用于鉴别肠球菌属内四个种的特异性分子靶标及其快速检测方法技术

本发明专利技术公开了用于鉴别肠球菌属内四个种的特异性分子靶标及其快速检测方法，分子靶标为：碱基序列SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
用于鉴别肠球菌属内四个种的特异性分子靶标及其快速检测方法


[0001]本专利技术属于属于微生物检验
，具体涉及用于鉴别肠球菌属内四个种的特异性分子靶标及其快速检测方法。

技术介绍

[0002]肠球菌属(Enterococcus spp.)为革兰氏阳性球菌，外形呈圆形或卵圆形、单个或短链状分布，是人和动物肠道的正常菌群。目前，肠球菌属主要包括粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、鸟肠球菌(Enterococcus avium)、酪黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)等19个种，在临床样本分离株中粪肠球菌所占比例最高，其次为屎肠球菌(李金钟,肠球菌分类与鉴定新进展.临床检验杂志，2006,24(5),228
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230)。作为人和动物肠道的正常菌群，一般情况下肠球菌不会引起疾病，但在机体免疫力下降时，它就会成为条件致病菌引起多种感染，如泌尿系统感染、伤口感染、脑膜炎、心内膜炎等，严重时可危及生命(Maekawa,T.；Fukaya,R.；Takamatsu,S.；Itoyama,S.；Miyoshi,E.,Possible involvement of Enterococcus infection in the pathogenesis of chronic pancreatitis and cancer.Biochemical and Biophysical Research Communications 2018,506,962
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969)。有研究表明，在2011
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2014年期间，肠球菌是造成院内感染的第二大病原菌，占到总人数的14％，其检出率仅次于大肠杆菌，超过铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌(Lindsey M.W.；Amy K.W.；Brandi L.；Margaret A.D.；Jean P.；Alexander J.K.；Jonathan R.E.；Dawn M.S.,Antimicrobial
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resistant pathogens associated with healthcare
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associated infections:summary of data reported to the national healthcare safety network at the centers for disease control and prevention,2011
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2014.Infect Control Hosp Epidemiol2016,37,1288
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1301.)。其中粪肠球菌感染比例最高，约占80
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90％，屎肠球菌约占10％，鸟肠球菌、鸡肠球菌、棉子糖肠球菌等也可引起感染，但是感染几率相对较低(Vinodkumar,C.S.；Srinivasa,H.；Basavarajappa,K.G.；Geethalakshmi S.；Bandekar,N.,Isolation of bacteriophages to multi
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drug resistant Enterococci obtained from diabetic foot:a novel antimicrobial agent waiting in the shelf？Indian Journal of Pathology&Microbiology 2011,54(1),90
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95)。肠球菌的广泛分布和较强的环境适应能力可能是其能造成临床感染的重要原因。
[0003]肠球菌的检测方法主要有传统的生理生化反应、API生化鉴定条、微生物自动鉴定仪等，这些方法存在不同的优缺点，如：传统的生理生化反应结果相对准确，但其操作步骤相对繁琐，有时需要补加试验进行鉴别，耗时长；微生物自动鉴定仪操作相对简便，但价格较昂贵。以PCR为主的分子生物学检测方法以其快速、准确、简便的特点逐渐成为取代传统检测方法最具潜力的检测技术之一，而靶标序列的特异性是PCR检测技术的关键。因此，系统性的挖掘特异性新靶标，建立准确、快速的PCR检测方法，对于肠球菌的临床检测及流行
传播规律调查研究具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供用于鉴别肠球菌属内4个种，即酪黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和希拉肠球菌(Enterococcus hirae)的特异性新分子靶标及相应的PCR检测方法。本专利技术的检测方法具有检测时间短、检测成本低、操作简单、特异性强的优点，无需经过生化鉴定即可检测到肠球菌属的种水平，更加具有实用性。
[0005]一种鉴别酪黄肠球菌的特异性分子靶标，包括碱基序列如SEQ ID NO.1
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7中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。
[0006]一种鉴别酪粪肠球菌的特异性分子靶标，包括碱基序列如SEQ ID NO.8
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27中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。
[0007]一种鉴别屎肠球菌的特异性分子靶标，包括碱基序列如SEQ ID NO.28
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32中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。
[0008]一种鉴别希拉肠球菌的特异性分子靶标，包括碱基序列如SEQ ID NO.33
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58中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。
[0009]所述的同源序列是指序列一致性达到80％以上，优选90％以上，再优选95％以上，最优选100％。
[0010]一种鉴别酪黄肠球菌的引物组，其中包括有碱基序列如SEQ ID NO.nF和SEQ ID NO.nR所示的引物对；n＝1
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7之间的任意一个或多个整数。
[0011]一种鉴别酪粪肠球菌的引物组，其中包括有碱基序列如SEQ ID NO.nF和SEQ ID NO.nR所示的引物对；n＝8
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27之间的任意一个或多个整数。
[0012]一种鉴别屎肠球菌的引物组，其中包括有碱基序列如SEQ ID NO.nF和SEQ ID NO.nR所示的引物对；n＝28
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32之间的任意一个或多个整数。
[0013]一种鉴别希拉肠球菌的引物组，其中包括有碱基序列如SEQ ID NO.nF和SEQ ID NO.nR所示的引物对；n＝33
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58之间的任意一个或多个整数。
[0014]一种鉴别酪黄肠球菌、酪粪肠球菌、屎肠球菌或者希拉肠球菌的方法，其分别通过鉴别鉴别酪黄肠球菌、酪粪肠球菌、屎肠球菌或者希拉肠球菌的引物组进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴别酪黄肠球菌的特异性分子靶标，其特征在于，包括碱基序列如SEQ ID NO.1
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7中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。2.一种鉴别酪粪肠球菌的特异性分子靶标，其特征在于，包括碱基序列如SEQ ID NO.8
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27中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。3.一种鉴别屎肠球菌的特异性分子靶标，其特征在于，包括碱基序列如SEQ ID NO.28
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32中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。4.一种鉴别希拉肠球菌的特异性分子靶标，其特征在于，包括碱基序列如SEQ ID NO.33
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58中任意一个或多个所示的核苷酸序列，以及其同源序列。5.根据权利要求1
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4任一项所述的特异性分子靶标，其特征在于，所述的同源序列是指序列一致性达到80％以上，优选90％以上，再优选95％以上，最优选100％。6.一种鉴别酪黄肠球菌的引物组，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：相欣然，陆佳冉，徐晓炜，刘婷婷，刁恩杰，宋虎卫，钱时权，梁肖娜，
申请(专利权)人：淮阴师范学院，
类型：发明
国别省市：