本发明专利技术公开了一种药品、保健食品和食品中ＰＤＥ↓［５］型抑制剂的高效液相色谱－串联质谱联用检测方法，以乙腈为提取剂、５０％乙腈为稀释剂、甲酸－乙酸铵溶液－甲醇－乙腈体系为流动相，在流速为０．２～０．４ｍｌ／ｍｉｎ、柱温２０～５０℃条件下经液相色谱柱分离后，采用电喷雾（ＥＳＩ）离子源离子化，正离子模式全扫描一、二级质谱，根据二级质谱定性判别样品是否添加ＰＤＥ↓［５］型抑制剂。本方法的样品前处理简单，准确度高、专属性好、检测灵敏度高、分析周期短，一次实验就能完成十一种ＰＤＥ↓［５］型抑制剂的定性分析，适合ＰＤＥ↓［５］型抑制剂的微量分析，也可作为监督检验的确证和仲裁方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种高效液相色谱-串联质谱联用检测方法，尤其涉及药品保健食品和食品中PDEs型抑制剂的高效液相色谱-串W:谦联用检测方法的新技术。
技术介绍
补肾壮阳类中成药、保健食品和食品中非法添加化学成分的行为日益猖獗， 且针对标准的高科技造假行为越来越多，严重威胁人民群众的身体健康。此类违法活动尤以在补肾壮阳功效的中成药、保健食品和食品中非法添加PDEs型抑 制剂(碌酸二酯酶5型抑制剂，phosphodiesterase type-5 inhibitor)最为典型活跃。 PDE5型抑制剂是目前治疗男性性功能勃起障碍最有效的化学药品，美国食品药 品管理局(FDA)先后批准了西地那非、伐地那非和他达4立非三种PDE5型抑制 剂(详见表2)。查阅大量文献证实，壮阳类化学成分的非法添加主要以PDE5 型抑制剂为主。PDEs型抑制剂属于处方药，临床应用时有严格的适应症、禁忌 症和一定的副作用，患者在不知情的情况下^^容易引起严重的药物不良反应， 甚至导致死亡。近年来，还发现了添加大量上述三种PDE5型抑制剂的未知衍生 物，这些化学成分与母体有着共同的核心结构(详见表2), 4旦均未经严格的安 全性实验评价其药效与毒副作用，存在着严重隐患。中药、保健食品和食品化学成分复杂多样，各成分之间干扰严重，加上生 产工艺的影响，使得添加化学成分的检测方法要求更具专属性。当前用于检测 中成药中PDEs型抑制剂的方法主要有理化反应、薄层层析(TLC)、近红外、 高效液相色镨-紫外/二管阵列检测器(HPLC-UV/DAD )、高效液相色谱法-质谱(HPLC-MS)等方法。理化反应具有操作筒单、检测快速、检测试剂少且无毒、检测成本低、易 于培训掌握的优势，非常适合基层打假快速筛查可疑样品。广东省药品检验所 开发的那非类和拉非类两大理化快筛方法，可准确筛查前述十一种PDEs型抑制 剂，推广应用可望获得了良好的经济与社会效益。薄层层析因多用有机溶剂， 且与理化反应相比优势较少，故较少使用。近红外最大的优点在于无损、快速分析，通常检测一个样品，时间以秒计。 但近红外检测需要专业人员预先建立模板，近红外仪也需要相应的检测平台。 目前，近红外多作为药品检测车的车载技术，在打假一线现场使用。HPLC-UV/DAD和HPLC-MS因为其出色的分离能力与高自动化水平，已 成为确证中成药中PDE5型抑制剂的主流技术。相比较而言，HPLC-UV仅依据 保留时间进行定性判别的模式，准确性不如HPLO/DAD和HPLC-MS。HPLC-DAD可以提供分析对象的三维光谱信息，通过与相应对照品的光谱 图比较，用于斷艮化学成分的确证，基本可以排除阳性干扰。但HPLC-DAD要 求分析对象与干扰成分完全分离，这将致使分析时间延长；此外，HPLC-DAD 不能分析没有紫外吸收的化学成分，这使DAD的使用受到一定的限制。HPLC-MS在定性上拥有无与伦比的特异性，灵敏度远远超过其它分析方法。 多数物质在合适的电离方式与条件下能电离，并依据分子键能大小断裂成，产 生与结构对应高度专属的质语图。尤其是二级或多级质谱，即使在色谱共洗脱的情况下仍能准确定性分析成分，这大拓展了色语的应用范围。因此，质谱是 复杂混合物的定性的确证与仲裁方法。上述方法各具特色，依据检测目的各有其适用范围。其中，理化、TLC、近 红外等方法检测原理基本都是针对化学成分分子结构中的某一特殊部位建立， 定性准确性有限，存在少数的假阳性干扰，因此，这些方法适合作为某类成分 的筛选方法，而不能作为确证方法使用。HPLC-UV/DAD或HPLC-MS结果准 确，《a^r测所需的贵重仪器决定检测只能在实验室内实施。如前述，可掺入PDE5型抑制剂的新衍生物逐年增多，现有检测技术中，理化、近红外等方法已可成功覆盖上述十一种PDEs型抑制剂，确证与仲裁方法的 研究相对滞后，目前，尚没有保健食品和食品中非法添加PDE5型抑制剂的检测 标准；已有中成药中PDE5型抑制剂的检测标准也仅限于有限的几个成分且存在 扫描范围过宽、处理复杂、背景信号大等缺陷。标准现状极大制约了监管的有 效实施，市场迫切需要能广泛覆盖PDEs型抑制剂的确证和仲裁方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服现有液相色谱质谱联用技术检测中成药中PDEs型抑 制剂的缺陷，提供一种涵盖药品、保健食品和食品中那红地那非、红地那非、 伐地那非、羟基豪莫西地那非、西地那非、豪莫西地那非、氨基他达拉非、他 达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非和那莫西地那非等十一种PDEs型抑制剂的 :W联用画串联质谱(HPLC-MS/MS)确证与仲裁方法。为实现上述目的，本专利技术的药品、保健食品和食品中十一种PDEs型抑制剂 的HPLC-MS/MS联用检测方法以乙腈为提取剂、50%乙腈为稀释剂、曱酸-乙酸 铵溶液-甲醇-乙腈体系为流动相，在流速为0.2~0.4ml/min、柱温为20~50°C 条件下经液相色语柱分离后，采用电喷雾(ESI)离子源离子化，正离子模式全 扫描一、二级质谱。优选的，所述样品提取剂为乙腈，稀释剂为50%乙腈。优选的，所述甲酸-乙酸铵-曱醇-乙腈体系中，甲酸和乙酸铵的混合溶液、 曱醇、乙腈分别为三组流动相。优选的，所述三组流动相的体积比为曱酸和乙酸铵的混合溶液30 75， 甲醇10~55，乙腈5 20。优选的，所述甲酸和乙酸铵的混合溶液中的曱酸的体积百分比浓度为 0.1~0.2%。优选的，所述曱酸和乙酸铵的混合溶液中的乙酸铵的摩尔浓度浓度为 0.01~0.02mol/L。优选的，所述流速为0.2 0.4ml/min。 优选的，所述柱温为20~50°C。优选的，所述色谱柱以十八烷基键合硅胶作为填充剂。 优选的，所述质语仪为串联四级杆质i普仪。 优选的，所述离子源为电喷雾离子源(ESI)。 优选的，所述的离子化模式为正离子模式。 优选的，扫描范围为50 550amz。定性分析可根据样品与对照品二级质谱图的匹配性或样品与质谱图库中标 准质语图匹配性定性。本专利技术的高效液相色谱_串联质谱联用检测方法还可以根据非法添加的证不明物。与现有HPLC-MS技术相比，本专利技术具有如下有益效果1、 本专利技术的HPLC-MS/MS方法极大扩展了 HPLC-MS方法检测PDE5型抑 制剂的适用范围，由以前单一药品分析领域扩大应用到药品、保健食品和食品 等领域。 -2、 本专利技术的HPLC-MS/MS方法显著提高了检测效率， 一次实验即可分析 十一种PDE5型抑制剂，检测指标的设置更符合当今非法添加的客观形势。3、 本专利技术的HPLC-MS/MS方法具有超高的灵敏度，本方法十一种PDE5 型抑制剂的检出限均不超过10ng,而PDE5型抑制剂的临床起效剂量那非类和 拉非类分別为50~100mg、 5~20mg,本方法足以保证日常监督检验的技术需求。4、 本专利技术的HPLC-MS/MS方法具有优异的定性能力，本专利技术中，十一种 PDE5型抑制剂细微结构差异，产生的质谙特征片段(详见表3)已存在较大差 异，可准确确证可疑目标成分。5、 本专利技术的HPLC-MS/MS方法，只需在仪器上完成标准质谱图库的构建， 后续分析可不需对照品，只需检测样品，将检品测试结果与质谱图谱库比较即 可确^正样品中的目本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种药品、保健食品和食品中ＰＤＥ５型抑制剂的高效液相色谱－串联质谱联用检测方法，其特征在于，以乙腈为提取剂，５０％乙腈为稀释剂，甲酸－乙酸铵溶液－甲醇－乙腈体系为流动相，在流速为０．２～０．４ｍｌ／ｍｉｎ、柱温２０～５０℃条件下经液相色谱柱分离后，采用电喷雾（ＥＳＩ）离子源离子化，正离子模式全扫描一、二级质谱，根据二级质谱定性分析判别样品是否添加ＰＤＥ５型抑制剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗卓雅，李延志，李晨辉，雷毅，杨德忠，
申请(专利权)人：广东省药品检验所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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