一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法技术

本发明专利技术公开一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其包括步骤：将二倍体酿酒酵母菌体涂布在产孢培养基上进行培养，得到包含酿酒酵母子囊孢子与酵母营养体细胞的第一混合体；采用蜗牛酶液对所述第一混合体进行处理，使所述酿酒酵母子囊孢子的子囊壁消化，得到包含单倍体子囊孢子与酵母营养体细胞的第二混合体；对所述第二混合体进行水浴加热处理，杀死所述酵母营养体细胞，得到单倍体子囊孢子；将所述单倍体子囊孢子涂布在完全培养基上进行培养，获得单倍体酿酒酵母。本发明专利技术提供的方法操作简单，且可以高效地获得大量单倍体酿酒酵母，为杂交或者原生质体融合育种等研究提供基材。究提供基材。究提供基材。

【技术实现步骤摘要】
一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法


[0001]本专利技术涉及酵母培养
，特别涉及一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法。

技术介绍

[0002]酿酒酵母又称面包酵母，酿酒酵母是人类运用最广泛的一种酵母，可用于制作面包和馒头等食品及酿酒。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径为5
‑
10μm，其繁殖的方法为出芽生殖。酿酒酵母具有生长周期短、发酵能力强、容易进行大规模培养以及含有多种蛋白质、氨基酸、维生素、生物活性物质等丰富的营养成分等优点，一直是基础应用研究的主要对象，在食品、医药等领域应用广泛，被认为是最具潜力的大规模生产菌种。
[0003]酿酒酵母细胞有两种生活形态：单倍体和二倍体。酵母单倍体的繁殖比较简单，一般是出芽生殖，当环境生存压力较大时会死亡。二倍体细胞主要进行有丝分裂繁殖，但在环境条件比较恶劣时能够以减数分裂方式繁殖，生成单倍体孢子。单倍体可以交配融合重新形成二倍体细胞，继续进行有丝分裂繁殖状态。酿酒酵母的最适生长温度为28℃，但也可以在适当的高温下生长。作为一种单细胞真核生物，酿酒酵母具有一切真核细胞生命活动最基本特征，又有实验所需微生物应具备的背景清楚、生长迅速、操作方便等许多优点。事实上，现代遗传学、细胞生物学、生物化学中许多规律性认知都是由酵母菌为实验材料研究出来的。至今已经发现约300种酵母蛋白质在人体中的功能相同，其中许多与人类疾病相关的蛋白相似性很高。因此，酿酒酵母一直作为一种理想生物研究模型。另外，作为传统工业发酵菌株，酿酒酵母在酒精发酵相关领域也应用广泛。
[0004]酿酒酵母的单倍体主要用于杂交或者原生质体融合育种，因为其仅有一套染色体,所有基因座位(不论是显性还是隐性)都能在RNA或表型水平上表现出来，因而也是遗传学研究的重要工具。然而，现有技术难以高效获得大量的单倍体酿酒酵母。
[0005]因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

[0006]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，旨在解决现有技术难以高效获得大量的单倍体酿酒酵母的问题。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，包括步骤：
[0009]将二倍体酿酒酵母菌体涂布在产孢培养基上进行培养，得到包含酿酒酵母子囊孢子与酵母营养体细胞的第一混合体；
[0010]采用蜗牛酶液对所述第一混合体进行处理，使所述酿酒酵母子囊孢子的子囊壁消化，得到包含单倍体子囊孢子与酵母营养体细胞的第二混合体；
[0011]对所述第二混合体进行水浴加热处理，杀死所述酵母营养体细胞，得到单倍体子囊孢子；
[0012]将所述单倍体子囊孢子涂布在完全培养基上进行培养，获得单倍体酿酒酵母。
[0013]所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，所述产孢培养基由半乳糖、KCl、醋酸钠、酵母膏以及琼脂粉组成。
[0014]所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，将二倍体酿酒酵母菌体堆积在产孢培养基上进行培养的过程中，培养条件为20
‑
30℃恒温培养，培养时间为6
‑
8天。
[0015]所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，采用蜗牛酶液对所述第一混合体进行处理的步骤包括：
[0016]将蜗牛酶粉末溶于PBS溶液中，制得蜗牛酶液；
[0017]将所述蜗牛酶液加入到所述第一混合体中，在30
‑
35℃条件下水浴酶解50
‑
70min，得到第二混合体。
[0018]所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，对所述第二混合体进行水浴加热处理的步骤中，水浴加热处理的温度为50
‑
60℃，时间为10
‑
20min。
[0019]所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，将所述单倍体子囊孢子涂布在完全培养基上进行培养的步骤包括：
[0020]将所述单倍体子囊孢子倒入装有玻璃珠的无菌离心管中，加入适量灭菌的PBS，振荡后得到酵母细胞子囊孢子悬液；
[0021]将所述酵母细胞子囊孢子悬液稀释后涂布于完全培养基上并置于恒温培养箱中培养，获得单倍体酿酒酵母。
[0022]所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其中，所述完全培养基由葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物以及琼脂粉组成。
[0023]有益效果：本专利技术提供了一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，通过利用蜗牛酶液消化酿酒酵母子囊孢子子囊壁从而获得单倍体的酿酒酵母子囊孢子，再将单倍体子囊孢子进行完全培养诱导酵母营养体细胞的形成从而获得单倍体酿酒酵母。本专利技术提供的方法操作简单，且可以高效地获得大量单倍体酿酒酵母，为杂交或者原生质体融合育种等研究提供基材。
附图说明
[0024]图1为为本专利技术一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法流程图。
[0025]图2为第一混合体中酿酒酵母子囊孢子与酵母营养体细胞的染色结果图。
[0026]图3为实施例1培养的单倍体酿酒酵母的PCR结果跑胶图。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]请参阅图1，图1为本专利技术提供的一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法流程图，如图所示，其包括步骤：
[0029]S10、将二倍体酿酒酵母菌体涂布在产孢培养基上进行培养，得到包含酿酒酵母子
囊孢子与酵母营养体细胞的第一混合体；
[0030]S20、采用蜗牛酶液对所述第一混合体进行处理，使所述酿酒酵母子囊孢子的子囊壁消化，得到包含单倍体子囊孢子与酵母营养体细胞的第二混合体；
[0031]S30、对所述第二混合体进行水浴加热处理，杀死所述酵母营养体细胞，得到单倍体子囊孢子；
[0032]S40、将所述单倍体子囊孢子涂布在完全培养基上进行培养，获得单倍体酿酒酵母。
[0033]本专利技术通过利用蜗牛酶液消化酿酒酵母子囊孢子子囊壁从而获得单倍体的酿酒酵母子囊孢子，再将单倍体子囊孢子进行完全培养诱导酵母营养体细胞的形成从而获得单倍体酿酒酵母。本专利技术提供的方法操作简单，且可以高效地获得大量单倍体酿酒酵母，为杂交或者原生质体融合育种等研究提供基材。
[0034]在一些实施方式中，所述产孢培养基由半乳糖、KCl、醋酸钠、酵母膏以及琼脂粉组成。作为举例，所述产孢培养基由(0.1％(w/v)半乳糖，0.18％(w/v)KCl，0.82％(w/v)醋酸钠，0.25％(w/v)酵母膏以及2％(w/v)琼脂粉组成。本实施例提供的产孢培养基适合二倍体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其特征在于，包括步骤：将二倍体酿酒酵母菌体涂布在产孢培养基上进行培养，得到包含酿酒酵母子囊孢子与酵母营养体细胞的第一混合体；采用蜗牛酶液对所述第一混合体进行处理，使所述酿酒酵母子囊孢子的子囊壁消化，得到包含单倍体子囊孢子与酵母营养体细胞的第二混合体；对所述第二混合体进行水浴加热处理，杀死所述酵母营养体细胞，得到单倍体子囊孢子；将所述单倍体子囊孢子涂布在完全培养基上进行培养，获得单倍体酿酒酵母。2.根据权利要求1所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其特征在于，所述产孢培养基由半乳糖、KCl、醋酸钠、酵母膏以及琼脂粉组成。3.根据权利要求1所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其特征在于，将二倍体酿酒酵母菌体堆积在产孢培养基上进行培养的过程中，培养条件为20
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30℃恒温培养，培养时间为6
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8天。4.根据权利要求1所述从二倍体酿酒酵母中分离单倍体酿酒酵母的方法，其特征在于，采用蜗牛酶液对所述第一混合体...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾斌，黄慧，
申请(专利权)人：深圳技术大学，
类型：发明
国别省市：