一种口炎清颗粒的质量控制方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种口炎清颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：制备混合对照品溶液；制备口炎清颗粒甲醇溶液作为供试品溶液；采用高效液相色谱法分析上述对照品溶液和供试品溶液，得到口炎清颗粒高效液相色谱指纹图谱；比较并根据对照品溶液的色谱图和供试品溶液的指纹图谱监控口炎清颗粒的质量。本发明专利技术还公开了所述质量控制方法的应用，是应用于鉴别口炎清颗粒。本发明专利技术采用高效液相色谱法构建了口炎清颗粒的指纹图谱，通过建立的标准指纹图谱可以监控半成品与成品生产工艺过程的稳定性。本发明专利技术的方法有效的避免了产品伪造，保证该品种的正常生产、流通秩序，实用性突出。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种口炎清颗粒的质量控制方法及应用，具体是一种通过构建 指紋图谱的口炎清颗粒的质量控制方法及应用，属于药物分析
技术背景以"君、臣、佐、使"相互制约和协调的复方制剂，强调从整体上发挥作 用，多半不是针对某个靶点，也不是若干成分的简单加合，仅靠单一成分的检 测降低了鉴别的准确和专属性，不能代表中药制剂的整体功效，不能反映其内 在质量，及不能解决伪品掺杂等问题。中药指紋图谱是一种综合的、可量化的 化学鉴定手段,可以鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量的均一性和稳 定性，体现了中药作用的整体性和模糊性。近年来，国外对草药产品的质量评 价大力提倡色镨指紋图谱。通过图谱主要特征峰的峰位，面积或比例，反映出 化学成分的种类及数量的特征性，有效地判别真伪，评价优劣。色谱指紋图谱 分析成为鉴别中药真实性及评价质量一致性和产品稳定性的可行的模式。口炎清颗粒具有清热养阴、解毒消肿的功效，用于阴虛火旺所致的口腔溃疡，为国家中药保护品种，保护品种号ZYB20720022230, ^旦目前口炎清颗 粒的质量标准不完善，缺乏全面有效的质量控制方法，容易被仿制。
技术实现思路
效可靠的口炎清颗粒的质量控制方法。本专利技术的另 一 目的是提供上述控制方法的应用。 本专利技术通过以下技术方案实现上述目的 一种口炎清颗粒的质量控制方法，包括以下步骤(1) 制备含绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、肉桂酸、甘草苷和甘草酸铵的 混合对照品溶液，各组分的浓度均为0.2mg/ml;制备口炎清颗粒甲醇溶液作为 供试品溶液；(2) 采用高效液相色谱法分析上述对照品溶液和供试品溶液，色语条件为进样量10 20jul;色i昝柱为ODS C18 ， 250mm x4.6mm， 5 jjm;流动相 为用曱酸或乙酸或磷酸或三氟乙酸调至pH为3.0水-乙腈，梯度洗脱；检测 波长254nm;得到口炎清颗粒高效液相色谱指紋图谱；所述梯度洗脱步骤为0~15分钟，流动相乙腈-水由2:98渐变为10:90; 15~120分钟，流动相乙腈-水由10:90渐变为41:59; 120~125分钟流动相乙 腈 - 水为41:59;(3 )根据对照品溶液的色语图和供试品溶液的指紋图谦监控口炎清颗粒 的质量。上述质量控制方法步骤(1 )所述制备口炎清颗粒甲醇溶液是取口炎清 颗粒，用甲醇或乙醇提取，滤过，提取液回收溶剂，残渣用水溶解后转移到固 相萃取柱，用水淋洗，弃去淋洗液，再用甲醇分次洗脱所述固相萃取柱，收集 洗脱液，回收甲醇，残渣再用曱醇溶解，制成供试品溶液。更具体地，该步骤 为取本品最小包装10袋，混匀研细，取约5 20g,精密称定，置具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇或乙醇25 100ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟， 放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续 滤液1 Oml,减压回收溶剂至干，残渣加水约5ml溶解，定量转移至固相萃取— 小柱(填料ODSC18，规格6ml，500mg),加水15ml分次淋洗，淋洗液弃去， 再用曱醇15ml分次洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂至干，残渣定量加入甲 醇2ml，使完全溶解，用0.45 um微孔滤膜滤过，作为成品供试品溶液。所述梯度洗脱的步骤也可用表1表示:表1 梯度洗脱表时间(分钟)乙腈(％)酸水溶液(％)0-152—1098 — 9015-12010 — 41卯—59120-1254159按照本专利技术的方法，通过对10批口炎清颗粒构建的高效液相色谱指紋图 谱并进行分析比较，找出其共有特征峰，标出各共有特征峰的保留时间Rt,得 到口炎清颗粒标准指紋图谱。其共有峰为23个，其保留时间Rt值分別为26min、 28 min、 29 min、 33 min、 37 min、 40 min、 49 min、 51 min、 52min、 57 min、59 min、 60min、 62min、 64min、 67 min、 71 min、 72 min、 77 min、 79min、 98min、 107min、 109min、 114min,其中Rt值为28min、 33min、 49min、 52min、 77min、 79 min、 114min的7个色谱峰经确证为绿原酸、咖啡酸、甘草苷、木 犀草苷、哈巴俄苷、肉桂酸、甘草酸铵。以上色谱峰构成了 口炎清颗粒的指紋 特征。本专利技术提供的质量方法能够应用于鉴别口炎清颗粒。 与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果口炎清颗粒原质量标准收载于2005年版《中华人民共和国药典》(一部) 中，鉴别项分别以甘草对照药材、金银花对照药材为对照，进行薄层鉴别；含量测定项采用高效液相色i普法测定金银花药材中的绿原酸的含量，没有 对其内在化学成分进行全面、系统的研究，检测指标单一，容易被仿制，故本 专利技术的方法建立了 口炎清颗粒的指紋图谱技术标准，通过指紋图谱中共有峰的 有无及特征，有效地全面监控半成品和成品的质量，监控生产工艺的稳定性， 保证其质量的稳定、均一、可控。本专利技术还具有方法先进、稳定性和重现性好、 可操作性等优点。本专利技术采用高效液相色谱法构建了 口炎清颗粒的指紋图谱，利用高效液相 色谱指紋特征可全面监控口炎清颗粒的质量，且通过建立的标准指紋图谦可以 监控半成品与成品生产工艺过程的稳定性。本专利技术提高了口炎清颗粒成品、半 成品的质量监控标准，有效的避免了产品伪造，保证该品种的正常生产、流通 秩序。 附图说明图1是本专利技术的口炎清颗粒标准指紋图谱，图中从左到右的箭头所指分别 是特征峰l至23。图2是混合对照品与口炎清颗粒指紋图谱对应的色谱图，图中峰号1、 2、 3、 4、 5、 6、 7依次指示为绿原酸、咖啡酸、甘草苷、木犀草苷、哈巴俄苷、 肉桂酸、甘草酸铵。图3是口炎清颗粒、缺山银花阴性、山银花药材对照色语图，图中从左到 右的箭头所指为口炎清颗粒指紋图谱中归属于山银花的色谱峰的峰号。图4是口炎清颗粒、缺玄参阴性、玄参药材对照色谱图，图中从左到右的 箭头所指为口炎清颗粒指紋图语中归属于玄参的色谱峰的峰号。5草阴性、甘草药材对照色语图，图中从左到右的箭 头所指为口炎清颗粒指紋图谱中归属于甘草的色谱峰的峰号。具体实施方式以下通过具体的实施例进一步说明本专利技术的技术方案。 实施例11仪器与试药1.1 仪器戴安Dionex公司高效液相色谱仪(ASI-100自动进样器、 ATH-585柱温箱、P680四元梯度泵、PDA-100检测器)；色谱柱Dikma PLATISIL ODS ( 250mmx4.6mm，5 jn m )。1.2试药10批成品及对应的半成品，均由广州白云山和记黄埔中药有 限公司提供。实验中液相色语所用试剂乙腈均为色谱纯，其余所用试剂均为分 析纯，水为超纯水。2.方法与结果2.1 供试品溶液的制备分别取本品10袋，研细，取约10g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入曱醇(或乙醇)50ml,密塞，称定重量，超声处理 (功率360W，频率35kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，或乙醇补足减失的 重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，减压回收溶剂至干，残渣加水约 5ml溶解，定量转移至固相萃取小柱(填料C18，规格6ml,500mg)，加水 15ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种口炎清颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：　（１）制备含绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、肉桂酸、甘草苷和甘草酸铵的混合对照品溶液，各组分的浓度均为０．２ｍｇ／ｍｌ；制备口炎清颗粒甲醇溶液作为供试品溶液；　（２）采用高效液相色谱法分析 上述对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：进样量１０～２０μｌ；色谱柱为ＯＤＳ　Ｃ↓［１８］，５μｍ；流动相为用甲酸或乙酸或磷酸或三氟乙酸调至ｐＨ为３．０的水－乙腈，梯度洗脱；检测波长：２５４ｎｍ；得到口炎清颗粒高效液相色谱指纹图谱；　 　所述梯度洗脱步骤为：０～１５分钟，流动相乙腈∶水由２∶９８渐变为１０∶９０；１５～１２０分钟，流动相乙腈∶水由１０∶９０渐变为４１∶５９；１２０～１２５分钟流动相乙腈∶水为４１∶５９；　（３）比较并根据对照品溶液的色谱图和供试品溶液 的指纹图谱监控口炎清颗粒的质量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏薇薇，李楚源，关倩怡，王德勤，彭维，林青，王永刚，黄琳，梁峰，肖晓丽，
申请(专利权)人：广州白云山和记黄埔中药有限公司，中山大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]