一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法，其采用反相高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法


[0001]本专利技术涉及甾醇及其酯类衍生物定量检测
，涉及一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法，具体涉及一种基于高效液相色谱
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电喷雾式检测器的甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法。

技术介绍

[0002]植物甾醇(PS)，是一类在自然界中分布广泛的天然醇类化学物质，其结构与胆固醇相同。由于骨架上所连支链长度各异，双键的位置与数目多变，植物甾醇结构较为复杂，且种类具有多样化。植物甾醇作为一种天然醇类，其在自然界中分布较为广泛，在大多数植物中可以观察到β
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谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇等。
[0003]植物甾醇具有抑制癌症、抗炎抗老、美容以及促进生长等实际生物利用价值。但由于植物甾醇熔点较高，在常温下以结晶形式存在，油溶性较差，不溶于水，极大程度地限制了甾醇的应用。为改善植物甾醇的溶解性，对植物甾醇的改性研究较多，通常为与脂肪酸结合改善油溶性，与水溶性较好的物质结合改善其水溶性。
[0004]植物甾醇可通过气相色谱法进行测定，但该方法所需温度较高，操作繁琐且灵敏度不高。植物甾醇的酯类衍生物没有明显的紫外吸收，无法通过常用的紫外检测器、示差检测器等进行定量分析，蒸发光散射器发现也存在灵敏度低、重现性差、线性范围较窄等问题。
[0005]电喷雾检测器是新型通用型质量检测器，其检测原理与待测物的吸收光谱与官能团无关，只与样品自身质量和被氮气流上带上的电荷有关，因此在检测脂肪酸组成结构相差不大的多种类甾醇酯时，具有较好的灵敏性与特异性，从而对甾醇和甾醇酯进行定量分析。CAD具有如下特点：1)该检测器灵敏度高，能检测到0.5ng的柱上样量；2)响应因子一致，不依赖于化合物结构，重现性非常好；3)动态检测范围宽，达3
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4个数量级；4)应用较广泛，能分析小分子、大分子化合物，如氨基酸、蛋白质、聚合物等；5)维护十分简便，工作流速0.2
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2.0ml/min，完全兼容UHPLC超快速分析。
[0006]目前尚未见采用HPLC
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CAD测定甾醇及其衍生物定量检测的方法学研究，该专利方法灵敏度高、重现性好，操作简单、准确性好，可定量测定甾醇及其酯类衍生物。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种甾醇及其酯类衍生物的电喷雾检测器液相色谱检测方法，建立了有关物质的HPLC
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CAD的检测方法，为甾醇及其衍生物的质量控制提供更为准确和快速的定性定量检测方法。
[0008]为此，本专利技术提供了一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法，其采用反相高效液相色谱
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电喷雾式检测器对待测样品中的甾醇及其酯类衍生物的含量进行测定，该定量测定方法为一种甾醇及其酯类衍生物的高效液相色谱
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电喷雾式检测器(HPLC
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CAD)定量测定方法。
[0009]本定量测定方法灵敏度高、重现性和分离度好，操作简单，适用于甾醇及其酯类衍生物的定量分析测定。
[0010]根据本专利技术，所述定量测定方法包括：
[0011]步骤A，系统适用性溶液制备：精密称取甾醇及其酯类衍生物纯品适量，分别置于100mL容量瓶中，加入溶剂溶解并混合均匀，稀释至刻度线，获得系统适用性溶液；
[0012]步骤B，供试品溶液制备：取待测样品精密称定，加甲醇溶解，在容量瓶中配置浓度为0.5mg/mL的溶液，摇匀，获得供试品溶液；
[0013]步骤C，对照品溶液制备：取对应的对照品适量，加甲醇溶解成浓度为50.0μg/mL的溶液，摇匀；
[0014]步骤D，检测：精密量取经过步骤A制备的系统适应性溶液各10μL，注入液相色谱仪，各杂质峰之间的分离度符合要求(R＞1.5)；再精密量取经过步骤C制备的对照品溶液和经过步骤B制备的供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0015]步骤E，根据供试品溶液的色谱图中的峰面积的值，计算其所对应的浓度。
[0016]本专利技术中，所述分离度R按照下式进行计算：
[0017][0018]式中tR2为相邻色谱峰中后一峰的保留时间；
[0019]tR1为相邻色谱峰中前一峰的保留时间；
[0020]W1、W2为相邻两色谱峰的峰宽；
[0021]在本专利技术的一些实施例中，所述测定方法的色谱条件包括：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇和甲酸的混合物；柱温为20
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45℃；电喷雾检测器，雾化温度为30
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45℃，幂率区间为1
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3.6，采样频率为5
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10Hz，过滤常数为3
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4s，流速为0.5
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1.5mL/min。
[0022]在本专利技术的一些实施例中，所述测定方法采用反相柱，所述反相柱为Acclaim
TM
120C18色谱柱，5μm，4.6mm
×
150mm。
[0023]在本专利技术的一些实施例中，所述甲醇和甲酸的混合物中甲醇:甲酸＝1000:1。
[0024]本专利技术中，所述适用性溶液包括甾醇及其酯类衍生物的标准品溶液，其浓度为0.5mg/mL。
[0025]优选地，所述甾醇为植物甾醇，其包括谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇。
[0026]优选地，所述甾醇的酯类衍生物包括甾醇的油溶性甾醇酯、水溶性甾醇酯，其包括植物甾醇硬脂酸酯、硬脂酸胆甾醇酯、琥珀酸甾醇单酯。
[0027]优选地，在所述步骤A中，所述溶剂为甲醇。
[0028]本专利技术中，所述测定方法中杂质检测限(S/N＝3)为小于20ng，定量限(S/N＝10)为小于60ng。
[0029]本专利技术涉及一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法，其采用反相高效液相色谱
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电喷雾式检测器对待测样品中的甾醇及其酯类衍生物的含量进行测定；该定量测定方法包括：色谱条件使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇
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甲酸为流动相，流速为0.8mL/min，柱温30℃，待测物质配置的溶液精密量取注入液相色谱仪，记录色谱图，各色谱峰之间的分离度符合规定。
[0030]本专利技术所提供的甾醇及其酯类衍生物的定量检测方法的有益效果包括：
[0031](1)无需繁琐的酯化、萃取等前处理过程，样品经溶解后进行进样分析；同时，检测系统达到平衡的时间较短，稳定性好，灵敏度高，采用外标法进行测定结果更为准确。
[0032](2)本专利技术通过对甾醇及其酯类衍生物的方法学验证，可以看出CAD电喷雾检测器对于该类结构物质准确度高、重复性好。同时色谱系统稳定时间较短，检测所需样品浓度较低。
附图说明
[0033]下面结合附图来对本专利技术作进一步详细说明：
[0034]图1为豆甾醇系统适用性溶液的色谱分析图。
[0035]图2为豆甾醇标准曲线图。
[0036]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甾醇及其酯类衍生物的定量测定方法，其采用反相高效液相色谱
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电喷雾式检测器对待测样品中的甾醇及其酯类衍生物的含量进行测定。2.根据权利要求1所述的定量测定方法，其特征在于，所述定量测定方法包括：步骤A，系统适用性溶液制备：精密称取甾醇及其酯类衍生物纯品适量，分别置于100mL容量瓶中，加入溶剂溶解并混合均匀，稀释至刻度线，获得系统适用性溶液；步骤B，供试品溶液制备：取待测样品精密称定，加甲醇溶解，在容量瓶中配置浓度为0.5mg/mL的溶液，摇匀，获得供试品溶液；步骤C，对照品溶液制备：取对应的对照品适量，加甲醇溶解成浓度为50.0μg/mL的溶液，摇匀；步骤D，检测：精密量取经过步骤A制备的系统适应性溶液各10μL，注入液相色谱仪，各杂质峰之间的分离度R＞1.5；再精密量取经过步骤C制备的对照品溶液和经过步骤B制备的供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；步骤E，根据供试品溶液的色谱图中的峰面积的值，计算其所对应的浓度。3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述测定方法的色谱条件包括：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇和甲酸的混合物；柱温为20
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45℃；电喷雾检测器，雾化温度为30
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45℃，幂率区间为1
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈必强，李悦峰，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：