一种异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法技术

本发明专利技术提供了一种异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法，包括用无菌苗茎段节间进行胚性愈伤组织诱导以及将诱导出的胚性愈伤组织分化不定芽的步骤，其中，胚性愈伤组织诱导培养基为：MS+6

【技术实现步骤摘要】
一种异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法。

技术介绍

[0002]异色溲疏隶属于绣球花科，溲疏属，其花多而美丽且花期集中在少花的初夏，它多生长在林下和石头缝里，是花境优良的背景材料，是一种较好的园林绿化树种。其本名也有“利尿”之意，记载有清热解毒等药用功效。我国是溲疏属植物的亚洲分布中心，也是世界上溲疏属分布最多的国家，然而目前对于异色溲疏组织培养体系的报道未查询到。
[0003]异色溲疏种子较小，播种繁殖成功率较低并且长势相对较慢，生长年限较长；扦插繁殖操作较为简单，但异色溲疏对温度和湿度极为敏感，对于温度和湿度的控制较为困难，成活率较低且生长年限较长；组织培养可以快速、高效繁殖，成活率较高，但现有的快速繁殖体系对于异色溲疏的繁殖系数较低，生长速率较低，使用以上报道的配方无法达到对于异色溲疏的组织培养体系建立，对溲疏属植物的组织培养研究只涉及最为简单的快速繁殖体系搭建，未见愈伤组织诱导及分化培养系统的报道。
[0004]现有技术没有涉及异色溲疏(Deutzia discolor)物种的组织培养技术报道，只有相关种类，如小花溲疏(Deutzia parviflora)和大花溲疏(Deutzia grandiflora),以及溲疏的品种矮溲疏(Deutzia hybrida
‘
Boule
’
)的组织快繁技术报道。
[0005]史宝胜等(2006)研究了野生小花溲疏种子发芽、硬枝扦插和组织培养条件。研究结果表明：该种子最适发芽温度为20℃；以二年生的溲疏枝条扦插生根率最高；溲疏组织培养适宜培养基：
①
初代培养：MS+6
‑
BA2mg/L+NAA0.1 mg/L；
②
继代培养基：MS+6
‑
BA2mg/L+NAA0.1 mg/L；
③
生根培养基：1/2MS+IAA1.0 mg/L。史宝胜等(2006)研究了野生大花溲疏的组织培养条件。研究结果表明：溲疏组织培养适宜培养基：
①
初代培养：MS+6
‑
BA2 mg/L+NAA0.1mg/L；
②
继代培养基：MS+6
‑
BA2 mg/L+NAA0.1 mg/L；
③
生根培养基：1/2MS+IAA1.0 mg/L。柴慈江等(2010)研究了矮溲疏试管苗的茎芽增殖和生根培养技术。研究结果表明：
①
大量元素浓度为1/2MS处理的茎芽增殖系数可达3.9，与MS处理差异不明显，但在0.05水平显著高于1/4MS处理；
②0‑
0.8mg/LIBA对矮溲疏试管苗的茎芽增殖无明显作用；
③
蔗糖浓度为5g/L处理的茎芽增殖系数为3.8与10和30g/L处理无明显差异，但在0.05水平显著高于15g/L处理。上述处理的试管苗生根率均为100％。
④
以土取代琼脂作培养基支撑物进行矮溲疏试管苗的生根培养，生根率可达100％，根茎比大于琼脂支撑培养对照，根毛也长于对照。
[0006]然而，使用以上报道的配方无法达到对于异色溲疏的组织培养体系建立，尤其是利用叶片进行愈伤组织诱导和分化在整个溲疏属未见报道。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本申请提供了一种异色溲疏组织培养方法。
[0008]以异色溲疏茎段为外植体材料，从外植体灭菌条件得到无菌培养苗；获得优化继代培养基的激素配方，使其繁殖系数最优；优化生根培养基的激素配方，使其生长速率最优，生根率最高；随后进行炼苗和移栽；最终建立了异色溲疏的快速繁殖体系。
[0009]通过不同器官：叶片和不带芽茎段诱导愈伤组织，将叶片接种于诱导愈伤组织培养基诱导出非胚性愈伤组织，诱导出的非胚性愈伤组织进行增殖培养后接种于分化培养基中获得不定根；将不带芽茎段接种于诱导愈伤组织培养基诱导出胚性愈伤组织，诱导出的胚性愈伤组织接种于分化培养基中获得不定芽，将不定芽转移到继代培养基中获得丛生芽，将丛生芽转入生根培养基中得到生根苗，随后进行炼苗和移栽，最终建立了异色溲疏的组织培养体系。
[0010]一种异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法，包括用无菌苗茎段节间进行胚性愈伤组织诱导以及将诱导出的胚性愈伤组织分化不定芽的步骤，其中，胚性愈伤组织诱导培养基为：MS+6
‑
BA2mg/L+NAA 0.1mg/L；胚性愈伤组织分化培养基为：MS+6
‑
BA2mg/L+IBA 0.1
‑
0.3mg/L。
[0011]其中，所述胚性愈伤组织诱导过程具体为：取无菌苗茎段，去除带有芽点的位置，修剪不带芽点的节间至1
‑
2cm，接种于所述的愈伤组织诱导培养基，光照下诱导获得胚性愈伤组织。
[0012]在本专利技术一个实施方案中，所述的异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法还包括以异色溲疏幼嫩带芽茎段或者茎尖为外植体获得无菌苗的步骤。
[0013]其中，将取幼嫩茎尖带2
‑
4片小叶的异色溲疏，表面灭菌后接种于MS+6
‑
BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L培养基中，诱导不定芽。
[0014]其中，所述的表面灭菌方式为：用洗洁精清洗幼嫩茎尖后流水处理1h，在操作台修剪茎尖至1
‑
2cm，75％酒精处理10
‑
30s，再用0.1％升汞消毒处理1
‑
9min，再用无菌水冲洗3
‑
5次。
[0015]在本专利技术一个实施方案中，所述的异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法还包括将胚性愈伤组织分化的不定芽进行继代增殖的步骤，继代增殖培养基为MS+6
‑
BA 1
‑
3mg/L+NAA 0
‑
0.1mg/L。
[0016]其中，所述的不定芽进行继代增殖包括将获得的不定芽修剪茎段至1
‑
2cm，接种于培养基MS+6
‑
BA 1
‑
3mg/L+NAA 0
‑
0.1mg/L中进行不定芽增殖。
[0017]在本专利技术一个实施方案中，所述的异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法还包括将不定芽进行生根的步骤，生根培养基分别为1/2MS+IBA 0.8mg/L或1/2MS+6
‑
BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L。
[0018]一种异色溲疏愈伤组织诱导以及不定根再生的方法，包括用无菌苗叶片进行非胚性愈伤组织的诱导、非胚性愈伤组织增殖以及非胚性愈伤组织诱导不定根的步骤，其中，非胚性愈伤组织诱导培养基为：MS+2,4
‑
D 1
‑
3mg/L；非胚性愈伤组织增殖培养基为：MS+2,4
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种异色溲疏愈伤组织诱导以及植株再生的方法，其特征在于，包括用无菌苗茎段节间进行胚性愈伤组织诱导以及将诱导出的胚性愈伤组织分化不定芽的步骤，其中，胚性愈伤组织诱导培养基为：MS+6
‑
BA2mg/L+NAA0.1mg/L；胚性愈伤组织分化培养基为：MS+6
‑
BA 2mg/L+IBA 0.1
‑
0.3mg/L。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胚性愈伤组织诱导过程具体为：取无菌苗茎段，去除带有芽点的位置，修剪不带芽点的节间至1
‑
2cm，接种于所述的愈伤组织诱导培养基，光照下诱导获得胚性愈伤组织。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以异色溲疏幼嫩带芽茎段或者茎尖为外植体获得无菌苗的步骤。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将取幼嫩茎尖带2
‑
4片小叶的异色溲疏，表面灭菌后接种于MS+6
‑
BA 2mg/L+NAA0.1mg/L培养基中，诱导不定芽。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的表面灭菌方式为：用洗洁精清洗幼...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫，王亚鑫，李进宇，姜国维，尚鑫，雷家俊，宁小艺，马跃，甘思楠，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：