广谱中和SARS-CoV-2的单克隆抗体VacBB-548及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种广谱中和SARS

【技术实现步骤摘要】
广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体VacBB
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548及其应用


[0001]本专利技术属于新型冠状病毒治疗
，具体涉及一种广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体VacBB
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548及其应用。

技术介绍

[0002]Spike蛋白是一种三聚体跨膜糖蛋白，是新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)最重要的表面膜蛋白，含有两个亚基S1和S2，其中S1主要包含有N端结构域(NTD)和受体结合区域(RBD)，负责识别和结合宿主细胞受体；S2含有膜融合过程所需的基本元件。当发生病毒感染时，S1亚基与宿主细胞的血管紧张素转换酶2(angiotensinconverting enzyme 2，ACE2)结合，使得病毒附着在宿主细胞表面，丝氨酸蛋白酶TMPRSS2激活S蛋白；然后宿主细胞的Furin酶在S蛋白的S1/S2位点进行切割，病毒
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受体结合使得预融合的S蛋白三聚体不稳定，S1亚基脱落，S2亚基转变为稳定的融合后构象，从而驱动病毒膜与细胞膜融合，使病毒进入宿主细胞。中和抗体(neutralizing antibody，nAb)能够通过阻断spike蛋白与细胞受体ACE2结合从而抑制病毒进入宿主细胞；而spike蛋白上的RBD直接结合ACE2，是中和抗体最重要的识别靶点。RBD中出现的突变通常影响病毒感染和传播，甚至导致病毒逃逸自然感染或疫苗接种诱导的抗体中和作用。
[0003]同自然感染病毒一样，接种疫苗能够在人体内诱导出有效的体液免疫反应，因此在预防病毒感染上发挥了关键作用。并且多次接种疫苗可以不断刺激人体免疫系统并诱导出越来越高水平的中和抗体，尤其是一些广谱中和抗体。然而不断出现的新冠病毒变种，尤其是Omicron变种，极大程度上破坏了疫苗所建立的免疫屏障，显著逃逸了疫苗接种者体内产生的中和抗体。目前有不少文献报道，疫苗加强免疫能够在一定水平上对抗病毒逃逸，不过这其中发挥关键作用的抗体特征尚不清楚，尤其是在灭活疫苗接种者体内。同时，从灭活疫苗接种者中分离出来的广谱中和抗体，特别是能中和多种Omicron亚型变异株的，目前报道较少。
[0004]因此，为了应对世界各地SARS
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CoV
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2的不断进化和重组以及中和抗体逃逸的潜在风险，研发新的新型冠状病毒抗体，仍然是本领域的研究重点和难点。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体VacBB
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548及其应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面公开了一种广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体，所述广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体为VacBB
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548，该单克隆抗体由重链和与之配对的轻链组成；所述重链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依序为“EFTVSSNY”、“IYPGGST”和“ARDFGDLYFDY”，所述轻链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依序为“QSVSSY”、“GAS”和“QQYGSSPRT”。
[0008]需要说明的是，本专利技术的关键在于，从接种三针灭活疫苗的志愿者的外周血特异
性单个记忆B细胞中克隆并鉴定获得了1株单克隆中和抗体，即VacBB
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548，其能够对包括新型冠状病毒Omicron变体在内的多种SARS
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CoV
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2变异假病毒发挥中和作用，具体包括WT(野生型)、Beta、Delta、BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.4/5。并且与现有报道的从灭活疫苗中分离的中和抗体相比，本专利技术的VacBB
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548单克隆抗体的中和作用更强。
[0009]本专利技术的一种实现方式中，新型冠状病毒单克隆抗体VacBB
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548的重链可变区序列为Seq ID No.1所示序列，轻链可变区序列为Seq ID No.2所示序列。
[0010]需要说明的是，以上具体序列的重链序列可变区和轻链序列可变区只是本专利技术的一种实现方式中具体采用的单克隆抗体序列；可以理解，对于单克隆抗体而言，影响其与抗原决定簇形成精密互补的区域是互补性决定区(缩写CDR)，具体的，即重链序列的CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链序列的CDR1、CDR2和CDR3；因此，只要保障本专利技术的重链序列和轻链序列的CDR1、CDR2和CDR3序列不变，都能够基本实现本专利技术新型冠状病毒单克隆抗体的功能和作用。也就是说，本专利技术的新型冠状病毒单克隆抗体，其具体序列不仅限于以上具体序列的重链序列可变区和轻链序列可变区。
[0011]本专利技术的第二方面公开了一种编码本专利技术的广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体的核酸片段，所述核酸片段编码VacBB
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548的重链和轻链。
[0012]本专利技术的一种实现方式中，编码Seq ID No.1所示的重链序列可变区的核酸序列如Seq ID No.3所示，编码Seq ID No.2所示的轻链序列可变区的核酸序列如Seq ID No.4所示。
[0013]需要说明的是，以上具体的核酸序列只是本专利技术的一种实现方式中具体采用的核酸序列，可以理解，对于一个氨基酸而言可以有多个密码子；因此，根据密码子的简并性，在保障编码序列不变的情况下，除了以上限定的核酸序列以外，还可以有若干种编码相同重链或轻链的核酸序列，都在本专利技术的保护范围内。
[0014]本专利技术的第三方面公开了一种含有本专利技术的核酸片段的重组质粒。
[0015]需要说明的是，本专利技术的重组质粒是为了能够有效的表达本专利技术的核酸片段，从而获得相应的重链、轻链或新型冠状病毒单克隆抗体；因此，原则上只要能够将核酸片段转染到宿主细胞中进行核酸表达的载体都可以用于本专利技术。
[0016]本专利技术的第四方面公开了一种含有本专利技术的核酸片段或本专利技术的重组质粒的重组细胞。
[0017]需要说明的是，本专利技术的重组细胞是指转染有本专利技术的核酸片段或重组质粒的宿主细胞；一般可以通过直接培养这样的宿主细胞获得本专利技术的重链、轻链或新型冠状病毒单克隆抗体。
[0018]本专利技术的第五方面公开了一种本专利技术的广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体的制备方法，包括采用本专利技术的重组细胞对本专利技术的重组质粒进行蛋白表达，提取并纯化表达蛋白，即获得本专利技术的广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体。
[0019]本专利技术的第六方面公开了本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体，其特征在于，所述广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体为VacBB
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548，该单克隆抗体由重链和与之配对的轻链组成；所述重链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依序为“EFTVSSNY”、“IYPGGST”和“ARDFGDLYFDY”，所述轻链的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依序为“QSVSSY”、“GAS”和“QQYGSSPRT”。2.根据权利要求1所述的广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体，其特征在于，VacBB
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548的重链可变区序列为Seq ID No.1所示序列，轻链可变区序列为Seq ID No.2所示序列。3.一种编码权利要求1或2所述的广谱中和SARS
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CoV
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2的单克隆抗体的核酸片段，其特征在于，所述核酸片段编码VacBB
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548的重链和轻链。4.根据权利要求3所述的核酸片段，其特征在于，包含编码...

【专利技术属性】
技术研发人员：周兵，张政，段美美，鞠斌，王苗，刘聪聪，范晴，
申请(专利权)人：深圳国家感染性疾病临床医学研究中心，
类型：发明
国别省市：