一种用于奶酪中生物胺分析的前处理方法技术

本发明专利技术公开了一种用于奶酪中生物胺分析的前处理方法，所述方法包括如下步骤：将待测奶酪样品加入甲酸水溶液，涡旋混匀，保温水浴，加入乙腈混匀，超声提取，离心，滤纸过滤；滤液加入纯水混匀，加入富集材料，混匀，室温静置；筛板过滤，富集材料中加入洗脱剂，室温放置10

【技术实现步骤摘要】
一种用于奶酪中生物胺分析的前处理方法
(一)

[0001]本专利技术涉及食品样品中有机化学物质的测定分析技术，尤其涉及奶酪中7种生物胺含量的富集、净化和检测方法。
(二)
技术介绍

[0002]生物胺是一类含氮低分子量有机胺类化合物，在奶酪、鱼、黄酒、豆瓣酱等中都有检出，通常认为是由于微生物产生的氨基酸脱羧酶对食品中的游离氨基酸进行脱羧基等反应而形成，因此，在富含蛋白质的发酵食品中较为常见。少量的生物胺对人体有生理活性作用，如抗氧化、调节免疫活动等作用，但是过量的生物胺也会引发恶心、呕吐、头痛、血压升高等过敏反应。
[0003]生物胺常见的检测方法有液相色谱法、液相色谱串联质谱法等，这些方法前处理过程大多采用衍生化的方法，繁琐、耗时；或者无需衍生，直接仪器测定，但复杂食品的基质效应干扰较大，影响结果的准确性和稳定性。
[0004]因此，开发一种前处理简单、快速，既可实现目标物的提取、富集和净化，又可消除样品的基质效应的前处理方法，是生物胺检测迫切需要解决的问题。
(三)
技术实现思路

[0005]本专利技术目的是提供一种用于奶酪中生物胺分析的前处理方法，采用甲酸水溶液结合乙腈提取生物胺，再利用石墨化碳纳米管从样品提取液中富集生物胺，采用甲酸乙腈溶液洗脱、过膜后，即可上机测试。本专利技术前处理过程简单，既保证了生物胺的提取效率又避免了复杂基质对后续仪器测定的干扰，富集效率高、可有效降低或消除样品基质效应，实现对奶酪中生物胺定性、定量分析的技术。
[0006]本专利技术采用的技术方案是：
[0007]本专利技术提供一种用于奶酪中生物胺分析的前处理方法，所述方法包括如下步骤：
[0008](1)将待测奶酪样品，加入甲酸水溶液混匀，40
‑
70℃水浴保温5
‑
20min，再加入乙腈，充分振荡涡旋混匀，并于300
‑
800W超声提取10
‑
30min，离心(优选6000
‑
10000r/min离心5min，更优选8000r/min)，上清液采用滤纸过滤，收集滤液；
[0009](2)将步骤(1)所得滤液加入纯水使乙腈体积浓度为2
‑
10％(优选5
‑
8％)，再加入富集材料，涡旋混匀，室温静置30min，使待测奶酪样品中的生物胺富集在富集材料上；筛板过滤，使溶液和富集材料分离，移取富集材料于试管中并加入洗脱剂，室温放置10
‑
50min(优选30min)进行浸泡洗脱，期间每隔5分钟涡旋振荡1次，增加洗脱效果；所述富集材料包括羟基化多壁碳纳米管(羟基化
‑
MWNTs)、石墨化多壁碳纳米管(石墨化
‑
MWNTs)或含锆金属有机框架材料(Zr
‑
MOF)；所述洗脱剂包括乙腈、体积浓度0.1％甲酸乙腈溶液或体积浓度0.2％甲酸乙腈溶液；
[0010](3)将步骤(2)中的洗脱液经0.22μm滤膜过滤后，经高效液相色谱
‑
三重四级杆串联质谱联用仪检测生物胺，外标法定量，实现奶酪样品中生物胺的快速分析测定。
[0011]优选的，步骤(1)水浴温度55℃保温10min。
[0012]优选的，步骤(1)500W超声提取15min。
[0013]优选的，步骤(1)所述甲酸水溶液体积浓度为0.05
‑
0.5％(优选0.1％)，甲酸水溶液与乙腈体积比为1:1
‑
5(优选1:4)；所述甲酸水溶液与乙腈总体积加入量以待测奶酪样品质量计为3
‑
8mL/g，优选5mL/g。
[0014]优选的，步骤(1)甲酸水溶液加入量以待测奶酪样品质量计为1mL/g；乙腈加入量以待测奶酪样品质量计为4mL/g。
[0015]优选的，步骤(2)纯水与滤液体积比5
‑
40:1，优选9:1。
[0016]优选的，步骤(2)富集材料加入量以滤液体积计为10
‑
30mg/mL，优选25mg/mL。
[0017]优选的，步骤(2)所述富集材料为石墨化多壁碳纳米管，内径5
‑
10μm、长度5
‑
30μm。
[0018]优选的，步骤(2)所述洗脱剂为体积浓度0.2％甲酸乙腈溶液。所述洗脱剂与滤液体积比为1:1。
[0019]本专利技术所述生物胺包括酪胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、组胺、色胺及章鱼胺。
[0020]与现有方法相比，本专利技术有益效果主要体现在：本专利技术的奶酪样品依次经0.1％甲酸水溶液和乙腈溶剂提取后能够使生物胺的回收率得到提高，采用石墨化多壁碳纳米管对溶液中的生物胺进行富集，0.2％甲酸乙腈溶液进行洗脱后，经滤膜过滤后的洗脱液无需衍生化处理，可直接经高效液相色谱
‑
三重四级杆串联质谱联用仪检测。上述前处理方法操作简便、富集效率高，可有效减弱或消除复杂基质的基质效应，准确度高，适合奶酪中7种生物胺的快速检测，具有较好的应用前景。
(四)附图说明
[0021]图1为实施例2不同提取溶剂或提取方式时奶酪中生物胺回收率比较图。
[0022]图2为实施例3不同前处理净化材料处理的生物胺回收率比较图。
[0023]图3为实施例4不同洗脱溶剂处理的生物胺回收率比较图。
[0024]图4为分析方法流程图。
(五)具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：本专利技术实施例石墨化碳纳米管内径5
‑
10μm、长度5
‑
30μm。
[0026]实施例1、不同浓度生物胺标准品溶液的线性方程
[0027](1)准确吸取7种生物胺的混合标准溶液(7种生物胺为酪胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、组胺、色胺及章鱼胺，溶剂为0.1mol/L盐酸水溶液，其中酪胺、苯乙胺、色胺和章鱼胺的浓度均为1mg/L，腐胺、尸胺和组胺的浓度均为2mg/L)，采用甲酸体积浓度0.1％的甲酸乙腈配制成0.5～100μg/L或1～200μg/L系列标准工作液。
[0028](2)经高效液相色谱
‑
三重四级杆串联质谱联用仪检测7种生物胺的峰面积，以标准品的质量浓度为横坐标，定量离子对的峰面积为纵坐标，绘制各标准曲线，获得线性方程和线性相关系数，结果见表2。
[0029]高效液相色谱
‑
三重四级杆串联质谱联用仪检测条件：
[0030]色谱条件：
[0031]采用WATERS Atlantis HILIC Silica色谱柱(2.1mm
×
150mm，3μm)分离，流动相A为5mmol/L乙酸铵溶液(pH值为4)，B为乙腈；梯度洗脱程序：0～1.0min，10％～10％ A；1.0～5.5min，10％～50％ A；5.5～5.6min，50％～70％ A；5.6～8.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于奶酪中生物胺分析的前处理方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将待测奶酪样品加入甲酸水溶液混匀，40
‑
70℃水浴保温5
‑
20min，再加入乙腈，充分振荡涡旋混匀，并300
‑
800W超声提取10
‑
30min，离心，上清液经滤纸过滤，收集滤液；(2)将步骤(1)所得滤液，加入纯水使乙腈体积浓度为2
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10％，再加入富集材料中，涡旋混匀，室温静置30min，筛板过滤，移取富集材料加入洗脱剂，室温放置10
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50min进行浸泡洗脱，期间每隔5分钟涡旋振荡1次，过滤，收集洗脱液；所述富集材料包括羟基化多壁碳纳米管、石墨化多壁碳纳米管或含锆金属有机框架材料；所述洗脱剂包括乙腈、体积浓度0.1％甲酸乙腈溶液或体积浓度0.2％甲酸乙腈溶液；(3)将步骤(2)中的洗脱液经0.22μm滤膜过滤后，采用高效液相色谱
‑
三重四级杆串联质谱联用仪检测的峰面积，外标法定量，实现奶酪样品中生物胺的分析测定。2.如权利要求1所述用于奶酪中生物胺分析的前处理方法，其特征在于，步骤(1)水浴温度55℃保温10min。3.如权利要求1所述用于奶酪中生物胺分析的前处理方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧，曹慧，王瑾，姜侃，肖功年，杨胜利，
申请(专利权)人：浙江科技学院，
类型：发明
国别省市：