确定是否存在中和病毒的抗体的方法和筛选化合物中和病毒能力的体外方法技术

本发明专利技术提供了一种用于从受试者获得的样品中确定是否存在病毒中和抗体的方法以及相应的试剂盒。本发明专利技术还涉及一种用于筛选化合物中和病毒的能力的体外方法。中和病毒的能力的体外方法。中和病毒的能力的体外方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】确定是否存在中和病毒的抗体的方法和筛选化合物中和病毒能力的体外方法


[0001]本专利技术提供一种用于从受试者获得的样品中确定是否存在中和病毒的抗体的方法以及相应的试剂盒。本专利技术还涉及一种用于筛选(a)化合物中和病毒能力的体外方法。

技术介绍

[0002]病毒感染个体的血清可以含有病毒特异性抗体，其是重要的诊断分子。这些抗体的功能可以变化，但是生物学上最相关的是所谓的“中和抗体”，其可以中和病毒感染性并因此直接有助于病毒清除。病毒诊断还包括在全世界范围内的专门实验室中进行的此种病毒中和抗体的定量。
[0003]然而，用于测量病毒中和抗体的测定需要精细的细胞培养模型，并且是冗长耗时的任务。所有标准测定都需要处理感染性病毒，并且根据病毒类型，需要基于细胞病变效应(CPE)的读数。CPE可以在培养细胞单层中以噬斑的形式出现，所述培养细胞需要对病毒感染敏感或允许，并且可以支持病毒的复制，然而，病毒并非总是需要复制才引起CPE。CPE也可在不支持病毒复制的病毒感染细胞中观察到。例如，某些病毒在感染后数小时内在培养物中诱导细胞融合。这是由于引入本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于从受试者获得的样品中确定是否存在病毒中和抗体的方法，包括以下步骤：
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提供细胞外囊泡和标记，其中所述细胞外囊泡是非感染性的，包含一种或多种病毒糖蛋白并且经由所述标记是可检测的，
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使所述样品与所述细胞外囊泡和能够摄取所述细胞外囊泡的细胞接触，其中所述一种或多种病毒糖蛋白能够靶向所述细胞的受体并且是融合的，以及
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确定所述细胞是否摄取所述细胞外囊泡；其中，与对照相比，所述细胞对所述细胞外囊泡的摄取减少，其中，所述细胞和所述细胞外囊泡接触，但没有所述样品，这表明存在病毒中和抗体。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述标记是蛋白质，选自β
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半乳糖苷酶、β
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内酰胺酶、β
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葡糖醛酸糖苷酶、荧光素酶及其任意组合。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述受体选自血管生成素转化酶2(ACE2)、CD46、CD150(信号淋巴细胞激活分子SLAM)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、T细胞免疫球蛋白粘蛋白结构域
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1(TIM
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1)、唾液酸化
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(α
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2，3)
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半乳糖苷酶受体、唾液酸化
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(α
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2，6)
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半乳糖苷酶受体、CD21和MHC II类受体。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述标记是裂解蛋白，其中所述裂解蛋白的第一部分包含在所述细胞外囊泡中，并且所述裂解蛋白的第二部分包含在所述细胞中，并且其中所述第一部分和所述第二部分能够形成复合物。5.根据前述权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡经由所述标记是可检测的，其中所述标记连接至包含在所述细胞外囊泡中的细胞外囊泡蛋白。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞外囊泡包含所述细胞外囊泡蛋白和作为融合蛋白的所述标记。7.根据权利要求5或权利要求6所述的方法，其中所述细胞外囊泡蛋白选自四跨膜蛋白；优选CD63、CD40、CD81、CD9、CD37、CD53、CD54、CD151、CD82和TSPAN
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8；整联蛋白；优选α
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3、α
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5、α
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V、α
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6、β
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1或β
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3整联蛋白；和I型膜蛋白。8.根据权利要求4所述的方法，其中包含在所述细胞外囊泡中的所述裂解蛋白的所述第一部分连接至所述细胞外囊泡的细胞外囊泡蛋白，或连接至所述细胞外囊泡的病毒衣壳蛋白或病毒核蛋白，或连接至所述细胞外囊泡的病毒被膜蛋白，或连接至所述细胞外囊泡的所述一种或多种病毒糖蛋白，优选地，其中所述裂解蛋白的所述第一部分连接至选自以下的所述细胞外囊泡的蛋白：四跨膜蛋白；更优选为CD63、CD40、CD81、CD9、CD37、CD53、CD54、CD151、CD82和TSPAN
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8；整联蛋白；更优选为α
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3、α
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5、α
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V、α
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6、β
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1或β
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3整联蛋白；和I型膜蛋白，和/或其中包含在所述细胞中的所述裂解蛋白的所述第二部分连接至选自以下的所述细胞的蛋白：四跨膜蛋白；优选为CD63、CD40、CD81、CD9、CD37、CD53、CD54、CD151、CD82和TSPAN
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8；整联蛋白；优选为α
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3、α
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5、α
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V、α
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6、β
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1或β
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3整联蛋白；SNX3、Pleckstrin结构域、N
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肉豆蔻酰化结构域和I型膜蛋白。9.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述细胞外囊泡蛋白是病毒胞外囊泡蛋白，优选选自以下的病毒胞外囊泡蛋白：冠状病毒蛋白；更优选SARS
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CoV病毒的E
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、M
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、S
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或N
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蛋白，甚至更优选SARS
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CoV
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2病毒的E
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、M
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、S
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或N
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蛋白；Epstein
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Barr病毒蛋白、麻疹病毒蛋白、流感病毒蛋白、副流感病毒蛋白、人呼吸道合胞病毒蛋白、埃博拉病毒、汉坦病毒蛋白、
拉沙病毒蛋白及其任何截短形式。10.根据前述权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡经由所述标记是可检测的，其中所述标记连接至病毒衣壳蛋白或病毒核蛋白，并且其中所述一种或多种病毒糖蛋白和所述病毒衣壳蛋白或所述病毒核蛋白来自相同的病毒。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述病毒衣壳蛋白选自HIV
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1和疱疹病毒的病毒衣壳蛋白，或者其中所述病毒核蛋白选自来自以下的病毒核蛋白：Epstein
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Barr病毒、麻疹病毒、流感病毒、副流感病毒、人呼吸道合胞病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、汉坦病毒、拉沙病毒和SARS
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CoV病毒的核蛋白N，优选SARS
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CoV
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2病毒的核蛋白N。12.根据前述权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡经由所述标记是可检测的，其中所述标记连接至所述细胞外囊泡的所述一种或多种病毒糖蛋白。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述病毒中和抗体是针对选自以下病毒的中和抗体：冠状病毒；优选SARS
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CoV病毒，更优选SARS
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CoV
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2病毒；Epstein
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Barr病毒、麻疹病毒、流感病毒、副流感病毒、人呼吸道合胞病毒、埃博拉病毒、汉坦病毒和拉沙病毒。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：W，
申请(专利权)人：艾克西米恩生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：