一种毛囊干细胞的增殖方法技术

本发明专利技术提供了一种毛囊干细胞的增殖方法，涉及毛囊干细胞培养技术领域，旨在解决毛囊干细胞存量较少，且获取难度较大的问题，采用的技术方案是，在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液；制备无血清培养基；向毛囊干细胞悬液中添加无血清培养基，进行初步培养，获得原代毛囊干细胞；将原代毛囊干细胞接种与培养瓶中，添加无血清培养基进行增殖培养；利用获取的皮肤样本获取毛囊干细胞，能够保证获取具有活性的毛囊干细胞，便于后续对毛囊干细胞的增殖培养；通过进行干细胞采集、分离培养、培养扩增等环节，对毛囊原基进行增殖，从而达到毛囊干细胞的制备，毛囊干细胞获取难度降低，存量增多。存量增多。

【技术实现步骤摘要】
一种毛囊干细胞的增殖方法


[0001]本专利技术涉及毛囊干细胞培养
，具体为一种毛囊干细胞的增殖方法。

技术介绍

[0002]毛囊干细胞是在人的毛囊外根鞘隆突部中的一种。毛囊干细胞属于成体干细胞，在体内处于静止状态，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程。
[0003]毛囊干细胞是毛囊中的，和其它成体干细胞一样，具有慢周期性、未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。毛囊干细胞分化经毛囊干细胞、短暂增殖细胞有丝分裂后分化细胞三个阶段。毛囊干细胞在光镜下呈立方形，细胞体积小，核浆比率大，表面光滑，皱褶少，又被称为非锯齿形细胞，细胞体积的增大与增殖能力呈负相关。超微结构显示细胞表面有少许微绒毛，细胞核存在许多卷曲，染色质弥散分布，这些形态特征均表现出原始细胞的特性。
[0004]毛囊干细胞最重要的特点之一就是慢周期性，而且可以有无限多次细胞周期。当暴露于带有核素活其他标记的核苷酸时，细胞在DNA合成的过程中摄取标记核苷酸而将标记整合到DNA中。由于干细胞的细胞周期长，这样的标记可以维持相当长一段时间。正是由于干细胞的这一特点，有人便将它称为标记滞留细胞。
[0005]细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
[0006]多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。必须强调指出，通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。可见，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。
[0007]目前毛囊干细胞存量较少，且获取难度较大，培养质量有待提高，需要对其进行进一步培养，以满足实际应用需求；因此，亟需一种毛囊干细胞的增殖方法来解决上述问题。

技术实现思路

[0008]鉴于现有技术中所存在的问题，本专利技术公开了一种毛囊干细胞的增殖方法，采用的技术方案是，包括以下步骤：步骤1，在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液；步骤2，制备无血清培养基；步骤3，向毛囊干细胞悬液中添加无血清培养基，进行初步培养，获得原代毛囊干细胞；步骤4，将原代毛囊干细胞接种与培养瓶中，添加无血清培养基进行增殖培养，利用获取的皮肤样本获取毛囊干细胞，能够保证获取具有活性的毛囊干细胞，便于后续对毛囊干细胞的增殖培养。
[0009]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤1中，提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液还包括以下步骤：步骤a，将皮肤样本表面脏物清理后，将皮肤样本消毒清洗；步骤b，将皮肤样本切块，加入PBS消化处理，直到组织块变软；步骤c，将消化后的混合物离心处理，取出上清液，获得毛囊干细胞悬液。
[0010]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤a中，皮肤样本采用75％酒精消毒后使用浓盐缓冲液清洗，通过对皮肤样本的表面进行清理消毒，避免皮肤样本中存在其他杂菌或脏物影响对毛囊干细胞的获取。
[0011]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤b中，采用含有胰酶和胆红素的PBS，放入37℃的恒温水浴中消化1
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2小时，通过进行干细胞采集、分离培养、培养扩增等环节，对毛囊原基进行增殖，从而达到毛囊干细胞的制备，毛囊干细胞获取难度降低，存量增多。
[0012]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤c中，混合物离心处理中采用800
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1200r/min离心分离。
[0013]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤2中，无血清培养基包括DMEM培养基为35
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45mL、胰岛素为1
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10μg/mL，EGF为1
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100ng/mL，FGF
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2为1
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100ng/mL、B27补充剂为0.1
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0.4μg/mL的、N2补充剂为20
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40ng/mL、羟基乙醇为25
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50μL、体积百分含量14
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16％的胎牛血清。
[0014]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述无血清培养基包括DMEM培养基为38mL、胰岛素为4μg/mL，EGF为40ng/mL，FGF
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2为60ng/mL、B27补充剂为0.2μg/mL的、N2补充剂为28ng/mL、羟基乙醇为33μL、体积百分含量15％的胎牛血清。
[0015]B27补充剂：是一种无血清培养基添加剂，含有多种细胞生长和分化所需的营养物质，如维生素、氨基酸、脂质等。
[0016]N2补充剂：是一种无血清培养基添加剂，含有多种细胞生长和分化所需的营养物质，如维生素、氨基酸、脂质等。
[0017]FGF
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2：是一种生长因子，能促进细胞增殖和分化，对毛囊干细胞的生长和分化有促进作用。
[0018]EGF：是一种生长因子，能促进细胞增殖和分化，对毛囊干细胞的生长和分化有促进作用。
[0019]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤3中，将毛囊干细胞悬液放入37℃、5％CO2饱和湿度环境中培养4
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8小时，进行半量换液，清除未贴壁细胞；当半量换液重复进行2
‑
3次后，获得高纯度的原代毛囊干细胞，本技术方案中所记载的增殖方法，操作环节简便，制备成本可控，并且毛囊干细胞培养质量高，需求满足度提高，推广价值相应提升。
[0020]本专利技术的有益效果：本专利技术通过利用获取的皮肤样本获取毛囊干细胞，能够保证获取具有活性的毛囊干细胞，便于后续对毛囊干细胞的增殖培养；通过对皮肤样本的表面进行清理消毒，避免皮肤样本中存在其他杂菌或脏物影响对毛囊干细胞的获取；通过进行干细胞采集、分离培养、培养扩增等环节，对毛囊原基进行增殖，从而达到毛囊干细胞的制备，毛囊干细胞获取难度降低，存量增多。
[0021]进一步的，本技术方案中所记载的增殖方法，操作环节简便，制备成本可控，并且毛囊干细胞培养质量高，需求满足度提高，推广价值相应提升。
具体实施方式
[0022]实施例1
[0023]本专利技术公开了一种毛囊干细胞的增殖方法，采用的技术方案是，包括以下步骤：步骤1，在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液；提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液还包括以下步骤：步骤a，将皮肤样本表面脏物清理后，将皮肤样本消毒清洗；所述步骤a中，皮肤样本采用75％酒精消毒后使用浓盐缓冲液清洗；步骤b，将皮肤样本切块，加入PBS消化处理，直到组织块变软；所述步骤b中，采用含有胰酶和胆红素的PBS，放入37℃的恒温水浴中消化1小时；步骤c，将消化后的混合物离心处理，取出上清液，获得毛囊干细胞悬液；所述步骤c中，混合物离心处理中采用800r/min离心分离；获取的皮肤样本获取毛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毛囊干细胞的增殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液；步骤2，制备无血清培养基；步骤3，向毛囊干细胞悬液中添加无血清培养基，进行初步培养，获得原代毛囊干细胞；步骤4，将原代毛囊干细胞接种与培养瓶中，添加无血清培养基进行增殖培养。2.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的增殖方法，其特征在于：所述步骤1中，提取毛囊干细胞，获得毛囊干细胞悬液还包括以下步骤：步骤a，将皮肤样本表面脏物清理后，将皮肤样本消毒清洗；步骤b，将皮肤样本切块，加入PBS消化处理，直到组织块变软；步骤c，将消化后的混合物离心处理，取出上清液，获得毛囊干细胞悬液。3.根据权利要求2所述的一种毛囊干细胞的增殖方法，其特征在于：所述步骤a中，皮肤样本采用75％酒精消毒后使用浓盐缓冲液清洗。4.根据权利要求2所述的一种毛囊干细胞的增殖方法，其特征在于：所述步骤b中，采用含有胰酶和胆红素的PBS，放入37℃的恒温水浴中消化1
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2小时。5.根据权利要求2所述的一种毛囊干细胞的增殖方法，其特征在于：所述步骤c中，混合物离心处理中采用800
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1200r/min离心分离。6.根据权利要求1所述的一种毛囊干细胞的增殖方法，其特征在于：所述步骤2中，无血清...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋伟，
申请(专利权)人：大连思芙雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：