一种预报三疣梭子蟹产卵期的方法技术

一种预报三疣梭子蟹产卵期的方法，本发明专利技术在不处死亲本的条件下，通过钻孔取样少量卵巢组织，结合肉眼检查和组织学观察，可以预报三疣梭子蟹雌体的大致产卵期。本方法的关键为在头胸甲前缘、靠近眼睛后的部位钻孔获取卵巢组织、密封取样孔和采用改良的组织固定液固定卵巢。本方法适合于科研和生产单位使用，在活体条件下了解亲本的卵巢发育情况，从而预报产卵期。预报三疣梭子蟹雌体产卵期有利于人工育苗中准备育苗设施和饵料，对于其人工育苗具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于海水养殖

技术介绍
三疣梭子蟹(尸or,M"w^n'rt^^r"/a^y)是我国重要的海水经济蟹类，自20 世纪80年代以来，由于过度捕捞和近海海洋环境恶化等原因，我国三疣梭子 蟹的自然资源量正在急剧下降(薛俊增等，1997;谢忠明等，2002)，因此， 20世纪90年代以来三疣梭子蟹的人工育苗和池塘养殖在我国沿海迅速发展起 来(吴旭干等，2007)。然而在实际生产中，由于无法准确预测其产卵时间 给育苗生产带来了很大的困难，所以预测产卵期对于三疣梭子蟹人工育苗具 有十分重要的现实意义，可以避免育苗生产中盲目性，及时准备育苗设施和 幼体饵料等，这样在一定程度上可以降低育苗风险和减轻育苗成本。三疣梭子蟹属于先交配后进行卵巢发育的蟹类， 一旦卵巢发育成熟后在适 宜的温度和光照条件下便可产卵，因此准确了解亲本的卵巢发育阶段才可能预 测产卵时间。伹是，国内外有关三疣梭子蟹产卵期预报的研究较少，仅日本的 Hamasaki et al (2004)对室内养殖条件下温度和光照对三疣梭子蟹卵巢发育和 产卵进行了初步研究，发现水温低于12°C，三疣梭子蟹卵巢发育缓慢或者停 止发育，水温和光照周期分别超过12。C和12h，卵巢发育成熟的三疣梭子蟹雌 体才可能产卵。但是他们无法预测每个亲本的产卵时间，仅发现日本海区三疣 梭子蟹的自然产卵高峰在4月中旬，人工条件下在11月或者12月份将野生蟹 放入水温21±0.5°(:水槽中，这些亲本的产卵高峰期可以提早到2月初。国内， 有关三疣梭子蟹产卵的预报主要停留在经验阶段，通常依靠在一定光照条件下 观察活体亲本的卵巢是否充满头胸甲，如果卵巢充满头胸甲，则说明亲本则可 能很快将产卵，但这种方法误差很大(谢忠明等，2002)，其主要原因是这种方 法并不能准确了解亲本的卵巢发育状态。此外，三疣梭子蟹的卵巢成熟分为生长成熟和生理成熟，生长成熟后三疣梭子蟹的卵巢即充满头胸甲，卵巢体积便 不再增长，但是从生长成熟的卵母细胞过渡到可受精的成熟卵(生理成熟)尚需要一段时间(朱冬发等，2005)。显然，凭借经验观察卵巢是否充满头胸甲，无 法判断卵巢的生理成熟和生长成熟，故无法准确预测其产卵时间。判断卵巢的 生长成熟或生理成熟，较准确的方法是活体解剖雌体亲本，获得卵巢，观察卵 子是否游离于卵巢腔中，进一步可通过组织切片确认卵子的成熟状态，但是这 样必然需要处死昂贵的亲本，也无法预测每个雌体亲本的产卵时间，在实际生 产中没有可行性。由于三疣梭子蟹雌体交配后才可卵巢发育，卵巢发育成熟后在一定条件 下便可产卵，因此预报产卵期首先需要确定卵巢发育情况。通过处死亲本取 得卵巢组织进行研究，无法对活体亲本的产卵期进行预报。鉴于此，专利技术人在多年进行三疣梭子蟹人工繁殖研究的基础上，通过反 复研究和验证，专利技术了一种简便、易学的预报三疣梭子蟹产卵期的方法，在不 处死雌体亲本的情况下进行取样，可以准确预测三疣梭子蟹产卵期的方法。
技术实现思路
本专利技术就是为了解决上述问题，克服已有凭借经验观察卵巢是否充满头 胸甲的预报方法，无法判断卵巢的生理成熟和生长成熟，故无法准确预测其 产卵时间的问题，另外克服了已有预报方法通过处死亲本取得卵巢组织进行 研究，无法对活体亲本的产卵期进行预报的问题，提供一种预报三疣梭子蟹 产卵期的方法。本方法适用于三疣梭子蟹雌体。该专利技术适用于科研单位和生 产单位，也可适用于育苗农户使用。本专利技术所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现 1. ，包括以下步骤，(1) 在不解剖三疣梭子蟹雌体亲本的条件下，采用取样工具在三疣梭子 蟹雌体的甲壳上钻取样孔，进行取样，取少量卵巢组织，取样后将取样孔密 封；(2) 检查卵巢发育情况，取样后可以通过肉眼观察或利用显微镜对卵巢 发育情况进行组织学研究；(3)根据步骤(2)的组织学观察预测三疣梭子蟹的产卵期。 步骤(1)中取样工具使用钻头和镊子，所述钻头和镊子在使用前必须经过严格消毒，防止病菌感染亲本，钻头直径为0.8-1.2毫米，钻头过大容易对亲本造成较大的伤害，从而降低亲本成活率。步骤(1)中所述取样孔位于甲壳上的头胸甲前缘，靠近眼睛后的部位，从所述取样孔进行取样，能够取到卵巢样品，且不会对心脏等其它组织造成损伤，所述取样孔的甲壳比较平整，取样后容易密封取样孔。步骤(1)取样孔密封为取样后采用502胶和0.5毫米厚的塑料板密封甲 壳上的取样孔，防止海水进入或者病菌感染等导致亲本死亡，然后过2-3分钟 待502胶固化后将亲本立即放入海水中，减少取样过程对亲本的不良影响。取样后5分钟内密封取样孔。步骤(2)所述检査卵巢发育情况，进一步包括采用固定液对卵巢组织固 定，进行组织学观察。所述固定液为改良的Bouin氏液或者改良的3%福尔马林溶液，否则固定 后的卵巢样品在切片过程中卵母细胞容易破碎，造成卵黄脱落，影响组织学 观察。所述改良的Bouin氏液的配方为2.4毫升饱和苦味酸溶液、64.5毫升福尔 马林、12.5毫升冰醋酸溶液和190毫升蒸馏水。所述改良的3%福尔马林溶液为3%福尔马林溶解于标准人工海水中制备。步骤(3)中所述组织学观察的指标为卵母细胞的形状、卵径、卵黄颗粒 的大小和均匀化程度等，然后根据指标判断三疣梭子蟹的卵巢发育情况，从 而预测雌体的产卵期。用肉眼直接观察卵巢样品，亲本的卵母细胞已经游离于卵巢腔中，卵母 细胞呈圆形或者椭圆形，预测在日光照大于12h、水温16—19"C、盐度为24 一30ppt的条件下，大部分个体4天内就会产卵。所述亲本的卵母细胞尚没有游离于卵巢腔中，则在显微镜下测量卵径和 观察卵母细胞形状，如果平均卵径在350微米左右，且卵母细胞仍然互相挤压呈多边形，可以预测，在日光照大于12h、水温16—19。C、盐度为24—30ppt 的条件下，大部分个体7天后才可能会产卵。所述亲本的卵母细胞尚没有游离于卵巢腔中，则在显微镜下测量卵径和 观察卵母细胞形状，亲本的卵母细胞尚为多边形，平均卵径小于300微米， 在日光照大于12h、水温16—19。C、盐度为24—30ppt的条件下，大部分个体 IO天后可能会产卵。本方法的预报的产卵时间，必须满足日光照大于12h、水温16—19"C、 盐度为24—30ppt的条件。本专利技术的原理要准确预报三疣梭子蟹雌体亲本的产卵期，关键是要确定亲本的卵巢发 育阶段，如果卵巢和卵母细胞已经达到生理成熟，在适宜的光照、温度和盐 度条件下亲本将很快产卵。科研中通常采用处死亲本，打开甲壳，然后获得卵 巢，然后观察卵母细胞(卵子)是否游离于卵巢腔中，进一步可通过组织切片确 认卵子的成熟状态，这种方法不但需要处死昂贵的亲本，也无法预测每个雌 体亲本的产卵时间，在实际生产中没有可行性。本专利技术根据多年的研究结果，参见图1-图10，通过在三疣梭子蟹甲壳钻 孔取出少量卵巢组织用于活体观察和组织学研究，然后迅速用小的塑料板(厚 度0.5毫米)和502胶封住小孔。这样不仅可以准确了解卵巢和卵母细胞发育 的情况，从而预报雌体的产卵时间，而且不需要解剖昂贵的雌体亲本，故可以 节省大量成本。具体结果是(1) 如果亲本的卵母细胞(卵子)已经游离于卵巢腔中，组织学观察表明卵 母细胞(卵子)已经脱离滤泡腔，呈圆形或者椭本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预报三疣梭子蟹产卵期的方法，包括以下步骤，　（１）在不解剖三疣梭子蟹雌体亲本的条件下，采用取样工具在三疣梭子蟹雌体的甲壳上钻取样孔，进行取样，取少量卵巢组织，取样后将取样孔密封；　（２）检查卵巢发育情况，取样后可以通过肉眼或 显微镜对卵巢发育情况进行观察；　（３）根据步骤（２）的组织学观察的指标预测三疣梭子蟹的产卵期。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴旭干，成永旭，刘智俊，杨筱珍，李光霞，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]