本发明专利技术涉及工业微生物技术领域，具体涉及一种类球红细菌诱变菌株HCYJ
【技术实现步骤摘要】
一种类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01及应用
[0001]本专利技术属于工业微生物
，具体涉及一种类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01及应用。
技术介绍
[0002]辅酶Q10具有抗氧化、保护心肌等作用，即属于保健食品也属于药物，也可作为化妆品用于抗衰老等。目前市场上辅酶Q10药物存在口服和注射两种制剂类型。其口服制剂用于心血管疾病、肝炎、癌症的综合治疗等的辅助治疗；注射剂用于充血性心力衰竭、继发性醛固酮增多症等的治疗。辅酶Q10可采用天然提取、化学合成和生物合成三种方法制备，其中生物合成即发酵法是工业生产的主流生产工艺。
[0003]关于烟曲霉、穿膜红细菌、根癌农杆菌、类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)等发酵制备辅酶Q10的发酵工艺已有较多的研究报道。其中类球红细菌的辅酶Q10产量较高，因此也较为常用，是目前辅酶Q10发酵生产用的主要菌株。近年来，为进一步提高辅酶Q10发酵产量、产率，提高菌株生产性能等，学术界及工业企业对类球红细菌进行了广泛的研究，包括菌株诱变、基因改造等。由于辅酶Q10生物合成途径涉及的相关基因和酶较为复杂，基因改造对辅酶Q10的产量提高效果尚不理想，且普遍受到质粒不稳定的影响，需要特殊的固化技术。例如申请号CN201210201141.0的中国专利公布的工程菌株发酵产量仅为出发菌株(也称为亲本菌株或原始菌株)的1.14倍。 太空诱变、辐照等物理诱变、化学诱变等多种诱变技术也被用于类球红细菌的筛选，但大多产量为mg级，产率也较低且所得菌株难适应低氧培养条件，例如，申请号CN202210359522.5的中国专利文献及研究论文(任鹏. 类球红细菌产辅酶Q (10)的菌种选育及发酵条件优化[D]. 中国人民解放军军事医学科学院, 2010.)报道的菌株。
[0004]原则上，商业化可用的发酵生产用菌株，辅酶Q10产量应达到500mg/L以上(王娅. 辅酶Q (10)高产菌株理性选育与发酵优化. 福建师范大学, 2010.)。当进一步考虑菌株发酵的产率、动力耗电成本等更多因素时，对菌株的要求则更高。但目前辅酶Q10产量达到500mg/L以上的菌株较少。因此，辅酶Q10发酵生产用菌株仍有待进一步改进，以提高工业生产的效率和满足市场需求。
技术实现思路
[0005]针对上述技术问题和需求，本专利技术的目的之一是提供一种类球红细菌诱变菌株，该菌株的辅酶Q10发酵产量和产率较高，可满足工业生产需求。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01，该菌株保藏编号为：CGMCC NO.26642；保藏日期为2023年02月21日；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01的分类学命名为类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)。
[0007]所述类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01是以类球红细菌(保藏编号CICC10287)为出发菌株，经
60
Co
‑
γ射线、亚硝基胍交替诱变而得。分别在0.5L摇瓶培养和5L发酵罐流加补料培养条件下考察辅酶Q10的产量，类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01的辅酶Q10产量可达出发菌株类球红细菌CICC10287辅酶Q10产量的9.4倍。
[0008]因此，本专利技术的第二方面提供了所述类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01在发酵制备辅酶Q10中的应用。
[0009]本专利技术的有益效果：本专利技术的类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01辅酶Q10产量、产率可达出发菌株类球红细菌CICC10287的9.4倍，优化培养条件后，辅酶Q10的产量可达3601mg/L，产率可达37.5 mg/L/h，且传代稳定性良好无需基因工程菌所需的固化技术处理，适于辅酶Q10工业生产。
具体实施方式
[0010]以下结合具体实施方式对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例中辅酶Q10的产量(mg/L，即发酵结束时发酵液中辅酶Q10的浓度)采用高效液相色谱法测定。详细方法及操作步骤可参见论文《诱变选育高产辅酶 Q10 的类球红细菌》(柯崇榕, 陈鲁芳, 钟璐芳, 等. 药物生物技术, 2015, 22(6):502
‑
504.)。
[0011]实施例1 类球红细菌诱变方法及筛选实验1.出发菌株类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides，保藏编号CICC10287)，在R2A培养基上呈现红色。
[0012]2.诱变方法2.1
60
Co
‑
γ射线诱变(1)拿菌种甘油管一支，接种到种子摇瓶中，32℃、200转/min，振荡培养23h。
[0013](2)把培养好的种子液稀释至10
‑6梯度，吸取10ml到灭过菌的试管中，进行
60
Co
‑
γ射线照射，照射剂量为0Gy、2Gy、3Gy、4Gy、5Gy、6Gy。
[0014](3)把未照射的菌液和
60
Co
‑
γ射线照射后的菌液，分别取0.1ml涂布平板，32℃避光培养5d。
[0015](4)从致死率为90%左右的平板上挑选形态颜色较佳的单菌落，接种到种子摇瓶中，培养23h，培养好后一部分做成甘油管，一部分接发酵摇瓶，发酵摇瓶培养48h后，测发酵单位，选1株辅酶Q10含量最高的菌株。
[0016]2.2亚硝基胍诱变(1)拿
60
Co
‑
γ射线诱变的菌种甘油管一支，接种到种子摇瓶中，32℃、200转/min，振荡培养23h。
[0017](2)把培养好的种子液稀释至10
‑6梯度，吸取1ml到灭过菌的1.5ml离心管中。
[0018](3)加入0.5ml亚硝基胍溶液，使终浓度为0.2mg/ml，32℃水浴处理，分别处理0min、10min、20min、30min、40min、50min。反应完后，离心用生理盐水重悬菌体，重复3次，终止反应。
[0019](4)把未诱变的菌液和亚硝基胍诱变后的菌液，分别取0.1ml涂布平板，32℃避光培养5d。
[0020](5)从致死率为90%左右的平板上挑选颜色不同的单菌落，接种到种子摇瓶中，培养23h左右，培养好后一部分做成甘油管，一部分接发酵摇瓶，发酵摇瓶培养48h后，测发酵单位，选1株辅酶Q10含量最高的菌株。
[0021]2.3联合诱变根据本实施例“2.1
60
Co
‑
γ射线诱变”、
“ꢀ
2.2亚硝基胍诱变”的方法进行辐照和化学诱变筛选。每次诱变筛选出的辅酶Q10含量最高的菌株作为下一次诱变的出发菌株。诱变依次采本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01，其特征在于，所述类球红细菌诱变菌株HCYJ
‑
01的保藏编号为：CGMCC NO.26642；保藏日期为2023年02月21日；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：...
【专利技术属性】
技术研发人员：宗剑飞，肖卫华，张小凤，刘峰，
申请(专利权)人：山东合成远景生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。