一种花粉扫描电镜样品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种花粉扫描电镜样品的制备方法，该方法包括以下步骤：取花粉放入玻璃皿中，将其置于红外线烤灯中心下15cm～25cm处干燥100min～150min，在干燥后的花粉样品表面溅射合金，通过扫描电镜显微观测其微观形态。本发明专利技术建立的方法引入了红外线烤灯，代替了机械繁琐的超临界干燥仪对样品进行干燥，省略了脱水与干燥步骤，节省了固定与脱水的时间。与此同时，对样品形貌变化影响较小，不会造成花粉样品的流失。粉样品的流失。粉样品的流失。

【技术实现步骤摘要】
一种花粉扫描电镜样品的制备方法


[0001]本专利技术涉及扫描电镜显微观测制样
，具体涉及一种花粉扫描电镜样品的制备方法。

技术介绍

[0002]花粉是植物遗传信息的携带者之一，是植物生长、遗传、变异的基础，不同类型的植物花粉会形成独特而稳定的形态特征，其固有的轮廓，纹饰，萌发孔数目等特征反映物种独特的生物信息，同一类群的植物花粉形态具有相似性。利用这些固有特征进行分类鉴定，具有十分重要的科学价值，可为今后植物的系统进化、分类及亲缘关系研究奠定理论基础。传统的花粉鉴定与定量分析非常费时，且鉴定种类的分辨率较低。在光学显微镜下，离散在沉积物中的花粉鉴定只能停留在属级水平，有些甚至只能到科级水平。而扫描电镜由于具有高分辨率、图像立体直观等优点，目前被广泛运用于植物孢子微观形态的观察，是研究花粉形态的重要工具。
[0003]在扫描电镜中，样品制备的优劣程度直接关系到电子显微图像的观察效果和对图像的正确解释，要求在粘台和喷金前对花粉样品进行脱水干燥处理，干燥是样品制备过程中的关键环节，干燥不当会直接影响到图像的清晰度与准确度，并造成电镜内物镜，电子枪等部件污染。通过查阅文献，常用的扫描电镜样品制备方法有常规生物电镜制备法、直接干燥制备法、导电双面胶带拉断法、新鲜材料直接喷金等。
[0004]常规生物电镜制备法也称为生物固定法，利用化学试剂将样品形态固定，经乙醇梯度脱水、干燥等制备过程，使样品具备扫描电镜样品观察条件，在电镜制备中最为常用，呈图效果佳但步骤繁琐、耗费时间；直接干燥制备法又称自然干燥法，将样品放置在干净的环境中自然晾干即可观察，操作简单，省去了固定脱水步骤，但样品易产生变形，常用于不易变形的样品；导电双面胶带拉断法即将样品粘于导电胶，用镊子轻轻夹住样品，向上拉，拉断的组织一部分粘在导电胶上，另一部分在解剖镜下使断裂面向上，粘贴在导电胶上。该方法可以观察到花粉内部，但是对操作人员的技术要求严格，制样困难。新鲜材料直接喷金操作简单、节约时间，但在样品制备过程中可能会影响花粉形态，对样品本身定形程度要求高。
[0005]扫描电镜样品的前处理，每一个环节都至关重要，除了生物固定外，还有干燥方式的选择，对样品的形态和干燥的结果都有一定的影响。常用的干燥方法有：CO2临界点干燥法、冷冻干燥法、直接干燥法等。CO2临界点干燥法，细节要求严苛，步骤繁琐，细小环节的操作不当有可能会对样品造成机械损伤导致干燥失败；冷冻干燥法利用低温使样品冷冻硬化，在高真空条件下直接升华去水，避免了表面张力对样品的损害，但可能对样品造成冷冻损伤。直接干燥法又称自然干燥法，将样品自然晾干即可观察，操作简单，但易使样品变形，干燥时间长。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中的上述不足，本专利技术的目的在于提供一种花粉扫描电镜样品的制备方法，以解决现有花粉扫描电镜样品在制备的过程中干燥时间长、样品易变形、流失的问题。
[0007]为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0008]提供一种花粉扫描电镜样品的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0009]取花粉放入玻璃皿中，将其置于红外线烤灯中心下15cm～25cm处干燥100min～150min，在干燥后的花粉样品表面溅射合金，通过扫描电镜显微观测其微观形态。
[0010]进一步地，该方法具体包括以下步骤：
[0011]步骤1、用镊子轻取花药，将花粉保留在雄蕊花药上避免花粉散开，便于粘台处理；将其放入玻璃皿中，做好标记；
[0012]步骤2、将放入花粉的玻璃皿置于近红外线烤灯中心下20cm处干燥90min，然后将玻璃皿移至边缘，利用边缘温度辅助花粉经辐射干燥后自身的热传递对样品进行干燥30min；
[0013]步骤3、取一张干净的称量纸，待干燥样品至外部无多余水分后，用镊子将花药取出，轻拍手腕，通过轻微震动将花粉均匀落在称量纸光面，再将粘有导电胶的样品台倒扣，均匀粘上花粉；
[0014]步骤4、将花粉样品台逐个放入离子溅射仪，在样品表面溅射合金60s；
[0015]步骤5、将花粉样品通过扫描电镜显微观测其微观形态，设置统一加速电压为5kv。
[0016]进一步地，红外线波谱范围为0.7μm～2.5μm。
[0017]本专利技术的有益效果为：
[0018]本专利技术建立的方法引入了红外线烤灯，代替了机械繁琐的超临界干燥仪对样品进行干燥，省略了脱水与干燥步骤，节省了固定与脱水的时间。与此同时，对样品形貌变化影响较小，不会造成花粉样品的流失。
附图说明
[0019]图1为花粉在远红外线辐射下的样品形态示意图；
[0020]图2为花粉在中红外线辐射下的样品形态示意图；
[0021]图3为花粉在近红外线辐射下的样品形态示意图；
[0022]图4为“台农一号”花粉在近红外线辐射下的样品形态示意图；
[0023]图5为“金煌杧”花粉在近红外线辐射下的样品形态示意图；
[0024]图6为“热品16号”花粉在近红外线辐射下的样品形态示意图。
具体实施方式
[0025]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0026]实施例
[0027]一种花粉扫描电镜样品的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0028]步骤1、用镊子轻取花药，将花粉保留在雄蕊花药上避免花粉散开，便于粘台处理；将其放入玻璃皿中，做好标记。
[0029]步骤2、将放入花粉的玻璃皿置于近红外线烤灯中心下20cm处干燥约90min，此时红外线烤灯中心位置可达45℃，短波红外线的穿透力更强，使花粉内部彻底升温。然后将玻璃皿移至边缘，利用边缘温度(约30
‑
40℃)辅助花粉经辐射干燥后自身的热传递对样品进行干燥，约30min。优选的，红外线波谱范围：0.7μm～2.5μm。
[0030]步骤3、取一张干净的称量纸，待干燥样品至外部无多余水分后，用镊子将花药取出，轻拍手腕，通过轻微震动将花粉均匀落在称量纸光面，再将粘有导电胶的样品台倒扣，均匀粘上花粉；
[0031]步骤4、将花粉样品台逐个放入离子溅射仪，在样品表面溅射合金60s；
[0032]步骤5、将花粉样品通过扫描电镜显微观测其微观形态，设置统一加速电压为5kv。
[0033]本专利技术建立了一种方便、快捷的花粉扫描电镜样品的制备方法，并应用于芒果花粉的扫描电镜观察。本实施例以芒果种质雄性花粉为材料，通过用红外辐射来制备干燥花粉样品，优化出干燥的波长范围、时间范围与距离范围。结果表明，将样品置于距红外线发生点下20cm处，利用近红外线波长范围(2.5μm～0.7μm)，对样品干燥120min整体成像效果最佳。该方法不仅能更准确展示花粉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花粉扫描电镜样品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取花粉放入玻璃皿中，将其置于红外线烤灯中心下15cm～25cm处干燥100min～150min，在干燥后的花粉样品表面溅射合金，通过扫描电镜显微观测其微观形态。2.根据权利要求1所述的花粉扫描电镜样品的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤1、用镊子轻取花药，将花粉保留在雄蕊花药上避免花粉散开，便于粘台处理；将其放入玻璃皿中，做好标记；步骤2、将放入花粉的玻璃皿置于近红外线烤灯中心下20cm处干燥90min，然后将玻璃皿移至边缘...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴晓鹏，张琼尹，许啸，翁良娜，徐志，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院分析测试中心，
类型：发明
国别省市：