骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，具体涉及骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用。本发明专利技术首次在AD模型转基因小鼠中补充外源性mMDSCs，从功能学和神经病理学两方面改善了Pg加重的AD病情，获得一定的疗效，具有临床应用潜能，为牙龈卟啉单胞菌促进阿尔茨海默症药物或试剂制备提供了新的策略和研发方向，具有指导意义。具有指导意义。具有指导意义。

【技术实现步骤摘要】
骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用。

技术介绍

[0002]牙周炎是一种多因素共同作用的慢性感染性疾病，牙周炎的始动因素是菌斑生物膜，而牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)是菌斑生物膜的重要成员之一。牙周炎患者的口腔内存在长期慢性Pg感染，这将会导致全身系统性炎症状态，是多种系统性疾病的危险因素，包括阿尔茨海默症(Alzheimer
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s disease，AD)。Pg与AD等认知障碍性疾病的相关性已成为近年来的研究热点。
[0003]AD是最常见的老年痴呆症类型，已成为世界第五大致死疾病。一般AD患者表现出临床症状后还可生存8
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10年。随着社会人口老龄化增长，全球AD患者人数预计在2050年超过1.52亿。到目前为止，AD除了长期口服药物进行对症治疗外，尚未出现治愈方法。这些挑战将给家庭和社会带来巨大的经济和精神负担。同时65岁以上人群也是牙周炎高发人群，并且AD患者由于认知和行为能力下降而无法保持口腔卫生，牙周炎患病风险大大提高，口腔内Pg含量显著增加。而Pg可以诱导机体的免疫炎症反应，是AD的重要危险因素，因此Pg和AD之间可能形成恶性循环，从而不断加重局部和全身的免疫炎症反应。
[0004]目前已有较多研究发现Pg促进AD的发生和发展，但其具体机制尚未阐明。口腔来源的Pg及其毒力因子可以进入血液循环，引起全身炎症状态，可能促进神经炎症激活，进而导致AD的发生和发展，我们研究尝试从免疫炎症机制入手，寻找Pg促进AD发生发展的关键免疫细胞或因子，并初步探讨其作用机制及用于治疗AD的潜在价值。
[0005]骨髓源性抑制细胞(myeloid
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derived suppressor cells，MDSCs)是重要的外周免疫细胞，在感染等病理条件下发挥强大的免疫抑制作用，分为单核细胞样MDSCs(monocytic MDSCs，mMDSCs)和粒细胞样MDSCs(granular MDSCs，gMDSCs)两大亚群。有临床研究报道，MDSCs与AD的发生发展密切相关。因此研究Pg感染是否通过调控MDSCs及其亚群促进AD的发生和发展具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供了骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用。
[0007]本专利技术的目的通过下述技术方案予以实现：
[0008]骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用。
[0009]骨髓源性抑制细胞在制备治疗牙周炎促进阿兹海默症药物或试剂中的应用。
[0010]所述牙周炎源自于牙龈卟啉单胞菌感染。
[0011]所述骨髓源性抑制细胞为单核细胞样骨髓源性抑制细胞(mMDSCs)。
[0012]本专利技术还提供了一种治疗阿兹海默症药物，所述药物包含单核细胞样骨髓源性抑制细胞。
[0013]进一步的，所述药物还包括药物学上可接受的辅料。
[0014]本专利技术的有益效果在于：
[0015](1)本专利技术采用流式细胞术分选获得小鼠的骨髓来源mMDSCs，经尾静脉注射至Pg感染的5xFAD小鼠，证明补充外源性mMDSCs升高了5xFAD小鼠多器官中被Pg降低的mMDSCs的比例和免疫抑制功能，改善外周和中枢的免疫微环境，从而改善Pg加重的AD病情。
[0016](2)本专利技术发现了mMDSCs细胞是牙周炎促进AD发病的关键靶细胞，经体外扩增和纯化mMDSCs细胞并进行静脉注射可以有效减缓AD发病症状。进一步地，通过本专利技术的研究结果能够对牙龈卟啉单胞菌促进阿尔茨海默症药物或试剂制备提供了新策略和研发方向，具有指导意义。
附图说明
[0017]图1是5xFAD小鼠体内感染Pg后MDSCs及其亚群的比例变化。5xFAD小鼠分为对照组(AD)和实验组(AD+Pg)。其中，A：流式图显示两组小鼠的血液(BL)和脾脏(SP)中MDSCs的比例变化；B：流式图显示两组小鼠的血液和脾脏中mMDSCs和gMDSCs的比例变化；C：统计图显示两组小鼠的血液和脾脏中MDSCs的比例变化；D：统计图显示两组小鼠的血液和脾脏中mMDSCs的比例变化；E：统计图显示两组小鼠的血液和脾脏中gMDSCs的比例变化。*P＜0.05，**P＜0.01。
[0018]图2是5xFAD小鼠原代细胞感染不同类型状态的Pg后MDSCs及其亚群的比例变化。将5xFAD小鼠的骨髓原代细胞分为空白对照组(Control)、Pg野生株(33277)、热灭活株(HI
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33277)和牙龈蛋白酶突变株(136)。其中，A：流式图显示四组细胞MDSCs的比例变化；B：流式图显示四组细胞mMDSCs和gMDSCs的比例变化；C：统计图显示四组细胞MDSCs的比例变化；D：统计图显示四组细胞mMDSCs的比例变化；E：统计图显示四组细胞gMDSCs的比例变化。**P＜0.01。
[0019]图3是5xFAD小鼠补充外源性mMDSCs后行为学检测结果。5xFAD小鼠分为对照组、实验组和治疗组，其中，A：流式图显示流式细胞术分选外源性mMDSCs的圈门策略及分选效率；B：在MWM实验的前五天，三组小鼠的逃避潜伏期；C：在MWM实验的第六天，三组小鼠穿越原平台位置的次数；D：在MWM实验的第六天，三组小鼠在目标象限的运动时间；E：在MWM实验的第六天，三组小鼠在目标象限(TQ)的运动路程；F：在MWM实验的第六天，三组小鼠的平均游泳速度；G：在MWM实验的第六天，三组小鼠的运动轨迹。*P＜0.05，**P＜0.01。
[0020]图4是5xFAD小鼠补充外源性mMDSCs后免疫荧光染色结果。5xFAD小鼠分为对照组、实验组和治疗组，其中，A：免疫荧光图像显示三组小鼠皮层和海马区的Aβ沉积情况；B：免疫荧光图像显示三组小鼠皮层和海马区的神经元；C：免疫荧光图像显示三组小鼠皮层和海马区的小胶质细胞；D：免疫荧光图像显示三组小鼠皮层和海马区的M2型小胶质细胞；E
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H：分别显示(A
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D)的定量统计。*P＜0.05，**P＜0.01。标尺，50μm。
[0021]图5是5xFAD小鼠补充外源性mMDSCs后内源性MDSCs亚群的比例变化。5xFAD小鼠分为对照组、实验组和治疗组，其中，A：流式图显示三组小鼠外周血(BL)、脾脏(SP)和骨髓(BM)中MDSCs亚群的比例；B：统计图显示三组小鼠外周血、脾脏和骨髓中mMDSCs的比例；C：
统计图显示三组小鼠外周血、脾脏和骨髓中gMDSCs的比例。*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
[0022]图6是5xFAD小鼠补充外源性mMDSCs后内源性MDSCs亚群产IL
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10细胞的比例变化，5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.骨髓源性抑制细胞在制备治疗阿兹海默症药物或试剂中的应用。2.骨髓源性抑制细胞在制备治疗牙周炎促进阿兹海默症药物或试剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述牙周炎源自于牙龈卟啉单胞菌感染。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙建波，
申请(专利权)人：东莞市东南部中心医院，
类型：发明
国别省市：