新西兰亚麻的组织培养方法,涉及组织培养技术。本发明专利技术的方法包括外植体的选择清洁、消毒、丛生芽诱导培养、丛生芽继代增殖培养,以及丛生芽生根培养过程。其中,消毒方法是用75%酒精震摇消毒20
【技术实现步骤摘要】
新西兰亚麻的组织培养方法
[0001]本专利技术涉及组织培养技术,特别涉及新西兰亚麻的组织培养技术。
技术介绍
[0002]新西兰亚麻(Phormium tenax)又名新西兰麻,为百合科新西兰麻属多年生草本植物,具有粉红彩边、红条彩斑、粉红彩斑、黄色彩斑等数十个品种,常做庭院、绿化带、盆栽等绿化观叶植物。同时,它与剑麻类似,可提取纤维材料,广泛用于衣物、工具、武器或建筑等。
[0003]目前新西兰亚麻大多采用分株和扦插繁殖,但分株和扦插繁殖均存在繁殖系数低,繁殖周期长,周年复始极易导致病虫害积累等缺点。
[0004]近年来,在国内已逐步开始新西兰亚麻的组织培养研究,目前报道的有朱清等发表的《新西兰麻离体快繁技术研究》[J],上海农业学报,2009,25(1):101
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104);唐颖发表的《新西兰山亚麻的组织培养与快速繁殖》,绿色科技,2011,5:154
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155);毕玮等发表的《新西兰麻组培技术初探》[J],福建林业科技,2016,43(3):178
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182。但这些公开的技术存在初代诱导率及继代增殖系数低,生根苗瘦弱,不能稳定新西兰麻的园艺性状等缺点。
技术实现思路
[0005]本专利技术提出一种新的新西兰亚麻组织培养方法,增殖诱导率高,增殖系数达到预期,生根苗健壮,园艺性状稳定。
[0006]新西兰亚麻的组织培养方法,其特征在于该方法包括以下步骤:步骤1,外植体的选择与清洁:选择基部芽为外植体,并将其清洗干净;步骤2,外植体的消毒;步骤3,丛生芽诱导培养;步骤4,丛生芽继代增殖培养;步骤5,丛生芽生根培养;所述步骤2的消毒方法是用75%酒精震摇消毒20
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30s,无菌水涮洗2
‑
3次,然后用0.1%升汞溶液震摇消毒2
‑
3min,无菌水涮洗4
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5次,再用1%双氧水溶液浸泡消毒20
‑
24h,然后无菌水涮洗2
‑
3次,最后用0.05%升汞溶液震摇消毒5
‑
6min,无菌水再涮洗6
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7次;所述步骤3采用的培养基为:N6+2,4
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D 0.01
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0.02mg/L+NAA 0.05
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0.1mg/L+ZT 1.0
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1.5mg/L+CPPU 0.2
‑
0.3mg/L;所述步骤4采用的培养基为:MS+NAA 0.2mg/L+ZT 0.2mg/L+TDZ 2.0mg/L+椰汁80ml/L+香蕉泥30mg/L;所述步骤5采用的培养基为:改良1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L+椰汁50ml/L;所述1/2MS指其余成分不变,糖添加量改为20g/L的MS。
[0007]所述丛生芽诱导培养是在25
±
2℃温度中,暗培养7
‑
10天;至芽开始萌动后,保持培养温度不变,在光强度2000
‑
3000lx的环境中培养40
‑
45天,其中光照时间为每天连续12h。
[0008]所述的丛生芽继代增殖培养是在25
±
2℃温度中,在光强度2000
‑
3000lx的环境中培养40
‑
45天,其中光照时间为每天连续12h。
[0009]所述的丛生芽生根培养是在25
±
2℃温度中,在光强度2000
‑
3000lx的环境中培养30
‑
35天,其中光照时间为每天连续12h。
[0010]本专利技术的有益效果在于:1、由于新西兰亚麻采用的外植体为地下具芽根茎,微生物带菌量极大,极易造成污染,而高浓度长时的消毒,虽然污染率会很大程度下降,但会导致芽大量死亡,而未发生死亡的就会产生褐化。本专利技术在消毒上采用75%酒精和0.1%升汞溶液结合短时消毒,再用1%双氧水和0.05%升汞溶液进行长时消毒,可将消毒污染率控制在10%以内,而消毒死亡率控制在5%以内,同时结合N6培养基和7
‑
10天的暗培养,几乎无褐化发生。
[0011]2、本专利技术的丛生芽诱导采用2,4
‑
D、NAA、ZT和CPPU的适宜搭配,可使丛生芽诱导率高达86%,同时在增殖培养时,采用NAA、ZT和TDZ的组合,可使增殖系数提高到5以上。
[0012]3、本专利技术在继代增殖培养基中添加适宜浓度椰汁和香蕉泥,同时在生根培养基中添加适宜浓度的椰汁,能有效避免在继代增殖过程中,高细胞分裂素情况下的玻化率,还能使苗更加健壮,在进行驯化时成活率可大幅提高。
[0013]4、本专利技术在生根培养时,降低了糖的浓度,有效促进生根基部膨大,形成类似块状根茎,使得苗更加健壮,亦更加有利于驯化成活。
[0014]5、新西兰麻园艺性状极不稳定,现有繁育技术多通过分株繁殖获得种苗,通过组培繁育时,受植物生长调节剂影响,出现变异或返祖的概率较大。通过本专利技术植物生长调节剂合适种类及剂量的搭配,可最大程度的降低变异或返祖率。
附图说明
[0015]图1为本专利技术实施例1获得的生根苗图。
[0016]图2为实施对比例2时出现的返祖现象图。
具体实施方式
[0017]实施例1:新西兰亚麻的组织培养方法,包括以下步骤:步骤1,外植体的选择与清洁:选择基部芽为外植体,去净泥土,用自来水冲淋至无明显黄泥水,然后用肥皂水涮洗20min,自来水漂洗至无肥皂水残留,再用3滴吐温80震摇洗涤10min,随后用自来水冲淋120min。
[0018]步骤2,外植体的消毒:将洗净的外植体,转移至超净工作台,用75%酒精震摇消毒20s,无菌水涮洗2次,然后用0.1%升汞溶液震摇消毒2min,无菌水涮洗5次,再用1%双氧水溶液浸泡消毒20h,然后无菌水涮洗3次,最后用0.05%升汞溶液震摇消毒5min,无菌水再涮洗6次。
[0019]步骤3,丛生芽诱导培养:将消毒好的外植体,用无菌纸吸去表面水分,并剪去伤口处,接种于以N6+2,4
‑
D0.01mg/L+NAA0.05mg/L+ZT1.0mg/L+CPPU 0.2mg/L的丛生芽诱导培养基中,置于25
±
2℃温度中,暗培养7d;至芽开始萌动后,保持培养温度不变,在光强度2000
‑
3000lx的环境中培养40天,其中光照时间为每天连续12h。
[0020]步骤4,丛生芽继代增殖培养:将诱导出的丛生芽,剪去上部叶片,并切成单芽,接
种于MS+NAA 0.2mg/L+ZT 0.2mg/L+TDZ 2.0mg/L+椰汁80ml/L+香蕉泥30mg/L的继代增殖培养基中,置于25
±
2℃温度中,在光强度2000
‑
3000lx的环境中培养40天,其中光照时间为每天连续12h。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.新西兰亚麻的组织培养方法,其特征在于该方法包括以下步骤:步骤1,外植体的选择与清洁:选择基部芽为外植体,并将其清洗干净;步骤2,外植体的消毒;步骤3,丛生芽诱导培养;步骤4,丛生芽继代增殖培养;步骤5,丛生芽生根培养;所述步骤2的消毒方法是用75%酒精震摇消毒20
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30s,无菌水涮洗2
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3次,然后用0.1%升汞溶液震摇消毒2
‑
3min,无菌水涮洗4
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5次,再用1%双氧水溶液浸泡消毒20
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24h,然后无菌水涮洗2
‑
3次,最后用0.05%升汞溶液震摇消毒5
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6min,无菌水再涮洗6
‑
7次;所述步骤3采用的培养基为:N6+2,4
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D 0.01
‑
0.02mg/L+NAA 0.05
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0.1mg/L+ZT 1.0
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1.5mg/L+CPPU 0.2
‑
0.3mg/L;所述步骤4采用的培养基为:MS+NAA 0.2mg/L+ZT 0.2mg/L+TDZ 2.0...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵露琴,曾祥飞,李琼芬,罗乙恒,陈庆飞,刘鹏举,柏乐,李乡蕊,周德全,
申请(专利权)人:云南蓝煌农林科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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