一种基于ASFVp72保护性抗原的间接ELISA方法的建立技术

本发明专利技术公开了一种基于ASFV p72保护性抗原的间接ELISA方法的建立，属于生物工程技术领域，该ASFV p72保护性抗原的间接ELISA方法包括下列步骤：构建重组质粒pET

【技术实现步骤摘要】
一种基于ASFV p72保护性抗原的间接ELISA方法的建立


[0001]本专利技术属于生物工程
，尤其涉及一种基于ASFV p72保护性抗原的间接ELISA方法的建立。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种烈性传染病，急性型临床上表现为高热、沉郁、厌食、皮肤发绀、各脏器出血，发病率和病死率可高达100％。该病自2018年首次传入我国并迅速大范围蔓延，对我国养猪业构成了重大威胁。ASFV为有囊膜的双链DNA病毒，是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成员。该病毒基因组全长170
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194kb，编码150
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200种蛋白。由于目前仍缺乏有效的ASF疫苗，早期的猪群检测及生物安全防控仍是预防ASF的主要手段。而ELISA抗体水平的检测方法能够准确及时的检测猪体内病毒抗体水平，判断猪群感染情况从而有助于更有效的防控非本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于ASFV p72保护性抗原的间接ELISA方法的建立，其特征在于，该方法能检测抗ASFV p72的保护性抗体，包括下列步骤：步骤一、重组阳性质粒的构建与合成：以本实验室获得并保存的重组质粒 pMD18T
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p72为模板，用ASFV
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p72Δ的引物扩增目的基因，将纯化好的目的基因插入pET
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28a载体，然后经阳性克隆筛选和测序鉴定得到重组表达质粒pET
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28a
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p72Δ；步骤二、重组蛋白p72Δ诱导表达及蛋白纯化：将pET
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28a
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p72Δ重组质粒转化至原核表达感受态Rosetta细胞中，诱导表达目的蛋白，通过镍柱亲和层析法进行纯化，利用SDS
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【专利技术属性】
技术研发人员：夏平安，陈雨，张宜娜，陈静，李梦娟，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：