鉴别三种药用黄精品种的方法技术

本发明专利技术属于中药质量控制技术领域，具体公开了一种鉴别三种药用黄精品种的方法：三种药用黄精品种分别为滇黄精、多花黄精、黄精；以待测黄精块根作为样品，将样品进行提取，利用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
鉴别三种药用黄精品种的方法


[0001]本专利技术属于中药质量控制
，特别涉及一种鉴别三种药用黄精品种的方法。

技术介绍

[0002]黄精是一种传统的药食两用植物，有研究表明，黄精根茎中不含淀粉，富含多糖、低聚果糖、黄酮、三萜皂苷等营养及药用功能成分。2020年版《中国药典》“黄精”包含了黄精(Polygonatum sibiricum)、滇黄精(P.kingianum)、多花黄精(P.cyrtonema)3个基源物种，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效。黄精适合亚热带、温带、寒温带林下大规模种植等重要特性，是一种潜力巨大且不占农田的新兴优质杂粮资源。
[0003]黄精、滇黄精及多花黄精的外形较为接近，因此仅凭外形难以区分。
[0004]目前现有的检测方法如下：
[0005]利用气相色谱
‑
质谱对药用黄精中的代谢物进行分析检测；通过多元统计学方法筛选三种药用黄精的差异代谢物，例如为：
[0006]1、CN111505171A的专利技术《一种鉴别三种药用黄精品种的方法》提供了一种鉴别三种药用黄精品种的方法，属于中药质量控制
本专利技术将三种药用黄精进行提取和衍生化处理后，利用气相色谱
‑
质谱对药用黄精中的代谢物进行分析检测，并通过多元统计学方法筛选三种药用黄精的差异代谢物，所述差异代谢物作为鉴别三种药用黄精品种的特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。
[0007]进行所述气相色谱
‑
质谱分析时，气相色谱的操作条件包括：
[0008]DB
‑
5石英毛细管柱60m
×
250μm
×
0.25μm；分流进样，进样量为1μL，分流比为10:1；进样口温度为280℃；离子源温度为250℃；接口温度为250℃；升温程序：初始温度为40℃，保持5min，以8℃/min速度升温至280℃，保持5min；载气为氦气，载气流速为1mL/min；溶剂延迟时间为14min；以m/z计，质量检测范围为33～600；
[0009]质谱的操作条件包括：
[0010]电喷雾电离源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，全扫描方式，电子能量为70eV；以m/z计，四极杆扫描范围为35～780。
[0011]2、CN108845071A的专利技术《三种法定基源黄精的鉴别方法》涉及三种法定基源黄精的鉴别方法。利用超声法提取收集到的药材，提取液经PS/AL固相萃取小柱净化后，采用超高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC
‑
Orbitrap MS)技术分别对其化学成分进行表征，并用多元统计分析处理数据，包括主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS
‑
DA)、正交校正的偏最小二乘分析(OPLS
‑
DA)及聚类分析(HCA)。
[0012]UHPLC/MS分析：
[0013]UHPLC条件为色谱柱：Agilent Zorbax SB
‑
C18；流动相：乙腈A和水B梯度洗脱：0min，10％A；20min，25％A；30min，35％A；40min，50％A；50min，65％A；60min，85％A；70min，100％A；75min，100％A；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样体积10μL；
[0014]质谱条件为采用全扫描和数据相关二级质谱模式检测；离子源为ESI；毛细管温度320℃；喷雾气流速1.5L/min；加热模块250℃；全扫描正、负离子同时检测，分辨率70 000；接口电压：(+)3.5kV，(
‑
)2.8kV；质量范围m/z：100～1000Da；最长注入时间：200msec；二级质谱正、负离子同时检测，数据相关二级质谱对最高的5个峰进行二级质谱裂解：分辨率17 500，质量范围m/z：50～1000Da；最长注入时间：50msec；CID能量：30％；使用动态排除，动态排除时间:10s；工作站：Xcalibar 3.0.63；
[0015]上述方案的缺点是药用植物中主要活性物质的检测方法是通过液相色谱
‑
质谱联用技术进行检测，气相检测到的物质可能不具备代表性，主要活性物质无法利用气相色谱
‑
质谱检测得到；不同代谢物在不同的种质资源间存在较大差异，该方法不具备广泛应用性。

技术实现思路

[0016]本专利技术要解决的技术问题是提供一种利用液相色谱
‑
质谱联用(LC
‑
MS)技术鉴别药用黄精的方法。
[0017]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种鉴别三种药用黄精品种的方法，三种药用黄精品种分别为滇黄精、多花黄精、黄精；
[0018]以待测黄精块根作为样品，将样品进行提取，利用液相色谱
‑
质谱联用(LC
‑
MS)技术对样品中的代谢物进行检测；而后与滇黄精、多花黄精、黄精各自的特征代谢物进行比对，从而对黄精品种进行鉴别。
[0019]作为本专利技术的鉴别三种药用黄精品种的方法的改进：
[0020]当样品中检测出的代谢物属于某个黄精品种的特征代谢物时，即判定该样品为该特征代谢物对应的黄精品种。
[0021]作为本专利技术的鉴别三种药用黄精品种的方法的进一步改进：
[0022]滇黄精的特征代谢物为：飞燕草素
‑3‑
O
‑
葡萄糖苷(neg_2419)、新芒果苷(neg_2461)、紫草素(neg_7649)；
[0023]多花黄精的特征代谢物为：芸香柚皮苷(neg_10553)、豆苷(neg_7594)、龙血素(neg_9283)、雷公藤碱(pos_2718)、芹菜素7
‑
O
‑
新橙皮糖苷(pos_5290)；
[0024]黄精的特征代谢物为：矮牵牛色素
‑3‑
O
‑
[6
”‑
O
‑
(Z)对香豆酰芸香糖苷]‑5‑
O
‑
葡萄糖苷(neg_2293)、三栀子甙(pos_10556)、香蒲新苷(pos_4885)。
[0025]作为本专利技术的鉴别三种药用黄精品种的方法的进一步改进，样品中代谢物的获得包括以下步骤：
[0026]1)、将待测黄精块根于液氮中研磨，称取黄精研磨组织50mg，加入1000
±
50μL的提取液，混匀后超声(超声功率为50W)10
±
1min，得粗提液；
[0027]所述提取液为甲醇：乙腈：水＝2:2:1的体积比混合而得的甲醇乙腈水溶液；
[0028]2)、将步骤1)所得粗提液于
‑
20
±
5℃静置1
±
0.1h后，于4
±
1℃离心(12000
±
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴别三种药用黄精品种的方法，其特征在于：三种药用黄精品种分别为滇黄精、多花黄精、黄精；以待测黄精块根作为样品，将样品进行提取，利用液相色谱
‑
质谱联用技术对样品中的代谢物进行检测；而后与滇黄精、多花黄精、黄精各自的特征代谢物进行比对，从而对黄精品种进行鉴别。2.根据权利要求1所述的鉴别三种药用黄精品种的方法，其特征在于：当样品中检测出的代谢物属于某个黄精品种的特征代谢物时，即判定该样品为该特征代谢物对应的黄精品种。3.根据权利要求2所述的鉴别三种药用黄精品种的方法，其特征在于：滇黄精的特征代谢物为：飞燕草素
‑3‑
O
‑
葡萄糖苷、新芒果苷、紫草素；多花黄精的特征代谢物为：芸香柚皮苷、豆苷、龙血素、雷公藤碱、芹菜素7
‑
O
‑
新橙皮糖苷；黄精的特征代谢物为：矮牵牛色素
‑3‑
O
‑
[6
”‑
O
‑
(Z)对香豆酰芸香糖苷]
‑5‑
O
‑
葡萄糖苷、三栀子甙、香蒲新苷。4.根据权利要求1～3任一所述的鉴别三种药用黄精品种的方法，其特征在于样品中代谢物的获得包括以下步骤：1)、将待测黄精块根于液氮中研磨，称取黄精研磨组织50mg，加入1000
±
50μL的提取液，混匀后超声10
±
1min，得粗提液；所述提取液为甲醇：乙腈：水＝2:2:1的体积比混合而得的甲醇乙腈水溶液；2)、将步骤1)所得粗提液于
‑
20
±
5℃静置1
±
0.1h后，于4
±
1℃离心，得上清液；3)、取步骤2)所得的上清液500μL干燥；加入160μL已腈水溶液进行溶解；所述已腈水溶液为乙腈：水＝1:1体积比混合而得；4)、将步骤3)所得溶液先涡旋震荡而后置于冰水浴中超声10
±
1min；接着于4
±
1℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄雨晴，阮松林，裘劼人，应武，严建立，陈建祥，陆秋君，
申请(专利权)人：杭州市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：