一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法，采用高效液相色谱法对供试品溶液和至少3个具有不同已知浓度的混合标准品溶液进行梯度洗脱，根据外标峰面积法进行补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B和芒果苷的定量检测，其中，高效液相色谱法的色谱条件优化了色谱柱的规格以及流动相种类以及梯度洗脱程序。本发明专利技术方法可以有效克服现有技术中丹知青娥片中指标成分含量检测周期长、效率低的缺陷，本发明专利技术只需一次洗脱即可实现补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B、芒果苷四种指标成分同时检测，检测周期短、效率高，检测准确度高。检测准确度高。检测准确度高。

【技术实现步骤摘要】
一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法


[0001]本专利技术涉及中药制备领域，具体涉及一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法。

技术介绍

[0002]丹知青娥片是在《太平惠民和剂局方》中的“青娥丸”(以下简称“青娥方”)的基础上，根据临床实践经验，从“补阳法”入手，保留“青娥方”中补肾助阳的盐杜仲等，增加活血化瘀的丹参和清热除烦的知母，即以盐杜仲、丹参、知母等中药饮片经科学方法提取精制而成的纯中药制剂，其中，各组分的重量份为：盐补骨脂1份、丹参2份、盐杜仲2份、知母1份。
[0003]丹知青娥片为含多种有效成分的复方制剂，其主要指标成分有补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B、芒果苷及绿原酸等；具有补益肝肾、清热除烦的功能，用于肝肾亏虚之围绝经期、绝经期综合征者，症见潮热、多汗、烦躁、心悸、乏力，腰膝酸软；或见畏寒肢冷，舌质淡红或偏红或有瘀斑，苔薄白，脉沉细。
[0004]丹知青娥片为中药复方制剂，成分复杂、有效指标成分较多；丹知青娥片的现有含量测定方法均为各指标成分单独测定，例如中国专利文献CN107121502A中公开的一种测定丹知青娥片中指标成分含量的方法中，补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B、芒果苷等成分均是分别进行测量。各成分单独测定导致检测周期较长、效率低下，不利于丹知青娥片生产。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中丹知青娥片中指标成分含量检测周期长、效率低的缺陷，从而提供只需一次洗脱即可实现补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B、芒果苷四种指标成分同时检测的一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法。
[0006]一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法，采用高效液相色谱法对供试品溶液和至少3个具有不同已知浓度的混合标准品溶液进行梯度洗脱，根据外标峰面积法进行补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B和芒果苷的定量检测，其中，高效液相色谱法的色谱条件为：
[0007]色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，所述色谱柱的柱长为150mm～250mm、内径为4.6mm、粒度为3μm～5μm；以甲醇为流动相A，以0.5％～2％的甲酸水溶液为流动相B；
[0008]检测波长为254nm；
[0009]梯度洗脱程序为：
[0010]时间/min流动相A/％流动相B/％0min～12min29％
→
48％71％
→
52％12min～24min48％
→
80％52％
→
20％
[0011]供试品溶液的制备方法为：取质量为M1的供试品，精密称定，置容量瓶中，加适量溶剂，超声处理，放冷，加溶剂定容至体积V1，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液；其中，M1与V1的比为0.01g/mL～0.05g/mL；
[0012]混合标准品溶液中，补骨脂素和异补骨脂素浓度范围为12μg/mL～50μg/mL，丹酚
酸B浓度范围为48μg/mL～195μg/mL，芒果苷浓度范围为11μg/mL～48μg/mL。
[0013]具体的，所述混合标准品溶液中各组分的浓度为每1ml含芒果苷25ug、丹酚酸B 100ug、补骨脂素25ug、异补骨脂素25ug；所述外标峰面积法中采用50％
‑
200％浓度的混合标准品溶液进行线性绘制。具体的，当混合标准品溶液为50％浓度时，代表每1ml含芒果苷12.5ug、丹酚酸B 50ug、补骨脂素12.5ug、异补骨脂素12.5ug；当混合标准品溶液为200％浓度时，每1ml含芒果苷50ug、丹酚酸B 200ug、补骨脂素50ug、异补骨脂素50ug。
[0014]所述供试品溶液的制备中，所述溶剂为浓度50％～100％甲醇或50％～100％乙腈。
[0015]所述供试品溶液的制备中，所述溶剂为浓度60％的甲醇。
[0016]所述滤过的方式为：离心或0.45μm滤膜过滤。
[0017]所述超声处理时间为10～30min；超声功率为150W。
[0018]所述M1与V1的比为0.01g/mL
‑
0.03g/mL。
[0019]所述梯度洗脱程序可替换为：
[0020][0021][0022]所述高效液相色谱法的色谱条件中，柱温为35℃
±
2℃，流速为1.0ml/min
±
0.2ml/min，进样量为10μl。
[0023]供试品中芒果苷含量为≥0.45mg/0.6g，丹酚酸B含量为≥5.4mg/0.6g，补骨脂素和异补骨脂素总含量为0.63mg/0.6g～3.5mg/0.6g。
[0024]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0025]1、本专利技术提供的一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法，通过色谱条件以及供试品溶液的优化，只需进行一次梯度洗脱即可至少有效同时实现补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B和芒果苷四种指标成分的含量测定，检测周期短、快速、效率高，且该方法操作简便、专属性强，具有优异的稳定性、重现性和准确度，有利于丹知青娥片的含量测定及质量控制；
[0026]2、本专利技术提供的一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法中，进一步优化供试品溶液中溶剂的种类，采用特定的体积浓度为60％的甲醇溶液可以更有效地溶解供试品中指标成分，进而使测量得到的指标成分含量更高，各个指标成分的含量的RSD小于2％，检测结果更加稳定且准确；
[0027]3、本专利技术采用混合标准品溶液进行标准曲线绘制，相比单独采用各个指标成分进
行标准曲线绘制而言，可以更有效地抑制丹酚酸B在溶液的降解，提高检测准确性；
[0028]4、本专利技术采用滤膜过滤时，0.45μm滤膜相比孔径更小的0.22μm滤膜，其对丹酚酸B的吸附作用更小，相比孔径更大的0.80μm滤膜，能更好的滤除水提鞣质，保证色谱柱柱效，因此，本专利技术中优选采用孔径不低于0.45μm的滤膜过滤，更优选为0.45μm滤膜过滤。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]图1是本专利技术中供试品溶液的指纹图谱；
[0031]图2是本专利技术中混合标准品溶液的指纹图谱；
[0032]图3是本专利技术中芒果苷浓度和峰面积线性关系图；
[0033]图4是本专利技术中丹酚酸B浓度和峰面积线性关系图；
[0034]图5是本专利技术中补骨脂素浓度和峰面积线性关系图；
[0035]图6是本专利技术异补骨脂素浓度和峰面积线性关系图。
具体实施方式
[0036]实施例1
[0037]一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法，包括：
[0038](1)供试品的制备：取去除薄膜衣后的丹知青本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丹知青娥片中指标成分的含量测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对供试品溶液和至少3个具有不同已知浓度的混合标准品溶液进行梯度洗脱，根据外标峰面积法进行补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸B和芒果苷的定量检测，其中，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，所述色谱柱的柱长为150mm～250mm、内径为4.6mm、粒度为3μm～5μm；以甲醇为流动相A，以0.5％～2％的甲酸水溶液为流动相B；检测波长为254nm；梯度洗脱程序为：时间/min流动相A/％流动相B/％0min～12min29％
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48％71％
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52％12min～24min48％
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80％52％
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20％供试品溶液的制备方法为：取质量为M1的供试品，精密称定，置容量瓶中，加适量溶剂，超声处理，放冷，加溶剂定容至体积V1，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液；其中，M1与V1的比为0.01g/mL～0.05g/mL；混合标准品溶液中，补骨脂素和异补骨脂素浓度范围为12μg/mL～50μg/mL，丹酚酸B浓度范围为48μg/mL～195μg/mL，芒果苷浓度范围为11μg/mL～48μg/mL。2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述混合标准品溶液中各组分的浓度为每1ml含芒果苷25μg、丹酚酸B 100μg、补骨脂素25μg、异补骨脂素25μg；所述外标峰面积法中采用50％～200％浓度的混合标准品溶液进行线性绘制。3.根据权利要求1或2所述的含量测定方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备中，所述溶剂为浓度50％～100％甲醇或50％～100％乙腈。4.根据权利要求3所述的含量测定方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备中，所述溶剂为浓度60％的甲醇。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：何健，唐小东，王勇，王亮，翟付明，马鹏岗，孙楠，罗川，张亮，
申请(专利权)人：华润三九医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：