利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法技术

本发明专利技术公开了利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法，属于海洋农业中贝类多倍体及性别检测技术领域。该方法包括以下步骤：(1)使用风味分析仪检测同一海域繁殖期不同倍性长牡蛎的挥发性风味有机物，得到呈味物质指纹图谱；(2)将待检长牡蛎的呈味物质指纹图谱与前面得到的不同倍性长牡蛎呈味物质指纹图谱进行相似度比对，确定倍性；(3)计算待检长牡蛎的丙酸乙酯峰体积和3

【技术实现步骤摘要】
利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法


[0001]本专利技术涉及一种鉴别长牡蛎倍性和性别的方法，具体涉及一种利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法，属于海洋农业中贝类多倍体及性别检测


技术介绍

[0002]牡蛎营养价值丰富，是健康饮食的必备水产品，其肉质十分鲜美，含有丰富的蛋白质和脂肪酸等物质，所以深受广大消费者的欢迎。由于二倍体牡蛎的发育情况会受到季节的限制，出现生长慢、死亡率高等问题，而三倍体牡蛎因其没有可育性，从而具有生物学和经济优势，肉质以及口感都优于二倍体，所以三倍体牡蛎的养殖面积逐年增加，成为牡蛎养殖的热点之一。通过四倍体牡蛎精子与二倍体牡蛎卵子杂交可以产生稳定可靠的三倍体牡蛎，为三倍体牡蛎规模化生产提供了保证。而当前限制三倍体牡蛎苗种生产的主要因素是四倍体牡蛎的供应，如若提供的四倍体牡蛎倍性不是真正的四倍体，则生产出的三倍体苗种中会掺杂着大量的二倍体或非整倍体牡蛎，影响了真正三倍体苗种的纯度和养殖效果。
[0003]牡蛎倍性的鉴别方法主要有染色体计数法、血红细胞核体积测量法、流式细胞仪鉴定、测微荧光剂、紫外分光光度法鉴定等。染色体计数法需要较长的时间，而血红细胞核体积测量法不够准确，后三种方法则需要DNA染色剂和昂贵的仪器支持，且化学试剂对人体和环境有危害，需对废液进行特殊处理。上述方法均需较强的操作技能，分析过程复杂、周期长、费用高。
[0004]牡蛎性别的鉴定方法主要是使用显微镜观察法和牙签刮取性腺于海水中观察。
[0005]目前，还未有能够同时鉴定长牡蛎倍性以及性别的方法。因此，如何快速实现对长牡蛎倍性以及性别的同时鉴定，具有非常重要的现实意义和研究价值。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法，该方法可以实现对同一海域繁殖期长牡蛎的倍性和性别状态的快速鉴定，样品无需复杂的前处理，检测速度快，准确度高，检测成本低，无需化学试剂、对环境无污染。
[0007]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
[0008]一种利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法，包括以下步骤：
[0009]Step1：使用风味分析仪检测同一海域繁殖期的二倍体、三倍体和四倍体长牡蛎的挥发性风味有机物，得到不同倍性长牡蛎挥发性风味有机物的气相离子迁移谱和呈味物质指纹图谱；
[0010]Step2：使用风味分析仪检测待检长牡蛎的挥发性风味有机物，得到待检长牡蛎挥发性风味有机物的气相离子迁移谱和呈味物质指纹图谱，并与Step1得到的不同倍性长牡蛎呈味物质指纹图谱进行相似度比对，确定待检长牡蛎的倍性；
[0011]Step3：利用Step2得到的待检长牡蛎呈味物质指纹图谱计算待检长牡蛎的丙酸乙
酯峰体积和3
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辛酮峰体积，对于二倍体个体，若丙酸乙酯峰体积≥1500且3
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辛酮峰体积≤800，则待检长牡蛎的性别为雌性，否则，待检长牡蛎的性别为雄性；对于四倍体个体，若丙酸乙酯峰体积≥3300且3
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辛酮峰体积≤1500，则待检长牡蛎的性别为雌性，否则，待检长牡蛎的性别为雄性。
[0012]优选的，在Step1和Step2中，使用风味分析仪检测长牡蛎的挥发性风味有机物的方法具体如下：
[0013](1)分别称取不同倍性以及不同性别的长牡蛎性腺组织匀浆液1～2g，置于20mL顶空瓶中；
[0014](2)设定风味分析仪的分析条件为：分析时间30min，柱温60℃，IMS温度45℃，载气为高纯N2，进样体积700μl，孵育时间40min，孵育温度40℃，进样针温度105℃，孵化转速500rpm；
[0015](3)设定气相色谱条件为：00:00开始时，载气150ml/min，漂移气2ml/min；02:00时，载气150ml/min，漂移气2ml/min；10:00时，载气150ml/min，漂移气10ml/min；20:00时，载气150ml/min，漂移气100ml/min；30:00时，载气150ml/min，漂移气100ml/min。
[0016]优选的，在步骤(1)中，长牡蛎性腺组织匀浆液的获得方法具体如下：
[0017]打开长牡蛎外壳，用海水冲洗掉遗留在长牡蛎表面的碎壳，取1/5～1/3重量的性腺组织匀浆。
[0018]本专利技术的有益之处在于：
[0019](1)本专利技术提供了一种快速鉴别长牡蛎倍性以及性别的方法，填补了气相色谱
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离子迁移谱联用(GC
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IMS)技术在鉴定长牡蛎倍性和性别状态的研究空白，拓宽了鉴定长牡蛎倍性和性别的方法；
[0020](2)本专利技术提供的方法能够同时鉴定繁殖期长牡蛎的倍性以及性别，通过对比不同倍性和性别长牡蛎样品挥发性有机物质的差异，可实现对长牡蛎倍性和性别状态的快速鉴定，样品无需复杂的预处理，检测速度快，准确度高，检测成本低，无需化学试剂、对环境无污染。
附图说明
[0021]图1是不同倍性长牡蛎的挥发性风味物质的气相离子迁移谱图；
[0022]图2是不同倍性长牡蛎的挥发性风味物质的呈味物质指纹图谱；
[0023]图3是不同倍性长牡蛎的挥发性风味物质的主成分分析图；
[0024]图4是试验产品烟台崆峒岛海域养殖的繁殖期长牡蛎的挥发性风味物质的指纹图谱。
具体实施方式
[0025]以下结合附图和具体实施例对本专利技术作具体的介绍。
[0026]一、样品前处理
[0027]8月份，在烟台崆峒岛海域采集一定数量的二倍体、三倍体和四倍体长牡蛎。
[0028]将新鲜长牡蛎去壳并清洗干净，保证没有牡蛎壳碎片，然后通过流式细胞技术和显微镜观察法对所有长牡蛎倍性和性别进行鉴别。
[0029]鉴别完成后，取1/3重量的性腺组织匀浆，并将匀浆液装入自封袋后放置在
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80℃冰箱中冷冻保存直至分析。
[0030]二、利用呈味物质指纹图谱鉴别长牡蛎倍性和性别
[0031]1、建立同一海域繁殖期二倍体、三倍体和四倍体长牡蛎的挥发性风味有机物数据库
[0032]使用风味分析仪检测同一海域繁殖期二倍体、三倍体和四倍体长牡蛎的挥发性风味物质，检测方法具体为：
[0033](1)分别称取各组样本1～2g，置于20mL顶空瓶中；
[0034](2)设定风味分析仪的分析条件为：分析时间30min，柱温60℃，IMS温度45℃，载气为高纯N2；进样体积700μl，孵育时间40min，孵育温度40℃，进样针温度105℃，孵化转速500rpm；
[0035](3)设定气相色谱条件为：00:00开始时，载气150ml/min，漂移气2ml/min；02:00时，载气150ml/min，漂移气2ml/min；10:00时，载气150ml/min，漂移气10ml/min；20:00时，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：使用风味分析仪检测同一海域繁殖期的二倍体、三倍体和四倍体长牡蛎的挥发性风味有机物，得到不同倍性长牡蛎挥发性风味有机物的气相离子迁移谱和呈味物质指纹图谱；Step2：使用风味分析仪检测待检长牡蛎的挥发性风味有机物，得到待检长牡蛎挥发性风味有机物的气相离子迁移谱和呈味物质指纹图谱，并与Step1得到的不同倍性长牡蛎呈味物质指纹图谱进行相似度比对，确定待检长牡蛎的倍性；Step3：利用Step2得到的待检长牡蛎呈味物质指纹图谱计算待检长牡蛎的丙酸乙酯峰体积和3
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辛酮峰体积，对于二倍体个体，若丙酸乙酯峰体积≥1500且3
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辛酮峰体积≤800，则待检长牡蛎的性别为雌性，否则，待检长牡蛎的性别为雄性；对于四倍体个体，若丙酸乙酯峰体积≥3300且3
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辛酮峰体积≤1500，则待检长牡蛎的性别为雌性，否则，待检长牡蛎的性别为雄性。2.根据权利要求1所述的利用呈味物质指纹图谱快速鉴别长牡蛎倍性和性别的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王卫军，付睛睛，崔明仙，孙由美，杨建敏，孙国华，冯艳微，徐晓辉，李赞，
申请(专利权)人：烟台海育海洋科技有限公司，
类型：发明
国别省市：