一种间接ELISA方法技术

本发明专利技术公开了一种间接ELISA方法，所述间接ELISA方法用于检测猪血清样品中的ApxI毒素抗体水平，所述间接ELISA方法包括如下步骤：步骤S1：准备抗原；步骤S2：确定所述ELISA方法的条件；步骤S3：测定阳性标准品获得OD

【技术实现步骤摘要】
一种间接ELISA方法


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种间接ELISA方法。

技术介绍

[0002]猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)是引起猪传染性胸膜肺炎)procine contagious pleuropneumoniae，PCP)的革兰阴性病原菌，仅感染猪。根据APP表面荚膜聚合物的结构差异，胸膜肺炎放线杆菌目前被划分为18个血清型，19型也有相关文献记载。不同国家和地区流行血清型和范围不完全相同，在我国呈全国流行态势，主要毒株血清型为3、7、1和5型。
[0003]早期针对APP的实验室诊断方法为间接血凝(IHA)和补体结合试验(CFT)，敏感性较低；细菌分离PCR鉴定能对APP进行分型，但效率低且费时；ApxIV仅能在APP感染猪体时诱导表达，在体外培养不表达，猪接种APP灭活疫苗也不能诱导产生针对ApxIV毒素的抗体，因此ApxIV
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ELISA检测方法用于鉴定是否为野毒感染。
[0004]Apx毒素属于RTX毒素本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间接ELISA方法，其特征在于，所述间接ELISA方法用于检测猪血清样品中的ApxI毒素抗体水平，所述间接ELISA方法包括如下步骤：步骤S1：准备抗原，所述抗原由Rosetta
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pColdI
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sumo
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AI2表达后纯化所得；步骤S2：确定所述ELISA方法的条件，所述条件包括：抗原包被浓度为1μg/mL、血清稀释度为1:160、包被条件为4℃过夜、封闭液为5％脱脂乳、封闭条件为37℃3h、血清作用条件为37℃1h、酶标抗体稀释度为1:15000、酶标抗体的作用条件为37℃30min和显色时间为37℃10min；步骤S3：测定阳性标准品获得OD
450nm
的平均值X和标准差S，确定所述间接ELISA方法的阴阳性临界值，所述阴阳性临界值包括阳性临界值和阴性临界值，所述阳性临界值为X+3S，所述阴性临界值为X+2S；步骤S4：测定待测样品，若待测样品的OD
450nm
的值大于等于阳性临界值时，则判定所述待测样品为阳性；若待测样品的OD
450nm
的...

【专利技术属性】
技术研发人员：高新乐，李玉峰，耿琰，车巧林，缪芬芳，胡静雅，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：