一种濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法技术

本发明专利技术涉及一种濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法，通过将选好的植株芽体先后采用乙醇和HgCl2溶液进行消毒，再采用无菌水冲洗，得到无菌外植体在无菌条件下依次进行接种、培养诱导丛芽、生根培养、炼苗移栽和定植，直至收获得到矮紫堇药材。本发明专利技术所述组织培养方法通过选用特定的培养基对矮紫堇进行组织培养填补矮紫堇组织培养技术空白，不受季节限制，可周年生产种苗，实现人工繁育。所述组织培养方法利用优质健壮矮紫堇的顶芽组织灭菌获得的无菌组织通过分裂分化而获得完形植株，成本低，繁殖快，能适应高原地区温差大、气温低、紫外线强的独特环境，并且育苗速度快，遗传性好，可周年生产种苗。生产种苗。

【技术实现步骤摘要】
一种濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法
[0001]本申请是申请日为2018年04月19日、申请号为201810353719.1、专利技术名称为《一种濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法》的分案申请。


[0002]本专利技术属于植物培养
，具体涉及一种濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法。

技术介绍

[0003]矮紫堇是罂粟科植物矮紫堇(为干燥全草，表面棕红色，棕黄色或暗褐红色，茎短，蒴果长圆形)和扁柄黄堇(皱缩呈团状，外表黄棕色至红棕色，叶片破碎萎缩，花黄色细弱，苞片倒长卵形)的干燥全草，具有清热消炎的功效。可以用于治疗高山多血症、溃疡疼痛、脉管炎、肠炎。
[0004]矮紫堇主要分布于我国西藏海拔4200～5200m的区域。目前除西藏境内近百个藏医医疗机构医院制剂产品外，具有国药准字号的藏药产品中就有智托洁白丸、十三味青兰散、二十五味鬼臼、十味龙胆花颗粒等40余品种要用到矮紫堇。同时仅在西藏自治区境内，就有近10家藏药企业生产上述藏药产品，年产量可达千吨，矮紫堇的年需求量可达10吨左右。但是，由于以全草入药，长期掠夺式采挖野生药材，已经导致原生环境遭到破坏，矮紫堇野生资源已经列入一级濒危，处于供不应求的状态。
[0005]现有方法中矮紫堇的人工繁育技术仍然是空白。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术提供了一种育苗速度快、遗传性好、繁殖周期短的濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法。本专利技术所述组织培养方法填补矮紫堇组织培养技术空白，不受季节限制，可周年生产种苗，实现人工繁育。本专利技术组织培养技术利用优质健壮矮紫堇的顶芽组织灭菌获得的无菌组织通过分裂分化而获得完形植株，成本低，繁殖快，能适应高原地区温差大、气温低、紫外线强的独特环境，并且育苗速度快，遗传性好，可周年生产种苗。
[0007]本专利技术所采用的技术方案为：
[0008]一种用于濒危藏药材矮紫堇组织培养的培养基，包括外植体培养基、丛芽培养基和生根培养基；
[0009]所述外植体培养基为MS培养基；
[0010]所述丛芽培养基以MS培养基为基础培养基，还包括6
‑
BA1mg/L和NAA0.01mg/L；
[0011]所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，还包括6
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BA0.2mg/L和NAA0.5～0.7mg/L；
[0012]或者所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，还包括6
‑
BA0.2mg/L和IAA0.5～0.7mg/L。
[0013]上述技术方案所述培养基在濒危藏药材矮紫堇快速繁殖中的应用。
[0014]一种快速繁殖濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法，步骤包括：
[0015](1)选健壮植株芽体，先用乙醇进行快速涮洗，再用HgCl2溶液进行消毒；
[0016](2)将步骤(1)处理后的芽体采用无菌水进行冲洗，再将芽体表面水吸干，得到无菌外植体，待用；
[0017](3)在无菌条件下，将步骤(2)所述无菌外植体接种到培养基上，先进行暗培养，再转接到丛芽培养基上，光照条件下培养诱导丛芽，形成丛芽；
[0018](4)将所述丛芽转入生根培养基中，在光照条件下，得到生根试管苗；
[0019](5)将所述生根试管苗经炼苗移栽到基质中，培养成植株后，定植于野外，直至收获。
[0020]步骤(1)中，所述乙醇为体积浓度为60～80％。
[0021]步骤(1)中，所述HgCl2溶液的浓度为0.05～0.2％，采用所述HgCl2溶液进行消毒的时间为1～3min。
[0022]所述HgCl2溶液的浓度为0.1％。
[0023]通过先采用浓度为60～80％的乙醇进行快速涮洗，再用0.05～0.2％的升汞(HgCl2)消毒1～3min，更好地解决了外植体外灭菌难以控制的问题，降低污染率、褐变率，且不影响外植体的自然生长。
[0024]步骤(2)中，采用无菌水对所述芽体进行冲洗3～5遍。
[0025]步骤(3)中，所述培养基为Ms培养基，所述丛芽培养基为Ms+6
‑
BA1mg/L+NAA0.01mg/L培养基。
[0026]步骤(3)中，进行所述暗培养的温度为15～20℃，进行所述暗培养的时间为7～10天；
[0027]进行所述培养诱导丛芽时，所述培养诱导丛芽的温度为15～25℃，每天所述光照的时间为18
‑
24h。
[0028]步骤(4)中，所述生根培养基为1/2Ms+6
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BA0.2mg/L+NAA0.5～0.7mg/L或者1/2Ms+6
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BA0.2mg/L+IAA0.5～0.7mg/L。
[0029]步骤(4)中，所述培养生根的温度为15～25℃，所述光照为1500～2000LX强度光+自然光，每天所述光照的时间为10～12h。
[0030]步骤(5)中，所述基质的组成为沙壤土和岩石块按照质量比8:1～12:1组成的混合物；
[0031]培养5～6个月后，定植于野外，35
‑
36个月后收获。
[0032]本专利技术的有益效果为：
[0033]本专利技术所述的濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法，通过将选好的植株芽体先后采用乙醇和HgCl2溶液进行消毒，再采用无菌水冲洗，得到无菌外植体在无菌条件下依次进行接种、培养诱导丛芽、生根培养、炼苗移栽和定植，直至收获得到矮紫堇药材。本专利技术所述组织培养方法填补矮紫堇组织培养技术空白，不受季节限制，可周年生产种苗，实现人工繁育。本专利技术所述组织培养方法利用优质健壮矮紫堇的顶芽组织(植株芽体)灭菌获得的无菌组织(无菌外植体)通过分裂分化而获得完形植株，成本低，繁殖快，能够适应高原地区温差大、气温低、紫外线强的独特环境，并且育苗速度快，遗传性好，可周年生产种苗。
具体实施方式
[0034]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。
[0035]实施例1
[0036]本实施例提供一种濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法，步骤如下：
[0037](1)选健壮植株芽体，先用体积浓度为60％的乙醇进行快速涮洗，再用浓度为0.05％HgCl2溶液进行消毒1min；
[0038](2)将步骤(1)处理后的芽体采用无菌水快速冲洗3遍，再将芽体表面水吸干，得到无菌外植体，待用；
[0039](3)在无菌条件下，将步骤(2)所述无菌外植体接种到MS培养基上，在15℃暗培养
[0040]10天后，转接到MS+6
‑
BA1mg/L+NAA0.01mg/L培养基上，在15℃、光照下培养诱导丛芽30天，
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于濒危藏药材矮紫堇组织培养的培养基，其特征在于，包括外植体培养基、丛芽培养基和生根培养基；所述外植体培养基为MS培养基；所述丛芽培养基以MS培养基为基础培养基，还包括6
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BA1mg/L和NAA0.01mg/L；所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，还包括6
‑
BA0.2mg/L和NAA0.5～0.7mg/L；或者所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，还包括6
‑
BA0.2mg/L和IAA0.5～0.7mg/L。2.权利要求1所述培养基在濒危藏药材矮紫堇快速繁殖中的应用。3.一种快速繁殖濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法，其特征在于，步骤包括：(1)选健壮植株芽体，先用乙醇进行快速涮洗，再用HgCl2溶液进行消毒；(2)将步骤(1)处理后的芽体采用无菌水进行冲洗，再将芽体表面水吸干，得到无菌外植体，待用；(3)在无菌条件下，将步骤(2)所述无菌外植体接种到权利要求1所述外植体培养基上，先进行暗培养，再转接到权利要求1所述丛芽培养基上，光照条件下培养诱导丛芽，形成丛芽；(4)将所述丛芽转入权利要求1所述生根培养基中，在光照条件下，得到生根试管苗；(5)将所述生根试管苗经炼苗移栽到基质中，培养成植株后，定植于野外，直至收获。4.根据权利要求3所述的快速繁殖濒危藏药材矮紫堇的组织培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇为体积浓度为60～80％...

【专利技术属性】
技术研发人员：白玛玉珍，李淑萍，欧珠，卫华，强巴卓嘎，曾钰婷，祁驰恒，许娟妮，
申请(专利权)人：西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所，
类型：发明
国别省市：