃取剂为含有1%甲酸的乙酸乙酯。
[0016]从原理上看，在萃取溶剂乙酸乙酯中加入1%的甲酸，可以使两种苯甲酸在溶液中呈现分子状态，提高萃取效率，而加入的甲酸会使乙腈沉淀蛋白不完全，导致提取效率降低，所以在蛋白沉淀一步我们使用ZnSO4溶液和乙腈进行共沉淀，可使蛋白沉淀后提高提取效率，从而提高回收率。
[0017]进一步的，所述萃取剂用于液液萃取。
[0018]进一步的，所述内标工作液和硫酸锌溶液的体积比为9:1
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1:1。
[0019]进一步的，所述硫酸锌溶液浓度为89mg/ml，其中还含有维生素C。
[0020]在一些方式中，硫酸锌与维生素C的质量比为89:1，维生素C的浓度为1mg/ml。
[0021]从原理上看，本专利技术中3，4
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二羟基苯甲酸（3,4
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DHB）和对羟基苯甲酸（4
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HB）两种检测指标在提取过程中易氧化，加入抗氧化剂维生素本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱串联质谱同时测定人血中11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有内标工作液、硫酸锌溶液和萃取剂；所述内标工作液包括乙腈，所述萃取剂包括乙酸乙酯和甲酸；所述11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂为：对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，3,4
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二羟基苯甲酸乙酯，3,4
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二羟基苯甲酸，对羟基苯甲酸苯甲酯，对羟基苯甲酸庚酯，对羟基苯甲酸，3,4
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二羟基苯甲酸甲酯，三氯卡班，三氯生。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述硫酸锌溶液浓度为30~89mg/ml，所述内标工作液和硫酸锌溶液的体积比为9:1
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1:1。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述硫酸锌溶液中还含有维生素C。4.一种液相色谱串联质谱同时测定人血中11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂含量的方法，其特征在于，采用如权利要求1~3任一项所述的试剂盒进行样品前处理；所述11种苯甲酸酯及其代谢物、含氯抗菌剂为：对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，3,4
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗稳，孔子青，顾祁昕，刘楚，刘华芬，
申请(专利权)人：湖南凯莱谱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：