一种L-肌肽、L-组氨酸、β-丙氨酸甲酯盐酸盐含量的快速测定方法技术

本发明专利技术提供了一种检测L

【技术实现步骤摘要】
一种L
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肌肽、L
‑
组氨酸、
β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐含量的快速测定方法


[0001]本专利技术涉及检测领域，具体涉及一种L
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肌肽生产过程中L
‑
肌肽、L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐含量的快速检测方法。

技术介绍

[0002]L
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肌肽广泛存在于机体组织的细胞内，在肌肉和中枢神经系统表达最高，在脊椎动物骨骼中，L
‑
肌肽的含量约为1.6～20.6μmol/g，在猪肉、牛肉和鸡肉中的含量分别为4.8、2.0和15.0mmol，在人体肌肉中的含量为2～20mmol。随着对L
‑
肌肽研究深入，学者们纷纷研究了L
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肌肽的生物学特性。迄今为止，L
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肌肽的许多生物学活性已被证实，如生理pH缓冲作用、螯合金属离子、清除自由基、抗氧化、防止蛋白质糖化、抗衰老、抗炎以及抗肿瘤等。
[0003]以L
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组氨酸和β
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丙氨酸甲酯盐酸盐为底物，可酶法制备L
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肌肽，在生产过程中，若底物转化不完全、纯化不彻底，将存在生产成本增加、L
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肌肽成品中残留L
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组氨酸和β
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丙氨酸甲酯盐酸盐的风险，因此建立一种快速高效的分析方法有利于控制生产过程和成品杂质。
[0004]L
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肌肽的检测尚无国家标准，且未见L
‑
肌肽生产过程中L
‑
肌肽、L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的快速检测方法报道。
[0005]文献CN202010513278.4中公开了一种L
‑
肌肽和L
‑
组氨酸的分离方法，其L
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肌肽检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，以癸烷磺酸钠缓冲溶液(取癸烷磺酸钠1.22g、磷酸氢二钾11.41g溶于1000mL去离子水中，并以磷酸溶液调节PH至3.0即得)：乙腈＝78：22(v/v)进行洗脱，流速为1.0mL/min，检测器为紫外检测器，波长为215nm。该方法的检测流动相配制繁琐，且癸烷磺酸钠有一定的毒性，对实验人员及环境具有一定的危害。
[0006]宋扬等公开了一种“HPLC法测定大鼠脑组织游离天门冬氨酸、谷氨酸、L
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肌肽及γ
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氨基丁酸”的方法，其采用C18色谱柱，以乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，用邻苯二甲醛为柱前衍生剂，在荧光检测器下，采用二元梯度洗脱检测，检测时间长达45min以上，该方法样品检测时间较长，且使用梯度洗脱，过程较繁琐，不利于L
‑
肌肽生产过程中的物质快速的检测。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种高效液相分析方法，可快速检测L
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肌肽生产过程中L
‑
肌肽、L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的含量，方法操作简便，分析时间短、分离度高。
[0008]具体的，本专利技术采用的技术方案是：
[0009]一种测定包含L
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组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的L
‑
肌肽中L
‑
肌肽含量的方法，其包括：
[0010]配制待测样品和标准品，使用衍生化试剂进行柱前衍生化；
[0011]使用高效液相色谱法，以无机和有机溶液的混合液为流动相，使用外标法来计算所述待测样品中L
‑
肌肽以及L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的含量。
[0012]根据项1任一项所述的方法，其中，所述无机和有机溶液的混合液为乙酸钠溶液和乙腈的混合溶液，优选，所述乙酸钠溶液和乙腈按体积比混合的比例为75
‑
65：25
‑
35，优选为75
‑
70：25
‑
30。
[0013]根据项2所述的方法，其中，所述乙酸钠溶液的浓度为45
‑
100mmol/L，优选为45
‑
55mmol/L。
[0014]根据项2或3所述的方法，其中，所述乙酸钠溶液的pH值为4.0
‑
5.5，优选为4.5
‑
5.0。
[0015]根据项1
‑
4中任一项所述的方法，其中，所述流动相的流速为0.6
‑
1.0mL/min，优选为0.8
‑
1.0mL/min。
[0016]根据项1
‑
5中任一项所述的检测方法，其中，所述衍生化试剂为2，4
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二硝基氟苯。
[0017]根据项2
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6中任一项所述的方法，其中，调节所述乙酸钠溶液pH值所用酸为醋酸或盐酸，优选为醋酸。
[0018]根据项1
‑
7中任一项所述的方法，其中，所述高效液相色谱法使用的色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱，优选，所述十八烷基键合硅胶色谱柱为Eclipse PLUS C18色谱柱。
[0019]根据项1
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8中任一项所述的方法，其中，所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温为30
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45℃，优选为35
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40℃；
[0020]优选，所述高效液相色谱中检测波长为355
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365nm，优选为360
‑
365nm；
[0021]优选，所述高效液相色谱中分析时样品的进样量为10
‑
100μL，优选为10
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25μL。
[0022]根据项1
‑
9中任一项所述的方法，其中，所述L肌肽、L
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组氨酸和β
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丙氨酸甲酯盐酸盐的含量同时测定。
[0023]专利技术的效果
[0024]本专利技术提供了一种高效液相分析方法，可快速检测L
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肌肽生产过程中L
‑
肌肽、L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的含量，方法操作简便，分析时间短、分离度高。对于由L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐制备得到的L
‑
肌肽的质量控制提供了一种可靠的检测方法。
附图说明
[0025]图1为实施例1的L
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肌肽标准品色谱图。
[0026]图2为实施例1的β
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丙氨酸甲酯盐酸盐标准品色谱图。
[0027]图3为实施例1的L
‑
组氨酸标准品色谱图。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定包含L
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组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的L
‑
肌肽中L
‑
肌肽含量的方法，其包括：配制待测样品和标准品，使用衍生化试剂进行柱前衍生化；使用高效液相色谱法，以无机和有机溶液的混合液为流动相，使用外标法来计算所述待测样品中L
‑
肌肽以及L
‑
组氨酸和β
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的含量。2.根据权利要求1任一项所述的方法，其中，所述无机和有机溶液的混合液为乙酸钠溶液和乙腈的混合溶液，优选，所述乙酸钠溶液和乙腈按体积比混合的比例为75
‑
65：25
‑
35，优选为75
‑
70：25
‑
30。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述乙酸钠溶液的浓度为45
‑
100mmol/L。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，所述乙酸钠溶液的pH值为4.0
‑
5.5，优选为4.5
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5.0。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中，所述流动相的流速为0.6
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【专利技术属性】
技术研发人员：乔莉苹，周宁，于鲁孟，罗月，马欣娟，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：