淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法技术

本发明专利技术公开了淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法，属于医药技术领域，具体涉及淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法。针对淫羊藿苷ICA在乳腺癌BC中作用的分子机制尚不完全清楚的问题，本发明专利技术通过淫羊藿苷ICA下调NEAT1的水平，抑制MDA

【技术实现步骤摘要】
淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法。

技术介绍

[0002]乳腺癌(Breast Cancer，BC)是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，据美国癌症协会2022年最新数据统计，BC的发病率和死亡率在女性癌症中仍居高不下。晚期远处转移目前被认为是BC死亡的主要原因，尽管临床诊断和局部全身治疗方法显著提高了BC患者的生存率，但伴有转移的BC患者的预后仍然很差。
[0003]淫羊藿苷(Icariin，ICA)是从淫羊藿中提取的一种活性化合物，具有骨保护、生殖保护、神经保护、心血管保护和免疫保护的作用。淫羊藿始载于《神农本草经》，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，是国内治疗BC常用的中草药。课题组前期研究结果表明，淫羊藿可以有效抑制MDA
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MB
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231细胞的干EMT和干性表达。而且越来越多的证据支持ICA具有一定的抗肿瘤活性作用。最近的一项研究表明，ICA可抑制胰腺癌PANC02细胞的增殖、迁移并且诱导凋亡。此外，ICA还可以通过下调Ki67、survivin、Bcl
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2、c
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Myc和上调P16、P53、Bax水平，促进宫颈癌细胞的凋亡。在BC中，ICA具有放射增敏的作用，协同辐射杀伤4T1细胞，抑制MCF
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7细胞的增殖和自噬，诱导其凋亡。最新的研究表明，ICA通过抑制NF
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κB信号通路，减轻肿瘤免疫抑制环境，进而增强其抗BC的作用。目前对ICA抗BC的研究主要集中在其在BC细胞中的生物学功能，但其在BC中作用的分子机制尚不完全清楚。因此，针对BC相关表型特征，进一步研究其分子机制是十分有必要的。
[0004]上皮间充质转化(Epithelial
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mesenchymal transition，EMT)，是指上皮细胞失去极性而重组细胞骨架，向运动间充质细胞转化的过程。当上皮细胞转化为间充质细胞后，E
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cadherin和ZO
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1的丢失导致其黏附能力下降，使细胞获得纺锤形间充质形态，表达N
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cadherin、fibronectin和Vimentin等标记物，促使肿瘤迁移、侵袭和抗凋亡能力显著增强，在肿瘤的发生和转移中发挥着关键作用。肿瘤干细胞(Cancer stem cells，CSCs)是一群具有自我更新和分化潜能特征的细胞亚群，是肿瘤发生和复发的根本原因。乳腺癌干细胞(Breast cancer stem cells，BCSCs)具有广泛的耐药性，是BC治疗中的难点。靶向治疗BCSCs，诱导CSCs凋亡和分化，降低CSCs特性，抑制CSCs自我更新和分裂，可能成为BC预防和治疗中的重要组成部分。有意思的是，EMT过程不仅可以增强肿瘤细胞获得转移和侵袭的行为，还诱导了CSCs表型调控的分子机制。经转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGFβ1)诱导的EMT，可以上调肺癌CSCs中间充质标志物的表达，下调上皮标志物的表达。在BC中，由Snail、Twist、或TGFβ1诱导的EMT而产生的间充质细胞，都获得了CD44
+
/CD24
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/low
的BCSCs特征细胞群。因此，EMT和CSCs的相互交织关系，可能是探讨BC进展机制和治疗策略的合理切入点。
[0005]长链非编码RNA(long non
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coding RNA，lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA，几乎参与细胞中所有的生理活动，影响疾病的诊断、治疗和预后。lncRNA可以通
过发挥促癌或抑癌作用，从而调控与肿瘤发生发展相关的各种生物学进程。例如过表达的lncRNA tPA能够激活TGF
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β信号通路，影响BC中EMT的发生，进而促进BC的侵袭和迁移。除此之外，SNHG6和LBCS等多种lncRNA参与了乳腺癌EMT和CSCs的调节。其中lncRNA NEAT1高表达已被证明与BC预后不良有关，促进EMT的发生，而该基因的敲除可以降低BCSCs的标志物，增加其对化疗药物的敏感性。虽然NEAT1对EMT和CSCs特性表现正调控的作用，但NEAT1是否参与ICA对MDA
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231细胞的抗肿瘤作用有关尚不清楚。本研究观察了ICA对MDA
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231细胞EMT和BCSCs特性的影响，发现NEAT1在BC中显著上调，并与预后不良成正相关。此外，沉默NEAT1增强了ICA对MDA
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231细胞EMT和BCSCs特性的抑制作用，而EMT和BCSCs特性是BC转移的关键因素。机制方面，我们发现NEAT1通过TGFβ/SMAD信号通路促进MDA
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231细胞的转移，维持其EMT表型和BSCSs特性。

技术实现思路

[0006]针对ICA在BC中作用的分子机制尚不完全清楚的问题，本专利技术提供了一种淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：
[0008]淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法，淫羊藿苷(ICA)下调NEAT1的水平，抑制MDA
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231细胞的增殖，降低BCSCs的干性表达，抑制上皮间充质转化(EMT)的过程，通过NEAT1/TGFβ/SMAD调节途径抑制BC的转移。
[0009]淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法，包括以下步骤：
[0010]步骤1，用ICA处理MDA
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231细胞，然后采用MTT发检测细胞活力；
[0011]步骤2，通过划痕实验判断ICA对MDA
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231细胞迁移的影响；再通过悬浮成球实验判断ICA对MDA
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231细胞的干细胞特性的影响；得出ICA对MDA
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231细胞的EMT和干细胞特性有一定的抑制作用；
[0012]步骤3，通过平板克隆实验，判断ICA对TGFβ1诱导MDA
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231细胞的EMT和干细胞特性；得出ICA通过调节TGFβ1，抑制MDA
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231细胞的EMT和干细胞特性；
[0013]步骤4，用不同浓度的ICA处理MDA
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231细胞后，通过Western Blot检测SMAD2、PSMAD2、SMAD2/3和TG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法，其特征在于：ICA下调NEAT1的水平，抑制MDA
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231细胞的增殖，降低BCSCs的干性表达，抑制EMT的过程，通过NEAT1/TGFβ/SMAD调节途径抑制BC的转移。2.根据权利要求1所述的淫羊藿苷通过信号通路调控乳腺癌EMT和干性表达的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，用ICA处理MDA
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231细胞，然后采用MTT发检测细胞活力；步骤2，通过划痕实验判断ICA对MDA
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231细胞迁移的影响；再通过悬浮成球实验判断ICA对MDA
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231细胞的干细胞特性的影响；得出ICA对MDA
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231细胞的EMT和干细胞特性有一定的抑制作用；步骤3，通过平板克隆实验，判断ICA对TGFβ1诱导MDA
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231细胞的EMT和干细胞特性；得出ICA通过调节TGFβ1，抑制MDA
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231细胞的EMT和干细胞特性；步骤4，用不同浓度的ICA处理MDA
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231细胞后，通过Western Blot检测SMAD2、PSMAD2、SMAD2/3和TGFβ1表达水平；得出ICA通过抑制MDA
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231细胞的TGFβ/SMAD信号通路的激活而抑制TGFβ1诱导的EMT；步骤5，用癌症基因组图谱TCGA中的数据集分析乳腺癌患者lncRNA NEAT1的表达，通过qPCR进行评估，将si
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NEAT1
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1、si
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NEAT1
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2、si
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NEAT1
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3分别转染至MDA
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MB
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【专利技术属性】
技术研发人员：彭涛，马艳苗，陈富丽，宋博，刘明燃，冯振宇，赵子苇，肖楷楠，
申请(专利权)人：山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：