一种用于结核病抗体检测的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开一种用于结核病抗体检测的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒内设有酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶、反应槽；所述反应槽内放置有结核膜条，所述结核抗原膜条设有质控区和检测区，所述质控区包被有抗人IgG抗体的质控线。本发明专利技术试剂盒操作简单、快速、易自动化，可半定量检测人血清中ESAT－6抗原等20种结核病相关抗原的特异性抗体，实现20项联合检测。实现20项联合检测。实现20项联合检测。

【技术实现步骤摘要】
一种用于结核病抗体检测的试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及及生物医学技术，特别涉及一种用于结核病抗体检测的试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]根据WHO的报告，全世界尚有约1/3的结核病患者未得到及时发现和治疗，传统的抗酸杆菌涂片和结核分枝杆菌分离培养是结核病诊断的“金标准”，但由于涂片镜检敏感性低，结核菌分离培养耗时长等方法学的局限性，使结核病很难早期确诊，不能满足临床需要。
[0003]目前一般采用的检测血清结核抗体的方法有ELISA法和胶体金法，但目前市场上用于结核病抗体检测的试剂盒都是针对单一项或者少数项结核抗体进行检测，检测的范围太小，容易造成漏检的现象。
[0004]因此，对于结核病抗体检测，迫切需要一种早期、快速、准确的用于结核病抗体检测的试剂盒及其检测方法。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种用于结核病抗体检测的试剂盒及其检测方法，该用于结核病抗体检测的试剂盒中的结核抗原膜条包被有20种结核抗原，可实现结核抗原20项联合检测，检测快速、准确且易于自动化。
[0006]1、为了实现上述目的，本专利技术提供一种一种用于结核病抗体检测的试剂盒，所述试剂盒内设有酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶、反应槽；
[0007]所述反应槽内放置有结核膜条，所述结核抗原膜条设有质控区和检测区，所述质控区包被有抗人IgG抗体的质控线；所述检测区包被有ESAT－6抗原的检测线、CFP－10抗原的检测线、clpB抗原的检测线、metE抗原的检测线、can抗原的检测线、ideR抗原的检测线、Rv0232抗原的检测线、nrdB抗原的检测线、65Kd antigen抗原的检测线、HBHA抗原的检测线、Rv0508抗原的检测线、Rv0678抗原的检测线、Rv0792c抗原的检测线、Rv0793抗原的检测线、cysK2抗原的检测线、accD2抗原的检测线、Rv0976c抗原的检测线、mprA抗原的检测线、PE10抗原的检测线、trxB1抗原的检测线。
[0008]优选的，所述反应槽至少设有一个凹槽，每个凹槽内用于放置不同样本的结核膜条；所述酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶12、显色底物试剂瓶13、浓缩洗涤液试剂瓶14呈阵列排布，且旁边设有所述的反应槽。
[0009]优选的，所述检测区的各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。
[0010]优选的，所述结核抗原膜条沿长度方向依次设有所述的抗人IgG抗体的质控线、ESAT－6抗原的检测线、CFP－10抗原的检测线、clpB抗原的检测线、metE抗原的检测线、can抗原的检测线、ideR抗原的检测线、包被Rv0232抗原的检测线、包被nrdB抗原的检测线、包
被65Kd antigen抗原的检测线、HBHA抗原的检测线、Rv0508抗原的检测线、Rv0678抗原的检测线、Rv0792c抗原的检测线、Rv0793抗原的检测线、cysK2抗原的检测线、accD2抗原的检测线、Rv0976c抗原的检测线、mprA抗原的检测线、PE10抗原的检测线、trxB1抗原的检测线，且间隔均设为2.0mm。
[0011]优选的，所述结核抗原膜条的长度为75mm－90mm，宽度为2.5mm－5.0mm；所述结核抗原膜条的孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。
[0012]优选的，所述抗人IgG抗体的质控线与所述的各检测线的宽度均为0.5mm－0.7mm；所述结核抗原膜条沿其长度设有相对设置的第一端和第二端，所述抗人IgG抗体的质控线与所述第一端的距离均为10mm－12mm。
[0013]上述方案可实现半定量人血清中的ESAT－6抗原、CFP－10抗原、clpB抗原、metE抗原、can抗原、ideR抗原、Rv0232抗原、nrdB抗原、65Kd antigen抗原、HBHA抗原、Rv0508抗原、Rv0678抗原、Rv0792c抗原、Rv0793抗原、cysK2抗原、accD2抗原、Rv0976c抗原、mprA抗原、PE10抗原、trxB1抗原等结核病相关的特异性IgG抗体或IgM抗体，实现结合病20项联合检测、检测全面、检测快速且自动化的效果。
[0014]本专利技术还提供一种用于结核病抗体检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0015](1)检测前准备：将用于结核病抗体检测的试剂盒和待测血清样本平衡至室温，将已平衡至室温的待测血清样本按预设的稀释比例用样本稀释液试剂瓶中的稀释液进行稀释，获得已稀释好的待测稀释样本；将结核抗原膜条放入反应槽中，将浓缩洗涤液试剂瓶中的洗涤液按照预设的比例稀释，获得工作洗涤液；
[0016](2)孵育待测稀释样本：将待测稀释样本加入到反应槽中，使待测稀释样本与结核抗原膜条上包被的ESAT－6抗原、CFP－10抗原、clpB抗原、metE抗原、can抗原、ideR抗原、Rv0232抗原、nrdB抗原、65Kd antigen抗原、HBHA抗原、Rv0508抗原、Rv0678抗原、Rv0792c抗原、Rv0793抗原、cysK2抗原、accD2抗原、Rv0976c抗原、mprA抗原、PE10抗原、trxB1抗原于37℃恒温孵育反应20－30min，获得检测膜条A；
[0017](3)洗涤检测膜条A：倒掉反应槽内的待测稀释样本，加入工作洗涤液洗涤检测膜条A 1－3min后倒掉，反复洗涤3次，获得检测膜条B；
[0018](4)孵育检测膜条B：将酶结合物试剂瓶中的酶结合物加入反应槽内，使酶结合物与检测膜条B于37℃恒温孵育反应10－20min，获得检测膜条C；
[0019](5)洗涤检测膜条C：倒掉反应槽内的酶结合物，加入工作洗涤液洗涤检测膜条C 1－3min后倒掉，反复洗涤3次，获得检测膜条D；
[0020](6)显色检测膜条D：将显色底物试剂瓶中的显色底物加入反应槽内，使显色底物与检测膜条D于37℃恒温孵育反应10－15min，获得检测膜条E；
[0021](7)洗涤检测膜条E：倒掉反应槽内的显色底物，加入工作洗涤液洗涤检测膜条E 1－3min后倒掉，反复洗涤3次，获得检测膜条F。
[0022]优选的，所述步骤(1)中的样本稀释液试剂瓶中的稀释液选自质量浓度为3％的牛血清白蛋白的Tris缓冲液，该Tris缓冲液的配制过程为：称取2.42gTris、8g氯化钠至100ml去离子水中溶解，用HCl调节pH至7.4
±
0.1，定容至1000ml；所述待测血清样本按预设的稀释比例用样本稀释液试剂瓶中的稀释液进行稀释，其中待测血清样本与稀释液的预设的比
例为1：31。
[0023]优选的，所述步骤(1)中的工作洗涤液是通过浓缩洗涤液试剂瓶中的浓缩洗涤液与蒸馏水或去离子水，按1：20比例稀释而成，所述浓缩洗涤液试剂瓶中的浓缩洗涤液选自20倍浓缩的Tris缓冲液。
[0024]优选的，所述步骤(4)中的酶结合物试剂瓶中的酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于结核病抗体检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内设有酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶、反应槽；所述反应槽内放置有结核膜条，所述结核抗原膜条设有质控区和检测区，所述质控区包被有抗人IgG抗体的质控线；所述检测区包被有ESAT－6抗原的检测线、CFP－10抗原的检测线、clpB抗原的检测线、metE抗原的检测线、can抗原的检测线、ideR抗原的检测线、Rv0232抗原的检测线、nrdB抗原的检测线、65Kd antigen抗原的检测线、HBHA抗原的检测线、Rv0508抗原的检测线、Rv0678抗原的检测线、Rv0792c抗原的检测线、Rv0793抗原的检测线、cysK2抗原的检测线、accD2抗原的检测线、Rv0976c抗原的检测线、mprA抗原的检测线、PE10抗原的检测线、trxB1抗原的检测线。2.根据权利要求1所述的用于结核病抗体检测的试剂盒，其特征在于，所述反应槽至少设有一个凹槽，每个凹槽内用于放置不同样本的结核膜条；所述酶结合物试剂瓶、样本稀释液试剂瓶、显色底物试剂瓶、浓缩洗涤液试剂瓶呈阵列排布，且旁边设有所述的反应槽。3.根据权利要求1所述的用于结核病抗体检测的试剂盒，其特征在于，所述检测区的各检测线相互平行且各相邻检测线之间的间隔等宽。4.根据权利要求1所述的用于结核病抗体检测的试剂盒，其特征在于，所述结核抗原膜条沿长度方向依次设有所述的抗人IgG抗体的质控线、ESAT－6抗原的检测线、CFP－10抗原的检测线、clpB抗原的检测线、metE抗原的检测线、can抗原的检测线、ideR抗原的检测线、包被Rv0232抗原的检测线、包被nrdB抗原的检测线、包被65Kd antigen抗原的检测线、HBHA抗原的检测线、Rv0508抗原的检测线、Rv0678抗原的检测线、Rv0792c抗原的检测线、Rv0793抗原的检测线、cysK2抗原的检测线、accD2抗原的检测线、Rv0976c抗原的检测线、mprA抗原的检测线、PE10抗原的检测线、trxB1抗原的检测线，且间隔均设为2.0mm。5.根据权利要求1所述的用于结核病抗体检测的试剂盒，其特征在于，所述结核抗原膜条的长度为75mm－90mm，宽度为2.5mm－5.0mm；所述结核抗原膜条的孔径大小为0.22μm的多孔硝酸纤维素膜。6.根据权利要求1所述的用于结核病抗体检测的试剂盒，其特征在于，所述抗人IgG抗体的质控线与所述的各检测线的宽度均为0.5mm－0.7mm；所述结核抗原膜条沿其长度设有相对设置的第一端和第二端，所述抗人IgG抗体的质控线与所述第一端的距离均为10mm－12mm。7.根据权利要求1－9任一项所述的用于结核病抗体检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)检测前准备：将用于结核病抗体检测的试剂盒和待测血清样本...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄桂智，何太皓，张欣，刘姿彤，
申请(专利权)人：深圳市博卡生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：